脂氧素对滋养细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的研究脂氧素(lipoxinA4,LXA4)在孕妇血清中的表达及其对滋养细胞氧化损伤的保护作用和作用机制.方法 细胞实验分为6组,对照组;脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)组:10 μg/ml LPS作用24 h;干预组:10 μg/ml LPS+100 nmol/L LXA4作用24 h;LXA4组:100 nmol/L LXA4作用24 h;拮抗组:10 μg/ml LPS+100 nmol/L LXA4+100 μmol/L N-叔丁氧羰基吡咯烷(N-tert-butoxycarbonyl-2-pyrrolidine,BOC-2)作用24 h;BOC-2组:10μg/ml LPS+100 μmol/L BOC-2 作用24 h.采用酶联免疫吸附试验检测正常孕妇与子痫前期患者血清LXA4含量;以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯为荧光探针检测滋养细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;逆转录-聚合酶链反应检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD) mRNA的表达;Western印迹分析SOD、转录因子NF-E2相关因子2(NF-E2-related factor,Nrf2)的蛋白表达水平;黄嘌呤氧化酶法测定滋养细胞中SOD活性.结果 (1)子痫前期患者血清LXA4水平为(165.53±18.89) pg/L,与正常孕妇[(545.67±30.91) pg/L]相比明显下降(t=40.64,P<0.01).(2)LPS组与对照组相比,滋养细胞内二氯荧光素(dichlorofluorescein,DCF)密度值明显升高(P<0.01),DCF密度值从53.00±3.08 上升至77.00±5.83( t=8.14,P<0.01);胞核中Nrf2蛋白、SOD mRNA和蛋白表达均显著下降(t分别为34.11、25.61和17.93,P均<0.01);滋养细胞上清中的SOD含量明显下调(t=12.16,P<0.01).(3)干预组与LPS组相比,滋养细胞内DCF密度值明显下降,DCF密度值从77.00±5.83降至62.00±3.39(t=4.97,P<0.01),胞核中Nrf2蛋白、SOD mRNA表达显著上升(t分别为11.74和13.17,P均<0.01),SOD蛋白表达也有所升高(t=4.67,P<0.05),滋养细胞上清中的SOD含量明显增加,酶活力上升至(8.93±0.53) U/ml(t=14.76,P<0.01).(4)拮抗组与干预组相比,滋养细胞上清中SOD含量下降至(6.23±0.41) U/ml(t=9.03,P<0.01),但仍高于LPS组(t=6.10,P<0.01);BOC-2组SOD含量为(4.90±0.32) U/ml,与LPS组相比差异无统计学意义(t=0.79,P>0.05).结论 LXA4可明显减轻LPS引起的胎盘滋养细胞氧化损伤,且LXA4可通过脂氧素受体(lipoxinA4 receptor,ALX-R)激活Nrf2/抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)信号通路来发挥抗氧化损伤的作用.

Abstract：

Objective To explore lipoxinA4 (LXA4) expression in maternal serum of pregnant women and the protective effect and mechanism of LXA4 on trophoblastic cells from oxidative injury. Methods Trophoblastic cells were randomized into six groups: Control group; Lipopolysaccharides (LPS) group, cells were stimulated by 10 μg/ml LPS for 24 h; Intervention group, cells stimulated by LPS were treated with 100 nmol/L LXA4 for 24 h; LXA4 group, cells were treated with 100 nmol/L LXA4 for 24 h; Antagonistic group, cells stimulated by LPS were treated with 100 nmol/L LXA4 plus 100 μmol/L N-tert-butoxycarbonyl-2-pyrrolidine (BOC-2) for 24 h; BOC-2 group, trophoblastic cells stimulated by LPS were treated with 100 μmol/L BOC-2 for 24 h. The serum concentration of LXA4 in normal group and preeclampsia group was detected by ELISA. The intracellular formation of reactive oxygen species (ROS) was detected by 2,7-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) as a fluorescent probe. SOD mRNA was analyzed by RT-PCR. SOD and Nrf2 protein expressions were analyzed by Western blot. The levels of SOD in trophoblastic cells were detected by using detection kit. Results (1) The serum concentration of LXA4 was significantly lower in preeclampsia group (165.53±18.89) pg/L than in the control [(545.67±30.91) pg/L, P<0.01]. (2) Compared with control group, the levels of ROS in LPS group were significantly higher, DCF density of trophoblastic cells increased from 53.00±3.08 to 77.00±5.83 (P<0.01). The expression of nuclear Nrf2 protein, SOD mRNA and protein in LPS group were obviously decreased (P<0.01). The levels of SOD in LPS group were also significantly lower (P<0.01). (3) Compared with LPS group, the levels of ROS in intervention group were significantly lower, DCF density of trophoblastic cells decreased from 77.00±5.83 to 62.00±3.39 (P<0.01). The expression of nuclear Nrf2 protein, SOD mRNA in intervention group were obviously increased (P<0.01), so did the SOD protein expression (P<0.05). The levels of SOD were significantly increased from (4.77±0.34) U/ml to (8.93±0.53) U/ml (P<0.01). (4) The levels of SOD in antagonistic group were lower than in intervention group, but still higher than LPS group. [(6.23±0.41) U/ml vs (8.93±0.53) U/ml (P<0.01) or (4.77±0.34) U/ml (P<0.01)]. No significant difference was found in the levels of SOD between BOC-2 and LPS group (P>0.05). Conclusions LXA4 can significantly reduce the oxidative stress of placental trophoblastic cells stimulated by LPS. LXA4 can bind to lipoxin receptors and activate Nrf2-ARE signaling pathway playing a protective effect. So LXA4 in pregnant women can affect the oxidative stress of placenta.     

甲状腺上动脉峰值流速与Graves病患者甲状腺激素水平及术中出血量关系的研究

目的研究甲状腺上动脉峰值流速(STA-PSV)与Graves病患者甲状腺激素水平及甲状腺切除术中失血量的关系。方法选取2010年1月到2013年12月确诊并且将实施甲状腺切除术的Graves病患者110例。根据超声检测STA-PSV值将患者分为三组:50 cm/s组、50~100 cm/s组以及100 cm/s组。术前测定各组患者的血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺素(TSH)水平,记录患者术前服用抗甲状腺药物时间、术中出血情况和术后并发症,并进行统计学分析。结果随着患者的STA-PSV的增加,FT3、FT4和TSH也升高,而抗甲状腺药物使用时间减少,术中出血量增多,术后并发症发生率增加(P0.05)。结论 Graves病患者的STA-PSV与甲状腺激素水平、手术失血量以及术后并发症发生率呈正相关。建议将STA-PSV作为甲状腺手术术前评估的常用指标。     

重度子痫前期孕妇脂氧素A4及11β羟基类固醇脱氢酶2的表达及意义

目的:检测重度子痫前期孕妇外周血中脂氧素A4(LXA4)水平以及胎盘组织中11β羟基类固醇脱氢酶2(11β-HSD2)表达,探讨LXA4和11β-HSD2参与重度子痫前期发生的机制。方法:选择在本院产前检查并分娩的妊娠妇女共45例,其中正常妊娠组20例,重度子痫前期组25例。ELISA法测定孕妇外周血血浆中LXA4水平;酶化学发光分析法检测孕妇血清中游离皮质醇浓度;免疫组织化学染色法检测胎盘组织11β-HSD2蛋白表达;实时荧光定量RT-PCR法测定胎盘组织11β-HSD2 mRNA的表达;分析LXA4与11β-HSD2蛋白或mRNA、皮质醇与平均动脉压之间的相关性。结果:重度子痫前期组与正常妊娠组相比,LXA4水平明显降低(P<0.05),皮质醇浓度虽有升高,但无显著性差异(P>0.05);胎盘组织中11β-HSD2蛋白及mRNA表达均显著低于正常妊娠组(P<0.05);两组孕妇的LXA4水平与11β-HSD2蛋白表达量、LXA4水平与11β-HSD2 mRNA表达量、皮质醇与平均动脉压均无相关性(P均>0.05)。结论:LXA4和11β-HSD2参与重度子痫前期的发生。     

LC胆囊管剖口处理胆囊管结石

腹腔镜胆囊切除术(LC)是目前胆囊切除手术的金标准[1]。胆囊管结石的处理是重要步骤,处理不当可能引起结石残余、胆管损伤或胆总管结石等并发症。收集2011年1月—2012年1月两院54例行LC的临床资料,分别采用胆囊管剖口法或胆囊管离断法处理胆囊管结石,总结报告如下。     

脂氧素A4、白三烯C4和5-脂氧合酶在重度子痫前期孕妇外周血中的表达及意义

目的 探讨脂氧素A4、白三烯C4和5-脂氧合酶在不同类型重度子痫前期孕妇外周血中的表达及其意义. 方法 收集2010年12月至2011年6月在本院产前检查并分娩的单胎妊娠孕妇共45例,其中正常妊娠组20例,早发型重度子痫前期组10例,晚发型重度子痫前期组15例.酶联免疫吸附试验测定血浆中脂氧素A4和白三烯C4的水平,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应技术检测外周血白细胞中5-脂氧合酶mRNA的表达水平,采用方差分析及LSD-t检验比较组间脂氧素A4、白三烯C4和5-脂氧合酶mRNA的差异,脂氧素A4、白三烯C4和5-脂氧合酶mRNA表达水平间的相关性采用直线相关分析. 结果 早发型和晚发型重度子痫前期组孕妇血浆脂氧素A4水平分别为(355.3±116.0)pg/ml和(389.7±117.5)pg/ml,均较正常妊娠组[(555.0±139.8) pg/ml]明显降低(t=-4.03和-3.77,P均＜0.05).白三烯C4水平在早发型、晚发型重度子痫前期组和正常妊娠组分别为(591.3±185.5) pg/ml、(510.3±197.1) pg/ml和(496.9±158.8) pg/ml,3组间差异无统计学意义(F=0.889,P＞0.05).白细胞中5-脂氧合酶mRNA表达水平在早发型、晚发型重度子痫前期组和正常妊娠组分别为4.8±2.0、4.4±1.2和4.2±1.9,3组间差异无统计学意义(F=0.311,P＞0.05).各组脂氧素A4、白三烯C4水平及5-脂氧合酶mRNA表达水平间均无相关性(P均＞0.05).结论 脂氧素A4早且明显降低可能参与早发型重度子痫前期的发生.     

妊娠合并重度肺动脉高压28例临床分析

目的:探讨妊娠合并重度肺动脉高压患者的妊娠结局。方法:对2000年11月至2011年3月我院产科收治的28例妊娠合并重度肺动脉高压患者的临床资料进行回顾性分析。根据发生重度肺动脉高压的孕周,将患者分为4组:<28周为Ⅰ组,28～31+6周为Ⅱ组,32～35+6周为Ⅲ组,≥36周为Ⅳ组。结果:原发性肺动脉高压(PPH)1例,继发性肺动脉高压(SPH)27例(风湿性心脏病16例,先天性心脏病11例);心功能Ⅰ～Ⅱ级4例,心功能Ⅲ～Ⅳ级24例;足月分娩12例,早产10例,中孕引产6例;剖宫产21例,阴道分娩1例;产妇死亡2例,极低出生体重儿1例,新生儿窒息5例,新生儿死亡1例。Ⅲ组患者肺动脉压力明显高于Ⅰ组、Ⅳ组,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅰ组患者医源性胎儿丢失率明显高于Ⅲ组、Ⅳ组,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅳ组患者足月分娩明显多于Ⅱ组、Ⅲ组,差异有统计学意义(P<0.05);新生儿窒息率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:妊娠合并重度肺动脉高压患者,孕32～35+6周肺动脉压力达高峰;围生儿结局与发生重度肺动脉高压的孕周、心功能级别有关,发生重度肺动脉高压孕周越小,心功能越差,医源性胎儿丢失率越高,围生儿结局越差;早中期妊娠患者建议尽早终止妊娠,晚期妊娠以剖宫产为宜。     

脂氧素受体激动剂5(S),6(R),7-三羟基庚酸甲酯对地塞米松所致小鼠胎儿生长受限的保护作用及可能机制

目的 探讨5(S),6(R),7-三羟基庚酸甲酯[5(S),6(R),7-trihydroxyheptanoic acid methyl ester,BML-111]对地塞米松所致小鼠胎儿生长受限的影响及可能机制. 方法 60只清洁级ICR雌性小鼠受孕后随机分为对照组、地塞米松组和BML-111组.地塞米松组孕鼠妊娠第9天开始皮下注射地塞米松(5 mg/kg),2h后皮下注射生理盐水(1 mg/kg) ;BML-111组孕鼠妊娠第9天开始皮下注射地塞米松,2h后腹腔注射BML-111(1 mg/kg);对照组孕鼠相应时间皮下注射生理盐水(1 mg/kg).均为每天1次,连续6d.妊娠第18天眼球取血后处死孕鼠,取胎盘和子宫组织,免疫组织化学方法检测胎盘组织11β-羟基类固醇脱氢酶2(11β-hydroxysteroid dehydrogenase 2,11β-HSD2)蛋白表达;逆转录聚合酶链反应技术检测胎盘组织11β-HSD2、白细胞介素- 1β(in terleukin-1β,IL-1β)及子宫组织脂氧素A4受体——甲酸基肽受体3(formyl peptide receptor 3,FPR3) mRNA的表达;酶联免疫吸附试验检测孕鼠血清脂氧素A4水平.组间差异比较采用单因素方差分析及两两检验.结果 地塞米松组胎鼠平均体重为(0.823±0.054)g,低于对照组[(1.103±0.218)g]及BML-111组[(0.992±0.207)g],差异均有统计学意义(t分别为-4.108和-2.890,P均＜0.05).免疫组织化学方法检测显示,11β-HSD2表达于绒毛部位合体滋养层细胞胞质内,地塞米松组11β-HSD2蛋白表达强度较对照组及BML-111组低(0.030±0.019与0.058±0.015和0.049±0.025),差异均有统计学意义(t分别为-3.107和-2.211,P均＜0.05).地塞米松组11β-HSD2 mRNA也较对照组及BML-111组低,分别为0.457±0.062、0.943±0.057和0.698±0.071,差异有统计学意义(t分别为-9.418和-4.617,P均＜0.05).地塞米松组IL-1β mRNA(0.543±0.103)介于对照组(0.710±0.085)及BML-111组(0.229±0.031)之间,差异有统计学意义(t分别为-3.736和7.025,P均＜0.05).地塞米松组FPR3 mRNA(0.323±0.019)较对照组(0.857±0.057)及BML-111组(0.499±0.050)低,差异有统计学意义(t分别为-14.630和-4.822,P均＜0.05).地塞米松组孕鼠血清脂氧素A4浓度[(64.463±22.144)pg/ml]低于对照组[(101.610±24.916)pg/ml],差异有统计学意义(t=3.152,P＜0.05). 结论 孕鼠过早过多接触地塞米松可导致胎儿生长受限.BML-111可能通过调节11β-HSD2的表达,从而改善糖皮质激素在孕鼠体内的代谢而对地塞米松所致胎儿生长受限起保护作用.     

弥漫性子宫平滑肌瘤病1例

弥漫性子宫平滑肌瘤病是一种较罕见的疾病,多发生于育龄期女性,发病子宫弥漫性、对称性增大,大量约0. 5～3. 0 cm的肌瘤累及子宫体全层,甚至凸向子宫腔内,导致经量增多和不孕等.经典的治疗方法是行子宫全切除术,要保留子宫比较困难[1-3].我院为一例有生育要求的弥漫性子宫平滑肌瘤病的育龄患者行开腹子宫肌瘤剥除术,共剥...     

周围型肺癌CT征象与p53基因及生存率的关系

【目的】研究周围型肺癌CT表现与p53基因及生存率的关系。【方法】应用链菌素亲生物素一过氧化酶连接法的快速免疫组化和薄层CT扫描技术．探讨67例周围型肺癌CT征象与p53基因表达异常和术后生存率的关系。【结果】肺癌瘤体≥3cm．深分叶、有棘状突起、伪足征、淋巴结转移者与p53基因异常表达相关。肺癌瘤体≥3cm、深分叶、伪足征、有淋巴转移者与术后生存率低有关。【结论】薄层CT扫描征象和周围型肺癌p53基因的异常表达与生存率密切相关。     

甲状腺良性结节单侧腺叶切除术后血清T3、T4、TSH的变化及临床意义

目的探究甲状腺良性结节患者行单侧腺叶切除术后血清T3、T4及TSH等的变化情况。方法选取2010年3月～2012年5月来院就诊的110例行单侧腺叶切除术的甲状腺良性结节患者,依据患者的年龄分为老年组（年龄≥60岁）62例及中青组（年龄〈60岁）48例;依据患者术前的促甲状腺激素（TSH）分为较低组（TSH≤1.6mIU/L）67例及较高组（TSH＞1.6mIU/L）43例。分别于术前及术后3个月抽取患者的静脉血检测其血清T3、T4、fT3、fT4水平。结果治疗前各组指标比较均未见明显差异（P＞0.05）;治疗后3个月老年组患者的fT4较中青组明显下降（P〈0.05）;较高组患者的T3、T4、fT3、fT4水平比较低组明显降低（P〈0.05）。结论甲状腺单侧腺叶切除患者的残存健侧腺叶可在一定程度上代偿甲状腺的功能,但老年患者及基础TSH较高患者的代偿能力较差,一般需要给予药物替代治疗。