奥沙利铂对 K562细胞体外生长的影响

目的:观察奥沙利铂对人白血病K562细胞的作用.方法:检测奥沙利铂对K562细胞作用的时间效应和剂量效应,在电镜下观察奥沙利铂作用后细胞形态变化;用流式细胞仪分析细胞周期的改变.结果:随着作用时间及药物浓度的增加,奥沙利铂对K562细胞的增殖抑制作用就越明显.0.016mmol/L奥沙利铂作用72h,K562细胞生长抑制率达85%,形态学及流式细胞仪分析显示G2/M期阻滞和细胞凋亡.结论:奥沙利铂诱发的人白血病细胞的凋亡与细胞分裂期阻滞密切相关.     

生长抑素对大鼠胰腺腺泡细胞内骨架蛋白F-actin分布和细胞外分泌功能的影响

目的研究生长抑素(somatostatin,SS)对八肽胆囊收缩素(cholecystokinin-octapeptide,CCK-8)刺激的大鼠胰腺腺泡细胞内骨架蛋白F-actin分布变化和细胞外分泌功能的影响。方法分离的19只SD大鼠胰腺腺泡细胞,设空白对照组、不同浓度CCK-8组(10-12、10-11、10-10、10-9、10-8mol/L)、SS组(10-7mol/L)、SS+CCK-8组。SS与不同浓度的CCK-8共同孵育胰腺腺泡细胞30min,用淀粉酶、胰蛋白酶试剂盒检测胰腺腺泡细胞淀粉酶分泌率、胰蛋白酶活性,用激光共聚焦显微镜观察细胞内F-actin分布的变化。结果SS稳定了细胞内骨架蛋白结构,明显提高F-actin近细胞顶部/侧基底部的比值(P<0.05);SS与低浓度的CCK-8(10-11~10-10mol/L)共同孵育胰腺腺泡细胞时,CCK-8诱导的细胞淀粉酶分泌明显被抑制(P<0.05),SS与高浓度CCK-8(10-9~10-8mol/L)共同孵育胰腺腺泡细胞时,缓解了高浓度CCK-8诱导的对细胞淀粉酶分泌的抑制效应;SS降低了CCK-8诱导的胰腺腺泡细胞内胰蛋白酶的活性(P<0...     

PDGF-D和VEGF在胃癌中的表达及其意义

 目的 探讨血小板源性生长因子D（PDGF-D）和血管内皮生长因子(VEGF)在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系。方法 用免疫组织化学(SP法)检测胃组织中PDGF-D和VEGF蛋白的表达,用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测部分胃癌组织标本PDGF-D和VEGF mRNA,分析两者之间的相关性及其与临床病理特征之间的关系。结果 胃癌组织中PDGF-D和VEGF蛋白的表达显著高于癌旁组织和正常胃组织(P<0.05);PDGF-D和VEGF的表达与胃癌的TNM分期、浸润深度及淋巴结转移有关（P<0.05）,PDGF-D的表达还与胃癌的分化程度有关（P<0.05）; PDGF-D和VEGF在mRNA水平和蛋白水平的表达均呈正相关(均P<0.05)。 结论 PDGF-D和VEGF在胃癌组织中特异性高表达,可能在胃癌的发生、发展与转移中起着重要作用。     

仿生电刺激在离体心肌诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化中的作用

目的 探讨仿生电刺激在离体心肌微环境下诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化中的作用.方法 采用改良方法分离培养大鼠MSCs及心肌细胞,并将两者按固定比例共同培养(称为MSCs/心肌细胞共培养体系),按是否给予仿生电刺激分为非电刺激组和电刺激组,刺激组每日给予频率0.5Hz、脉宽5ms、电压10V(电流强度20μA)的仿生电刺激2h,非电刺激组常规培养.每组又以实验干预培养时间(3、5、7d)分为3个亚组.分别于实验的第3、5、7天观察各组细胞生长情况,细胞免疫荧光方法检测各组MSCs细胞cTnT的表达情况,以及各组的cTnT阳性细胞率.结果 MSCs与心肌细胞共培养之后,电刺激组细胞较非电刺激组生长更为良好,且心肌波动频率高.实验第5天非电刺激组MsCs细胞尚无cTnT表达,而电刺激组有少数MSCs细胞出现cTnT表达.实验第7天非电刺激组和电刺激组MSCs均有cTnT表达,电刺激组MSCs细胞cTnT的阳性细胞率(20.98%±5.55%)明显高于非电刺激组(13.20%±3.98%.P<0.05).结论 仿生电刺激可促进离体心肌微环境诱导大鼠MSCs向心肌样细胞分化,使其更早出现心肌样细胞改变,并提高分化效率.     

金雀异黄素增加胃癌BGC-823细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的研究

目的:研究金雀异黄素(genistein,Gen)对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)抑制BGC-823胃癌细胞活性的影响.方法:Gen与5-FU单独及联合作用于胃癌BGC-823细胞24、48及72 h后,采用MTT法测定细胞的活性;Gen与5-FU单独及联合处理胃癌BGC-823细胞72 h后,透射电镜观察细胞超微结构改变,免疫细胞化学法研究凋亡相关基因的蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果:20件μmol/LGen和10tμmol/L 5-FU联合应用对胃癌细胞的生长导致了更显著的增殖抑制作用(P＜0.01);Gen、5-FU单独及联合应用均可诱导BGC-823细胞凋亡;Gen、5-FU联合应用时对BGC-823细胞的凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调和Bax表达上调的作用较单独时明显(P＜0.05).结论:金雀异黄素可能通过上调Bax的表达和下调Bcl-2的表达而增加BGC-823细胞的凋亡,增加5-FU的抗癌活性.金雀异黄素是一种无毒的抗癌药,其与5-FU合用于胃癌患者可能提高化疗的效果.有必要开展金雀异黄素和5-FU合用的临床试验来检验该假设.     

应用流式细胞小球微阵列术法检测趋化因子的变化

目的 探讨流式细胞小球微阵列术（cytometric Bead Array,CBA）检测类风湿性关节炎患者服用灵芝三妙散胶囊后趋化因子白细胞介素-8（IL-8）,调节活化的正常T细胞表达和分泌的因子（RANTES）,γ-干扰素诱导的单核因子（MIG）,单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）,以及γ-干扰素诱导蛋白-10（IP-10）的变化。方法 收集类风湿关节炎患者65例,设立安慰剂组和中药组,采用CBA法检测类风湿性关节炎患者服用灵芝三妙散胶囊后的血浆和全血在体外用脂多糖（LPS）和植物凝血素（PHA）刺激后趋化因子IL-8、RANTES、MIG、MCP-1、以及IP-10的含量,然后比较分析。结果 用CBA法检测类风湿性关节炎患者在服用灵芝三妙散胶囊后,体外试验中药组的IP-10变化的百分率比安慰剂组明显升高（P〈0．05）。结论 CBA法检测血浆趋化因子是一种简便、可靠、灵敏度高、精确的新方法。     

氧化应激在高糖诱导成骨细胞凋亡中的作用

目的：探讨氧化应激在高糖诱导成骨细胞凋亡中的作用。方法：体外培养的MC3T3-E1细胞,分为正常对照组、N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)组、11.0 mmol/L高糖组、11.0 mmol/L高糖+NAC组、22.0 mmol/L高糖组、22.0 mmol/L高糖+NAC组。应用Annexin V-FITC/PI处理不同组别细胞,流式细胞术检测细胞凋亡;Honchest33258 染色观察细胞核形态;采用MTT法检测细胞增殖;采用DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧类（reactive oxygen species,ROS）的生成。结果：①11.0 mmol/L高糖组较正常对照组MC3T3-E1细胞凋亡率显著增加（P=0.004）;22.0 mmol/L高糖组较正常对照组和11.0 mmol/L高糖组MC3T3-E1细胞凋亡率明显增加（P=0.000;P=0.000）。②11.0 mmol/L高糖组较正常对照组MC3T3-E1细胞增殖轻微下降（P=0.305）;与正常对照组和11.0 mmol/L高糖组相比,22.0 mmol/L高糖组MC3T3-E1细胞增殖显著降低（P=0.001;P=0.009）。③11.0 mmol/L和22.0mmol/L高糖组MC3T3-E1细胞胞内ROS水平均明显增加（P=0.000;P=0.000）,但无明显浓度依赖性,抗氧化剂NAC可明显降低ROS水平,改善高糖所致的凋亡增加和增殖下降。结论：高糖可通过增加成骨细胞胞内ROS生成引起MC3T3-E1成骨细胞凋亡增加、增殖下降。     

ChREBP及其靶基因在高糖大鼠非酒精性脂肪肝中的表达

目的探讨碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)及其靶基因乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和脂肪酸合成酶(FAS)在高糖大鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型中的动态表达及作用。方法 SD大鼠32只,随机分为对照组和高糖组。高糖组于4,8,12周处死,对照组于12周处死。HE染色观察肝脏脂肪变性,RT-PCR和Western blot方法测定不同时间点大鼠肝脏组织中ChREBP、ACC、FAS的mRNA表达和蛋白水平,染色质免疫共沉淀法分析不同时间点ChREBP与ACC、FAS基因启动子碳水化合物应答元件(ChRE)结合情况。结果成功构建高糖饮食大鼠NAFLD模型,随着造模时间的延长,肝脂肪程度不断加重,第4,8和12周末高糖组大鼠肝组织ChREBP、ACC、FASmRNA、蛋白及ChRE DNA的表达水平,与对照组差异显著(P<0.01),且随造模时间延长,其表达量显著增加。结论高碳水化合物饮食可增强ChREBP的表达,而ChREBP通过上调ACC、FAS的表达参与了NAFLD的形成过程。     

TSG101-siRNA对肝癌耐药细胞株QGY/CDDP的逆转作用

目的 构建TSG101(tumor susceptibility gene101)小干扰RNA(TSG101-siRNA)的真核表达载体,观察RNA干扰沉默TSG101基因后化疗药物顺铂(CDDP)对肝癌耐药细胞株QGY/CDDP增殖的影响.方法 根据小干扰RNA的设计原则由计算机软件辅助设计TSG101的靶序列,应用DNA重组技术将目的序列克隆入小干扰RNA的表达载体;RT-PCR检测TSG101-siRNA对QGY/CDDP细胞tsg101mRNA表达的影响;Western blot检测TSG101-siRNA对TSG101基因表达蛋白的抑制效率;采用MTT法测定TSG101-siRNA联合化疗药物CDDP对QGY/CDDP的增殖抑制作用.结果 测序显示干扰载体构建成功,TSG101-siRNA能抑制tsg101 mRNA表达,使QGY/CDDP细胞TSG101蛋白的表达下降,抑制QGY/CDDP细胞的增殖,明显增强CDDP对QGY/CDDP的增殖抑制.结论 TSG101-siRNA的真核表达载体能有效地抑制QGY/CDDP细胞的增殖,提高化疗药物CDDP对QGY/CDDP的抑制率,能逆转肝癌耐药细胞株QGY/CDDP对CDDP的耐药性.     

阻断PI3K/Akt信号通路对低氧微环境中BCSCs微球体细胞增殖的影响

目的:探讨LY294002特异性阻断磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/Akt信号通路对低氧条件下乳腺癌干细胞(breast cancer stem cells,BCSCs)微球体细胞增殖的影响。方法:通过无血清悬浮培养技术从人乳腺癌MCF-7细胞中筛选BCSCs微球体,应用免疫荧光染色检测BCSCs相关标志物CD44及CD133的表达,MTT法检测不同浓度LY294002处理后BCSCs微球体细胞的增殖情况,RT-PCR法检测BCSCs微球体细胞中缺氧诱导因子-2α(hypoxia inducible factor-2α,HIF-2α)mRNA的表达,蛋白质印迹法检测BCSCs微球体细胞中HIF-2α、PI3K和磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)蛋白的表达。结果:筛选获得的微球体细胞高表达BCSCs相关标志物CD44和CD133。LY294002能有效抑制低氧条件下BCSCs微球体细胞的增殖,抑制效应在药物作用后72～96h最为明显(P<0.05)。与低氧组比较,低氧+LY294002组微球体细胞中HIF-2αmRNA及PI3K、p-Akt和HIF-2α蛋白表达水平均明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:LY294002通过特异性阻断PI3K/Akt信号通路而有效抑制低氧条件下BCSCs微球体细胞的体外增殖能力。