由胚胎干细胞分化的心肌细胞移植对心肌梗死大鼠左心室重构及心功能的影响

目的探讨小鼠胚胎干细胞（ES）分化的心肌细胞移植对SD大鼠心肌梗死后左心室重构及心功能的影响。方法采用悬滴-悬浮培养法诱导ES分化形成拟胚体。其中包含有大量心肌细胞。将雄性SD大鼠冠状动脉左前降支结扎。制成急性心肌梗死模型。1周后再次开胸。实验组于梗死区域注入心肌细胞悬液150μl（含细胞5×10^5个），梗死对照组于梗死区域注入等体积细胞培养液，另设假手术组，不结扎冠状动脉。心肌梗死后1周和细胞移植后4周，采用超声心动图评价大鼠左心室形态和功能，用免疫荧光技术检测移植细胞的存活及其表型。结果免疫荧光技术检测到分化的心肌细胞表达特异性转录因子α辅肌动蛋白、α肌球蛋白重链和肌钙蛋白1；逆转录聚合酶链反应检测到有心肌特异性转录因子Nkx-2．5、GATA-4及α肌球蛋白重链基因的表达；膜片钳记录显示所得到的分化的心肌细胞包括窦房结样起搏细胞、心房样细胞和心室样细胞。细胞移植后4周。与梗死对照组相比，实验组左心室收缩末期容积和舒张末期容积均显著缩小，左心室前壁舒张末期厚度明显增加（P〈0．01）。左室长轴缩短率显著升高（P〈0．01）。心脏组织冰冻切片可见4,6-联脒-2-苯基吲哚标记的呈蓝色荧光的移植细胞核。移植细胞表达肌钙蛋白I，移植细胞与受者的心肌细胞间有连接蛋白-43的表达。实验组中有2只（12．5％。2／16）出现了心脏畸胎瘤。结论由胚胎干细胞分化的心肌细胞移植可逆转心肌梗死大鼠左心室重构。改善左心室功能。     

气管插管核查表降低呼吸机相关性肺炎发生率的临床观察

目的：把控气管插管操作环节对降低呼吸机相关性肺炎（VAP）的发生率的影响。方法将439例气管插管患者随机分为观察组和对照组,仅观察组应用气管插管操作核查表监督气管插管操作各环节,比较两组VAP的发生率。结果观察组VAP的发生率为26．2％,对照组VAP的发生率为47．1％,两组比较差异有统计学意义（χ2＝20．8,P＜0．01）。结论应用气管插管操作核查表可以从源头上降低VAP发生率。     

骨髓间充质干细胞介导的血红素氧合酶-1促进大鼠心肌梗死后血管再生简

 目的 探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs) 介导的血红素氧合酶-1 (HO-1) 对心肌梗死后心 脏血管再生及左心室功能的影响。方法 取大鼠骨髓,体外分离扩增培养 MSCs,HO-1 腺病毒转染。结扎左前降支 1 h 后,分别将 HO-1-MSCs、MSCs 多点注射到大鼠心肌梗死区周边,对照组注射等量 PBS。 结果 MSCs 介导的HO-1能在体外及体内获得稳定表达;HO-1-MSCs组促血管生长因子VEGF、FGF2的表达及毛细血管密度明显高于 MSCs 组和对照组 (P < 0.01);但促血管再生的作用可被HO抑制剂阻断。HO-1-MSCs组心肌细胞凋亡及纤维化明显低于MSCs 组和对照组 (P < 0.01);HO-1-MSCs组左室收缩功能各项指标明显优于其他两组(P < 0.01)。HO-1-MSCs组心室壁变厚,心室腔明显缩小。结论 MSCs介导的血红素氧合酶-1能促进心肌梗死后心脏血管再生,改善左心室功能。     

内脏内胚层样END-2细胞体外诱导鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究

目的探讨内脏内胚层样END-2细胞体外诱导胚胎干细胞（embryon ic stem cells,ESCs）分化为心肌细胞的特征。方法用鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryon ic fibrob lasts,MEF）作为饲养层促进ESCs增殖并抑制其分化,先将ESCs悬浮培养形成23 d的拟胚体（embryoid bod ies,EBs）,再和END-2细胞共培养诱导向心肌细胞分化。实验分4组。第1,2组EBs分别和END-2细胞或END-2细胞条件培养液共培养;第3组EBs和表面铺有一层琼脂糖的END-2细胞共培养;第4组自然分化组为对照组。相差显微镜下观察分化细胞的形态学变化,免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌钙蛋白T（TnT）的表达;透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构。结果各实验组均可见自发节律性收缩的拟胚体。随着培养的延长,自发节律性收缩的拟胚体数目也增加,均表达心肌细胞特异性蛋白TnT,以及观察到心肌样超微结构。在和END-2细胞直接接触的诱导条件下,分化的细胞形态较单一。结论END-2细胞通过分泌可溶性细胞因子可诱导ESCs向心肌细胞分化,直接接触在END-2细胞诱导作用中并不是必要的,但可诱导出较单一的细胞。     

替格瑞洛治疗氯吡格雷抵抗的急性冠脉综合征患者的疗效分析

【摘要】目的 探讨替格瑞洛治疗氯吡格雷抵抗的急性冠脉综合征患者的疗效。方法 选取我院2012年6月至2015年2月初次诊断为ACS的患者559例,筛选出氯吡格雷抵抗患者105例,随机分为替格瑞洛组（53例）和氯吡格雷组（52例）,记录入选患者的一般资料,包括年龄、性别、高血压、糖尿病、高脂血症、吸烟史、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）等,测定所有患者服用药物5 d前、后最大血小板聚集率,随访30 d内两组全因死亡、支架内血栓形成、再发非致命性心肌梗死、出血、呼吸困难发生率。结果 替格瑞洛组和氯吡格雷组在年龄,性别构成,合并高血压、糖尿病、高脂血症方面比较无统计学差异（P＞0.05）;两组PFG、TC、TG、HDL-C、LDL-C比较无统计学差异（P＞0.05）。替格瑞洛组MPA下降率、MPA达标率优于氯吡格雷组（16.2±7.4）% vs（4.1±1.9）%,P=0.000;88.7% vs 19.2%,P=0.000 P＜0.05）;替格瑞洛组全因死亡率、支架内血栓形成、再发非致命性心肌梗死更低（5.66% vs 21.15%,P=0.020;3.77% vs 44.23%,P=0.000;7.55% vs 23.08%,P=0.007 P＜0.05）;两组出血、呼吸困难发生率比较无统计学差异（13.2%vs 11.5%,P=0.795,χ2=0.067;3.77%vs 5.77%,P=0.678,χ2=0.230）。结论 氯吡格雷抵抗的ACS患者使用替格瑞洛治疗临床疗效优于氯吡格雷,两者安全性相当。     

血红素氧合酶1修饰骨髓间充质干细胞多点注射梗死灶周围对梗死后心肌结构重塑的影响

背景:研究表明血红素氧合酶1的过表达有抗炎症反应的作用,将血红素氧合酶1修饰的骨髓间充质干细胞(HO-1-BMSCs)移植入梗死心脏周围是否可调节基质金属蛋白酶/组织金属蛋白酶抑制剂的比例而明显改善梗死心肌重构呢?目的:观察血红素氧合酶1修饰的骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后心肌胶原的调节及心肌重塑的逆转作用。方法:利用血红素氧合酶1腺病毒转染体外培养扩增的骨髓间充质干细胞。结扎大鼠左前降支动脉制造心肌梗死模型,1h后,分别将HO-1-BMSCs、BMSCs多点注射到大鼠心脏梗死区四周,对照组注射等量磷酸盐缓冲液。结果与结论:Adv-hHO-1转染BMSCs后获稳定表达;hHO-1-mRNA仅在HO-1-BMSCs移植组表达;与对照组相比,HO-1-BMSCs移植组基质金属蛋白酶2/9的表达显著减少(P<0.05),Null-BMSCs组基质金属蛋白酶2/9的表达虽然减少,但差异无显著性意义(P>0.05);与对照组相比,细胞移植组金属蛋白酶组织抑制剂2/3的表达显著增加,尤以HO-1-BMSCs组明显(P<0.05);但金属蛋白酶组织抑制剂1无明显变化(P>0.05)。金属蛋白酶组织抑制剂2/基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制剂3/基质金属蛋白酶9的比例在细胞移植的心脏中明显上升。与对照组比较,细胞移植组心室中的胶原蛋白沉积减少,心室腔内径显著缩小。结果表明血红素氧合酶1修饰的骨髓间充质干细胞移植可使基质金属蛋白酶/组织金属蛋白酶抑制剂的比例正常化,并逆转心肌细胞外基质的重构。     

血红素氧合酶-1基因修饰的骨髓间充质干细胞培养上清液对心肌梗死治疗作用的实验研究

目的探讨血红素氧合酶-1（HO-1）基因修饰的骨髓间充质干细胞（Mscs）培养上清液对大鼠心肌梗死的治疗作用。方法HO-1腺病毒或对照GFP腺病毒转染MSCs,Westernblot检测HO-1的表达;流式细胞仪检测无氧无血清条件下HO-1-MSCs、GFP-MSCs、MSCs的凋亡;ELISA和RT-PCR检测无氧无血清条件下HO-1-MSCs细胞因子的分泌。收集HO-1-MSCs、GFP—MSCs在无氧无血清条件下的培养上清液,于结扎冠状动脉1h后多点注射到心肌梗死区边缘,注射ControlMedium为对照组。注射4d后检测心功能变化,4周后取梗死区边缘心肌行Masson染色和免疫组化CD34染色。结果HO-1转染的MSCs可以稳定高效地表达HO-1蛋白（P=O-01）,HO-1-MSCs在无氧无血清条件下的凋亡率显著低于GFP-MSCs和MSCs（P=0-01）,且其在无氧无血清条件下HGF、bFGF、TGF—β、VEGF分泌水平显著增高（P=0-02）;注射4d后发现HO-1-MSCs上清液治疗组心功能各项指标均显著改善（P〈0。01）;4周后HO-I-MSCs上清液治疗组胶原面积明显减少（P〈0-01）,且梗死区微血管数量也增加。结论HO-1-MSCs分泌多种细胞因子,通过促进血管新生,减少胶原沉积以及减少心肌坏死,从而改善心功能以及急性心肌梗死后的左心室重构。     

小鼠胚胎心脏心外膜细胞体外培养模型的建立

背景：胚胎心脏心外膜细胞是最近被发现的具有分化为心肌细胞和血管平滑肌细胞潜能的心脏干细胞,可分化为心脏三系细胞,为心脏损伤的再生提供了新的细胞来源,但其定向分化机制及调控因素仍不清楚。目的：体外建立小鼠胚胎心脏心外膜细胞培养模型。方法：解剖显微镜下分离11.5-12.5 d小鼠胚胎心脏,剪除肺静脉血管、心房组织及左心室,移至6孔板(或35 mm培养皿)培养,24 h后移走胚胎心脏组织继续培养。相差显微镜观察胚胎心外膜细胞生长特点;使用免疫荧光技术对细胞进行胚胎心外膜细胞特异性抗体Wt-1、Tbx18染色。结果与结论：胚胎心外膜单层细胞从组织块边缘长出,呈鹅卵石样,并围绕组织块向外延伸。移去胚胎心脏后细胞继续生长,且增殖迅速,三四天后长至融合。所有细胞均强阳性表达胚胎心脏心外膜细胞特异性抗体Wt-1及Tbx18。结果表明,胚胎心脏心外膜细胞生长迅速、形态单一,均表达心外膜细胞特异因子,细胞纯度高,成功构建了体外胚胎心脏心外膜细胞培养模型,为研究其定向分化的分子机制提供了新的思路。     

奥美拉唑与莫沙必利联用对慢性胃炎病人降钙素原与胃泌素的影响

目的 探讨奥美拉唑与莫沙必利联用对慢性胃炎(CG)病人降钙素原与胃泌素的影响.方法 选取2016年5月至2018年5月深圳市龙岗区第二人民医院收治的CG病人96例,按照随机抽签法均分成观察组与对照组.对照组采用单纯莫沙必利治疗,观察组则在莫沙必利治疗的基础上增用奥美拉唑治疗.对比两组在临床疗效,治疗前后血清降钙素原与胃泌素水平,不良反应以及治疗前后生活质量等方面的差异.结果 治疗总有效率方面,观察组高于对照组(95.83％比77.08％,P<0.01).治疗后观察组与对照组在血清降钙素原[(0.83±0.57)μg/L比(1.44±0.82)μg/L]与胃泌素水平[(93.10±13.28)ng/L比(110.34±14.85)ng/L]比较,前者更低(均P<0.01).观察组和对照组在腹泻、恶心呕吐及皮疹的不良反应发生率方面对比,均差异无统计学意义(P>0.05).治疗后观察组与对照组在躯体功能、心理功能、物质生活及社会功能的生活质量评分方面对比,前者更高(均P<0.01).结论 奥美拉唑及莫沙必利联合应用于CG病人中可获得理想的临床疗效,同时可显著下调血清降钙素原与胃泌素水平,促进生活质量的提高.具有较佳的安全性,值得临床推广应用.