120例胎儿发育异常的染色体异常情况分析

目的：探讨胎儿发育异常与染色体异常的关系。方法采用彩色多普勒对孕12～40周行胎儿超声系统检查,对其中120例产前超声诊断胎儿发育异常,并在广东省清远市人民医院引产的胎儿进行羊水或脐带血染色体检查,并经分娩后随访证实的资料进行回顾性分析。结果染色体数目及结构异常20例,以21-三体、18-三体、45,XO、新发生易位、环状及嵌合体染色体异常多见,总检出率为16．7％（20/120）;其中17例为多发畸形,3例为单发畸形,多发畸形的染色体异常率高于单发畸形,两者差异具有统计学意义（χ^2＝15．15,P＜0．05）;另有5例多态性,其余95例未见异常。结论胎儿发育异常时,染色体异常的机率较高;多发畸形时,染色体异常的机率更高;而特定的单发畸形,其染色体异常的机率也较高。     

小头畸形遗传学诊断研究

目的探讨染色体核型分析、染色体微阵列分析(CMA)及全外显子测序(WES)技术在小头畸形遗传学诊断中的价值。方法选取2014年1月至2022年8月在广州医科大学附属第六医院产前诊断门诊就诊, 产前超声检查诊断为小头畸形的胎儿或出生后诊断为小头畸形的患儿共计9例, 行染色体核型分析和(或)CMA检测, 对染色体核型分析和CMA检测结果阴性的患儿进一步行核心家系WES(Trio-WES)检测, 再对致病性拷贝数变异(CNV)片段包含的编码基因进行基因本体(GO)功能注释分析, 将致病性CNV包含的与中枢神经系统发育相关的基因及WES检测发现的致病基因联合进行基因相互作用网络分析。结果 9例小头畸形患儿中, 3例合并其他结构畸形(3/9);诊断时间为孕23周～出生后7岁;诊断时头围18.3～42.5 cm(-7SD～-2SD)。9例小头畸形患儿均行染色体核型分析, 结果均未见异常;8例患儿行CMA检测, 检出异常1例, 异常检出率为1/8;5例行Trio-WES检测, 2例检出可能致病性基因, 致病性检出率为2/5。染色体4p16.3微缺失(为致病性CNV)区域内编码基因的GO富集分析显示,...     

伊洛前列素对ILC2s 介导的小鼠急性过敏性气道炎症的作用研究

目的:探讨伊洛前列素(Iloprost)对IL-33 诱导的小鼠急性过敏性气道炎症中2 型固有淋巴细胞(ILC2s)的作用。方法:C57BL/6 小鼠随机分为DMSO 对照组、IL-33 刺激组、IL-33+iloprost 干预组和单独iloprost 组。HE 染色观察肺组织中炎性细胞浸润情况,PAS 染色观察黏液分泌情况,流式细胞术检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)以及肺组织中嗜酸性粒细胞(EOS)和ILC2s 的数量,real-time PCR 检测IL-5、IL-13、GATA3 和ST2 mRNA 的表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF 和肺匀浆上清中IL-5 和IL-13 的含量。结果: IL-33 刺激组小鼠肺组织切片可见大量炎性细胞浸润且黏液分泌增加;同时,小鼠BALF 和肺组织EOS 和ILC2s 的数量、细胞因子分泌量和mRNA 相对表达量均显著高于DMSO 对照组和单独iloprost 组,差异有统计学意义(P<0.05)。于IL-33+iloprost 干预组小鼠肺组织切片中炎性细胞浸润程度明显减轻且黏液分泌减少;同时,小鼠BALF 和肺组织中EOS 和ILC2s 的数量、细胞因子分泌量和mRNA 相对表达量均显著低于IL-33 刺激组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Iloprost 可能是ILC2s 的负调节因子,在一定程度上可减轻小鼠肺部急性过敏性炎症反应。     

人CL-L1基因片段的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的 获取重组人CL-L1颈区.糖识别区纯化蛋白,制备多克隆抗体.方法 采用PCR方法扩增人CL-L1颈区.糖识别区目的 基因片段,构建原核表达载体,进行原核表达与蛋白纯化,然后免疫家兔,制备多克隆抗体.采用EIJSA检测抗体效价,免疫印迹法检测蛋白纯度和抗体的特异性.结果 成功构建了人CL-L1颈区.糖识别区原核表达载体pRSET-C/NECK-CRD△K,在E.coli BL21中表达,镍亲和层析柱纯化,得到相对分子质最19 200的融合蛋白,免疫家兔后收获抗血清,ELISA显示抗体效价为1/20 000,具有高度特异性,免疫印迹结果显示制备的多抗可以与重组人CL-L1颈区一糖识别区蛋白特异性结合.结论 本研究获得了人CL-L1颈区.糖识别区纯化蛋白,制备了人CL-L1颈区.糖识别区多克隆抗体,为cL厂L1的结构、组织表达谱和功能的研究奠定了基础.     

过敏性支气管哮喘免疫发病机制的最新研究进展

过敏性支气管哮喘(简称哮喘)是一种由不同的辅助性T细胞亚型决定的慢性气道炎症性疾病.既往认为“Th2哮喘假说”是过敏性哮喘的主要发病机制,而越来越多的研究表明,除了Th2之外其他辅助性T细胞也参与了哮喘的发病机制,尤其是Th1和Th17细胞对于气道中性粒细胞型炎症的发展至关重要.抑制这些免疫细胞也许为过敏性哮喘的有效治疗提供了方向.     

无创产前基因检测技术在胎儿染色体非整倍体检测中的临床应用

目的 评价无创产前基因检测技术(NIPT)在产前胎儿染色体非整倍体筛查中的应用价值.方法 收集2017年10月至2021年6月在清远市人民医院行NIPT检测的6535例孕妇的临床资料,高风险孕妇行羊水穿刺术进行核型确诊,低风险孕妇进行产前产后电话随访.结果 6535例样本中共检出胎儿染色体非整倍体异常高风险88例,检出...     

含绿色荧光蛋白报告基因pUC18筛选载体的构建

目的：以绿色荧光蛋白（GFP）基因为报告基因，将GFP基因克隆入pUC18建立大通量的筛选载体。方法：用PCR方法扩增目的DNA片段，碱裂解法小量制备质粒DNA，用限制性内切酶消化质粒DNA，用低熔点琼脂糖凝胶分离和纯化大片段DNA，GFP基因与pUC18连接，用氯化钙法转化感受态细胞，DNA序列测定，琼脂糖凝胶电泳，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果：pUC18-atg-GFP载体意外表达GFP蛋白，新合成的上游引物与原下游引物扩增GFP基因，克隆入pUC18构建pUC18-GFP载体，通过PCR，酶切鉴定和DNA序列分析，GFP基因的读码框架与原设计方案完全一致，该载体自身无GFP表达。结论：筛选载体内的GFP基因与克隆基因的融合基因可表达一种融合蛋白，在琼脂平板上含有该融合基因的克隆在紫外线激发下可发绿色荧光，因此，可表达基因能被挑选出来。     

271例儿童支气管哮喘过敏原特异性IgE抗体检测分析

目的探讨0～12岁支气管哮喘患儿的哮喘发病与其血清中特异性IgE抗体表达的关系及其检测意义。方法采用欧蒙印迹法对2015年6月至2018年6月就诊于郑州大学第三附属医院的271例支气管哮喘患儿进行血清过敏原特异性lgE抗体检测,并对结果进行回顾性分析。结果 271例支气管哮喘患儿中抗体阳性患儿203例,阳性率74.91%,其中吸入性过敏原阳性率较高的是蟑螂(31.03%)、尘螨组合(25.62%);食物性过敏原阳性率较高的是花生(25.62%)、鸡蛋白(20.69%)、海鱼组合(10.83%)。男性患儿中过敏原阳性者129例,阳性率为85.43%,女性患儿中过敏原阳性者74例,阳性率为61.67%。男性患儿过敏原阳性率高于女性患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。过敏原阳性率的年龄分布情况为0～4岁(82.61%),5～8岁(75.00%),9～12岁(62.50%)。三年龄段间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。0～4岁患儿过敏原抗体阳性率与5～8岁患儿比较,差异无统计学意义(P=0.190);0～4岁患儿过敏原抗体阳性率高于9～12岁患儿,差异有统计学意义(P=0.002);5～8岁患儿过敏原抗体阳性率与9～12岁患儿比较,差异无统计学意义(P=0.092)。结论蟑螂、尘螨组合、花生、鸡蛋白为哮喘患儿最常见过敏原,且吸入性过敏原与哮喘的发生关系更为密切。     

孤立性胼胝体发育异常胎儿的系列遗传学诊断研究

目的从细胞遗传学、基因组及单基因水平探讨染色体核型分析、染色体微阵列分析(CMA)及全外显子测序(WES)技术在孤立性胼胝体发育异常(CCA)胎儿产前诊断中的应用价值。方法选取2010年1月至2021年4月在广州市妇女儿童医疗中心及清远市人民医院产前诊断中心就诊, 超声及MRI检查诊断为孤立性CCA并行侵入性产前诊断的胎儿。对所有胎儿样本行染色体核型分析和(或)CMA[或拷贝数变异测序(CNV-seq)]检测, 对染色体核型分析和(或)CMA(或CNV-seq)检测结果未见异常的胎儿及其父母样本进一步行WES检测。结果 65例孤立性CCA胎儿中, 行染色体核型分析38例, 检出异常染色体核型3例, 检出率为8%(3/38)。共计49例孤立性CCA胎儿行CMA(或CNV-seq)检测, 检出致病性CNV 6例, 检出率为12%(6/49), 其中, 染色体核型分析结果异常, 进一步行CMA检测的检出率为1/1;染色体核型结果正常, 进一步行CMA(或CNV-seq)检测的检出率为14%(3/21);以CMA检测为一线检测技术的检出率为7%(2/27)。共计25例染色体核型分析和(或)CM...     

细胞因子信号转导抑制因子3和5在儿童过敏性哮喘特异性免疫治疗中变化的研究

目的 观察在儿童过敏性哮喘特异性免疫治疗过程中,与TH1/TH2细胞分化相关的细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)3和SPCS5的mRNA在外周血单个核细胞(PBMC)中表达水平的变化.方法 于2006年4月至2007年10月时郑州大学第一附属医院收治的39例过敏性哮喘惠儿,采集其特异性免疫治疗前、治疗15周和治疗51周的PBMc,提取总RNA,采用SYBR Green I逆转录荧光定量PCR的方法检测每组SOCS3和SOCS5mRNA的表达情况.结果 随着特异性免疫治疗的进行,患儿SOCS3的表达逐渐降低,SOCS5的表达15周时稍有降低,51周时又增高,SOCS5/SOCS3的比率逐渐升高.结论 SOCS3和SOCS5在儿童哮喘的特异性免疫治疗中可能起重要作用.