低雌激素性原发闭经和卵巢早衰25例骨代谢状况观察

本文采用 GMY-1型骨密度测量仪对10例低雌激素性原发闭经和15例卵巢早衰妇女进行桡骨骨矿含量(BMC)的测定,同时测定血碱性磷酸酶(AKP)和空腹尿钙与肌酐比值(Ca/Cr).发现前者 BMC 的水平低于后者,差异有显著性,且较正常对照组和自然绝经组为低;其空腹尿 Ca/Cr 比值均值的水平显著低于后者,但较正常对照组和自然绝经组为高;血中 AKP 的水平前者高于后者及正常对照组,均有显著性差异.卵巢早衰组 BMC 的水平显著高于自然绝经组,其空腹尿 Ca/Cr 比值均值的水平高于其他各组,均有显著性差异,但血中 AKP 水平均低于其他各组.由此提示:两组患者骨质吸收的速度均大于其相应生成的速度,随着年龄的增加均有过早发生骨质疏松的倾向.故应引起重视并及早予以防治。     

MTT法分析培养成骨细胞的存活和增殖能力

用ＭＴＴ法测定离体培养的成骨细胞存活与增殖能力。并观察１３７Ｃｓγ线对成骨细胞生长的影响。细胞接受０、３、６、９、１２Ｇｙ照射，培养至第７天，增殖率分别为４１６、３３６、２７５、１４７、１０８％。结果表明：１３７ＣＳγ线剂量高于３Ｇｙ成骨细胞增殖受到显著抑制，９Ｇｙ以上，则基本抑制其增殖。     

上海市儿童青少年桡、尺骨的矿物质含量分析

本文报告用单光子吸收技术对上海市4～19岁3626名男女桡、尺骨骨矿含量的测定结果。4～19岁桡、尺骨骨矿含量是随年龄逐渐增加。年增加值男性高于女性,14～19岁男性骨矿含量高于女性的程度随年龄而增加。注意少儿时期骨矿含量的增长,提高骨矿含量峰值是儿童生长发育的保健内容之一。     

成纤维生长因子(FGF) 23基因沉默对甲状旁腺激素(PTH)促成骨细胞分化作用的影响

 目的  研究内源性成纤维生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)对甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)促成骨细胞分化作用的影响。方法  采用酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,应用小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术(RNAi)沉默成骨细胞FGF23表达,应用MTT法和PNPP法检测细胞增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)活性,应用real-time RT-PCR法检测其FGF23、ALP和骨钙素(osteocalcin,OCN)等基因mRNA水平,研究PTH对培养成骨细胞和FGF23基因沉默细胞的作用。结果  rhPTH1-34对培养成骨细胞增殖促进作用明显,分化促进作用弱。1×10-10~1×10-8 mol/L rhPTH1-34 作用3天,细胞增殖率增加31.6%~50.5% (P<0.05),而细胞比活性未见明显改变。同时其ALP和OCN转录水平轻度上调,分别较对照组增加35%(P<0.05)和16%(P>0.05)。rhPTH1-34上调成骨细胞FGF23 mRNA水平(4倍),该作用可被针对FGF23特异的shRNA转染所抑制。FGF23基因沉默后PTH促分化作用明显增强,其ALP和OCN mRNA水平分别较对照组增加1.8倍(P<0.05)和5.8倍(P<0.05),显示内源性FGF23对PTH促分化的干扰作用。结论  内源性FGF23可能参与PTH促分化作用的调节,FGF23上调可干扰PTH的促成骨细胞分化作用。     

雌激素水平对大豆苷原(DAI)促大鼠成骨细胞分化作用的影响

 目的  观察基础雌激素(estrogen)水平对大豆苷原(daizein,DAI)促成骨细胞分化作用的影响。方法  采用酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,通过培养液中添加17β-雌二醇改变培养微环境(包括空白对照)雌激素水平,应用MTT法和对硝基苯磷酸盐(p-nitropheny-phosate,PNPP)法检测细胞增殖率和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,应用real-time PCR法检测其雌激素受体α(ERa)、雌激素受体β(ERβ)和过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)γ的mRNA水平变化,研究雌激素基础水平变化对DAI促成骨细胞分化作用的影响。结果  培养环境中雌二醇水平升高致DAI的促分化作用减弱。其中100 nmol/L DAI组ALP比活性较对照组的增幅由雌激素补充前的23%分别降至8%(17β-雌二醇为100 pmol/L)和-11%(17β-雌二醇为1 000 pmol/L),显示基础雌激素水平对DAI促分化的拮抗作用。为避免培养液中血清雌激素的可能影响,进一步采用去激素血清培养(含2%去激素胎牛血清)。此时补充17β-雌二醇至100 pmol/L,DAI各剂量组细胞ALP比活性较对照组明显增加(16%~21%,P<0.05)。继续补充雌激素至1 000和10 000 pmol/L 时,其作用反而减弱。该结果显示,DAI促成骨细胞分化作用与雌激素基础水平有关,低雌激素状态(≤100 pmol/L)可增强其作用。为进一步探索其作用机制,我们初步观察了雌激素(100 pmol/L)和DAI(100 nmol/L)单独或联合作用下成骨细胞ERa、ERβ和PPARγ受体表达变化。结果显示,100 pmol/L 17β-雌二醇明显上调ERβ表达,并部分抵抗DAI下调ERβ的作用。结论  DAI的促成骨分化作用与基础雌激素水平有关,低雌激素(≤100 pmol/L)状态有利于DAI的促分化作用,而雌激素水平升高可减弱其促分化作用。     

大豆苷原（DA）对成骨细胞雌激素受体（ER）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）

 目的 研究大豆苷原(daidzein,DA)对成骨细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ (peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)表达的调节作用,并观察雌激素对这种调节的影响。方法 小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外低血清(α-MEM,含2% FBS)培养,分别用0.1和10 μmol/L的DA处理,采用实时定量PCR或Western blot分析细胞ERα、ERβ和PPARγ的表达变化。加入浓度均为0.1 μmol/L的ER拮抗剂ICI182780或PPARγ拮抗剂GW9662,观察ER和PPARγ在DA调节中的作用。为观察雌激素的影响,采用无血清培养,在10 nmol/L 17β-雌二醇(E2)条件下研究DA对细胞受体表达的作用。结果 DA抑制体外培养成骨细胞ER表达,而刺激其PPARγ表达。0.1和10 μmol/L的DA分别下调ERα 蛋白水平44%和38% (P<0.05),下调ERβ蛋白水平50%(P<0.05)和31% (P<0.05),上调PPARγ 74%和78% (P<0.05)。 ICI182780可阻断DA对ERα转录水平的抑制作用,DA对成骨细胞ERβ mRNA水平的下调无统计学意义(P=0.087 4);GW9662可阻断DA对PPARγ表达的上调作用,提示成骨细胞ER和PPARγ参与自身表达调节。在10 nmol/L 17β-雌二醇条件下,DA对无血清培养的成骨细胞ERα转录水平的抑制作用由28.0%～29.6%(P<0.05)增强至74.0%～82.8%(P<0.01),其对ERβ表达的抑制作用也明显增强,而对PPARγ的上调作用几乎丧失。结论 DA可通过调节ERs和PPARγ等受体表达间接影响成骨细胞的药物反应,雌激素可明显影响DA的受体调节作用。DA对细胞受体表达的调节作用可能是其对成骨细胞时间相关双相调节的重要机制之一。     

健康人增龄过程中血小板胞浆内游离钙浓度的改变

目的 探讨健康人增龄过程中血小板内游离钙浓度的改变及其病理生理意义。方法 以Fura-z为钙敏感指示剂，应用荧光分光光度计(日立F-4000型)测定17名50～59岁、8名≥60岁男性血小板胞浆游离钙浓度，并以14名20～39岁健康男性为对照。结果 随年龄增高血小板游离钙明显增高，20—39岁血小板游离钙为169．66±36.46nmol/L：50—59岁为237．40±31.0(P<0．01)．≥60岁为367．36±220.0(P<0.05)。结论 血小板胞浆游离钙浓度随增龄而升高，并参与了衰老和老年人血液高凝性疾病的病理生理变化。