CEA 迷你基因串联体疫苗的体内抗肿瘤活性观察

目的:观察已构建的含有CEA625-667 基因单倍体疫苗pcDNA-CEA625-667 及三串联体的DNA 疫苗pcDNA-triCEA625-667 对荷瘤小鼠体内肿瘤的抑制情况及小鼠存活时间的改变。方法:建立小鼠肝细胞癌实验动物模型,应用单倍体疫苗pcDNA-CEA625-667 及三串联体DNA 疫苗pcDNA-triCEA625-667 免疫小鼠,以生理盐水为对照组,观察各实验组小鼠皮下肿瘤生长情况,记录皮下肿瘤生长曲线,观察疫苗对荷瘤小鼠肿瘤生长速度的影响以及疫苗对荷瘤小鼠生存时间的影响。结果:与生理盐水对照组相比,两种疫苗均能明显抑制CEA 阳性荷瘤小鼠的肿瘤体积以及生长速度(P <0.01),其中,pcDNA-triCEA625-667 疫苗组的抑制作用明显优于pcDNA-CEA625-667 疫苗组(P<0.01),而二者均不能抑制CEA 阴性荷瘤小鼠的肿瘤生长。pcDNA-CEA625-667 疫苗组平均生存时间为(48.50±6.73)d,与生理盐水对照组(39.00±6.64)d 相比有显著差异(P<0.01);pcDNA-triCEA625-667 疫苗组生存时间(48.50依6.73)d 明显高于生理盐水对照组和pcDNA-CEA625-667 疫苗组(P<0.01)。两组疫苗均不能延长CEA 阴性荷瘤小鼠的生存时间。结论:无论是单倍体还是三串联体的DNA 疫苗,均能够明显抑制CEA 阳性荷瘤小鼠的肿瘤生长速度(P<0.01)及明显延长其生存时间(P<0.01),而对CEA 阴性荷瘤小鼠则无治疗作用。     

p21 蛋白激活激酶4 在乳腺癌上皮间质转化中的作用研究

目的:探讨p21 蛋白激活激酶4(PAK4)在乳腺癌细胞上皮间质转化中的作用。方法:在乳腺癌MCF7 细胞中超表达PAK4,而在乳腺癌MDA-MB-231 细胞中干扰PAK4 表达,通过迁移和侵袭实验检测其对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响,荧光定量法和免疫印迹分析检测PAK4、E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin mRNA 和蛋白质表达量变化,免疫印迹法检测EMT 相关转录激活因子Snail、Slug 表达量变化。结果:MCF7 细胞超表达PAK4 后,细胞的迁移侵袭能力显著增加,并且上皮标志分子E-Cadherin 蛋白表达下调,而间质标志分子N-Cadherin 和Vimentin 蛋白则表达上调,EMT 相关转录激活因子Slug 表达量增加;MDA鄄MB鄄231 细胞中,抑制内源PAK4 表达能显著降低细胞的迁移侵袭能力,上调E-Cadherin 蛋白表达,下调N-Cadherin、Vimentin 和Slug 蛋白的表达。结论:PAK4 通过上调Slug 促进乳腺癌发生上皮间质转化,可作为抑制乳腺癌转移的分子靶点。     

miR-126 在乳腺癌中与VEGF 表达关系及其抗肿瘤效果

目的:探讨miR-126 与VEGF 在乳腺癌中的表达情况,及miR-126 发挥的抗肿瘤效果。方法:以qRT-PCR 检测和Western blot 分析miR鄄126 与VEGF 在乳腺癌组织和细胞中的表达情况;以miR-126 mimics 转染乳腺癌细胞株MDA-MB-231,检测miR-126 对VEGF 的表达影响,MTT 法和细胞划痕实验验证miR-126 对肿瘤细胞的增殖和迁移能力的影响。结果:miR-126 在乳腺癌组织和细胞中呈低表达,VEGF 表达与其呈负相关,上调miR-126 可以降低VEGF 的表达,抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力。结论:miR-126 可以通过下调VEGF 表达来实现降低乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,从而发挥抗肿瘤效果。     

小细胞肺癌患者外周血中Th9细胞水平检测及其临床意义

目的: 检测小细胞肺癌(SCLC)患者血清中白细胞介素9(IL-9)的水平和外周血中Th9的细胞比例,探讨Th9在SCLC疾病进展过程中的作用。方法: 选择20例局限期SCLC患者(局限期SCLC组)、16例扩散期SCLC患者(扩散期SCLC组)和10名健康对照者(健康对照组)。ELISA法检测各组研究对象血清中IL-9水平,流式细胞术检测各组研究对象外周血Th9细胞在CD4⁺T细胞中所占比例。结果: SCLC组患者外周血中Th9细胞比例高于健康对照组(t=3.731,P<0.01),局限期SCLC患者外周血中Th9细胞比例低于扩散期SCLC组(t=2.825,P<0.01)。SCLC组患者血清IL-9水平高于健康对照组(t=4.001,P<0.01),局限期SCLC组患者血清中IL-9水平低于扩散期SCLC组(t=3.089,P<0.01);结论: Th9可能通过分泌IL-9直接促进SCLC的疾病进展,外周血中Th9细胞和IL-9可能成为评价小细胞肺癌的分子标志。     

人心肌肌钙蛋白I的原核表达与纯化

目的构建人心肌肌钙蛋白Ⅰ（human cmdiac troponin I,hcTnI）原核表达载体并表达、分离纯化重组蛋白。方法RT-PCR从人心肌组织中克隆出hcTnI的cDNA序列构建到原核表达载体pQE30,获得重组表达质粒pQE30-hcTnI,并在大肠杆菌M15中诱导表达。镍凝胶亲和层析纯化目的蛋白,Western Blot杂交鉴定重组蛋白。结果经测序证实,获得的目的基因与（GeneBankM64247）公布的hcTnI基因序列一致。pQE30-hcTnI在大肠杆菌M15中经WFG诱导后表达出相对分子量约为29kD的目的蛋白,镍柱纯化后经抗hcTnI单克隆抗体进行Western印记,在相对分子量约29kD处可见特异性着色带。结论体外成功诱导了重组hcTnI蛋白表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的hcTnI蛋白,为进一步获得hcTnI的抗体及建立相应的临床快速检测方法奠定了实验基础。     

流式细胞术检测CIK的免疫表型和体外杀伤活性

目的：探讨细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer,CIK）的免疫表型和体外杀伤活性。 方法:从健康人外周血分离淋巴细胞,经过IFNγ、CD3McAb、IL-2诱导并培养,获得大量的CIK。采用流式细胞术检测CIK的表型;以CFSE标记靶细胞来区分效应细胞,再以ＰＩ染色,用FACS检测靶细胞的死亡率。 结果:CIK于第22天达到增殖高峰,并高度表达CD3、CD11a、CD54和HLA-DR;中度表达CD3/CD56、CD25、CD28、CD69和FasL;CD16表达不增加。CIK对肿瘤细胞K562、 HL-60、Hela、SMMC7721和A375均表现出杀伤活性,其中对K562、HL-60、Hela 3种细胞的杀伤作用较强;而对SMMC7721、A375的作用不明显。 结论:细胞因子IFNγ、CD3McAb和IL-2体外诱导的单个核细胞具有强大的增殖力和杀伤活性。     

人肌红蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

目的：构建人肌红蛋白（Mb）原核表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白pQE。方法：根据已报道的人Mb基因序列,采用RT-PCR技术从人骨骼肌组织中获得肌红蛋白cDNA序列。将所得的PCR产物插入克隆载体pGEM-Teasy中,得重组质粒,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将酶切目的片段插入原核表达载体pQpQEE30中并转化大肠杆菌(E.coli)M15,通过IPTG诱 导表达出带有6个组氨酸的融合蛋白。经镍固定金属亲和层析纯化。结果：序列分析表明,人Mb基因成熟肽编码区含有465 bp,编码153个氨基酸;与GenBank(NM203378) 中已报道的Mb核苷酸序列有98.50 %同源性。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE 电泳和免疫印迹分析显示,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的31%,相对分子质量约为16 700,并与商品化的人Mb单抗呈特异性反应。经Ni²⁺-NTA agarose 纯化获得SDS-PAGE 电泳下单一条带。结论：在大肠杆菌中获得了人Mb的高效表达。     

人肝细胞癌抗原HCA661 DNA疫苗的构建

目的：构建人肝细胞癌特异性抗原HCA661的DNA疫苗。方法：通过PCR从SMMC7721中获得编码肝细胞癌特异抗原HCA661的基因组DNA序列,插入pGEM-T easy载体后测序,并将目的基因定向亚克隆进入真核表达载体pCI-neo,以PCR和酶切方法鉴定构建的重组真核表达质粒pCI-neo-HCA661。结果：PCR产物为 1 040 bp,测序结果与Gene Bank登记完全相同;PCR和酶切结果表明,构建的重组真核表达质粒中含有正确编码的目的基因片段。结论：成功地构建了含有HCA661基因的DNA疫苗。     

可溶性Fas水平与乳腺疾病的关系

目的：探讨血清可溶性Fas(sFas)水平的变化与乳腺疾病发生发展的相关性。 方法：采用ELISA方法检测226例健康女性,20例复发性乳腺癌患者,81例原发性乳腺癌患者,22例乳腺良性疾病患者血清sFas水平。 结果：健康人群血清sFas水平随年龄增加而递增;原发性乳腺癌、复发性乳腺癌、良性乳腺疾病患者血清sFas水平(分别为0.815、1.510及0.664 ng•L^-1)与正常人群(0.580 ng•L^-1)比较差异具有显著性（P<0.05）;原发乳腺癌患者术前、术后2周sFas水平分别为0.815和0.620 ng•L^-1,两者比较差异具有显著性（P<0.05）,良性乳腺疾病患者术前、术后2周sFas水平分别为0.664和0.610 ng•L^-1,两者比较差异无显著性（P>0.05）;原发乳腺癌患者sFas表达水平随疾病TNM分期增高而增高,差异具有显著性（P<0.05）,而其表达水平与雌激素受体(ER)、孕激素受体（PR）、局部淋巴结转移等其他临床参数差异无显著性（P>0.05）。 结论：乳腺癌患者血清的sFas水平可作为乳腺疾病进展及其预后的判断指标之一。     

炎症性肠病病人健康促进生活方式现状及影响因素分析

目的:了解炎症性肠病(IBD)病人健康促进生活方式现状,并分析其影响因素。方法:运用健康促进生活方式量表Ⅱ中文修订版(HPLP-ⅡR)和多维度健康心理控制源量表(MHLC)对贵州省某三级甲等医院消化内科住院治疗的165例IBD病人进行调查。结果:IBD病人健康促进生活方式总分为(97.98±9.24)分;多元线性逐步回归分析结果显示,性别、家庭人均月收入、合并慢性病、疾病严重程度及健康心理控制源是IBD病人健康促进生活方式的主要影响因素(P<0.05),可以解释总变异的77.1%。结论:IBD病人健康促进生活方式处于一般水平,性别、家庭人均月收入、合并慢性病、疾病严重程度及健康心理控制源是影响IBD病人健康促进生活方式的主要因素,医护人员应根据具体情况制定针对性的干预措施,提高IBD病人的健康促进生活方式水平。