老年上皮性卵巢癌组织中磷酸化AKT和P-gP表达与化疗反应及预后的关系

目的 探讨老年上皮性卵巢癌组织中磷酸化-AKT(p-AKT)和P-糖蛋白(P-gp)表达与卵巢癌化疗反应及预后的关系.方法 采用免疫组化SP法检测63例上皮性卵巢癌组织和20例正常卵巢组织中p-AKT和P-gp表达,分析其与化疗反应的关系,同时对预后进行多因素的Cox生存分析.结果 p-AKT和P-gp在上皮性卵巢癌组织中阳性表达率分别为52.4%和31.7%,显著高于正常卵巢组织(P＜0.01),且p-AKT和P-gp表达存在相关性.p-AKT和P-gp表达阳性组的化疗反应率显著高于p-AKT和P-gp表达阴性组(P＜0.001).多因素生存分析显示,年龄≥60岁、手术病理分期、术后残留灶直径≥2 cm是影响患者预后的独立危险因素.结论 p-AKT和P-gp阳性表达与上皮性卵巢癌组织化疗耐药有关,p-AKT过表达对P-gp阳性表达可能具有促进作用,在卵巢癌化疗耐药中起重要作用,对合理制定化疗方案、预测化疗反应性及估计预后具有积极的指导意义.     

普瑞巴林在老年晚期胰腺癌患者中应用及安全性

目的探讨普瑞巴林在老年晚期胰腺癌患者中的应用及安全性。方法选取30例老年胰腺癌患者为观察组,接受普瑞巴林联合盐酸羟考酮(奥施康定)止痛治疗,同期临床特点相同的对照组26例,予单纯奥施康定止痛治疗,两组出现爆发痛,均应用盐酸吗啡片进行滴定,之后转为奥施康定治疗。比较两组疼痛数字分级法(NRS)评分,吗啡使用量,不良反应发生率及生活质量。结果与对照组相比,观察组在治疗后14 d的NRS评分、日均吗啡用量、不良反应均显著下降(P0.05)。在生活质量及药物起效时间方面,与对照组无统计学差异(P0.05)。结论普瑞巴林在老年晚期胰腺癌中应用安全,疼痛控制迅速有效,且可减少阿片类药物应用剂量。     

hβ2GPⅠ第一功能区基因单体和二串联体的克隆和表达

目的：构建hβ₂GPⅠ(hβ₂GPⅠ)第一功能区基因单体及二串联体的原核表达载体PQE30-β₂GPⅠ-DI和PQE30-β₂GPⅠ-DI₂,并在大肠杆菌M15中进行高效表达。方法：应用PCR技术扩增hβ₂GPⅠ第一功能区基因的单体β₂GPⅠ-DI,并根据同尾酶特性构建hβ₂GPⅠ第一功能区基因二串联体β₂GPⅠ-DI₂,将获得的单体和二串联体分别与PGEM-T easy载体连接测序,测序正确后分别克隆于原核表达载体PQE30中,构建成重组表达载体PQE30-β₂GPⅠ-DI和PQE30-β₂GPⅠ-DI₂,在大肠杆菌M15中以l mmol·L^-1 IPTG诱导蛋白表达,经Western blotting鉴定目的蛋白的抗原性。结果：表达了hβ₂GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的蛋白,相对分子质量约为9 000和17 000,其表达量均可达菌体总蛋白的25％,并具有hβ₂GPⅠ的抗原性。结论：成功构建了hβ₂GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的原核表达载体,并诱导了蛋白的高效表达。     

人β2糖蛋白1的重组表达及对抗磷脂抗体综合征患者血清诱导内皮细胞产生ICAM-1的影响

目的：探讨重组人β₂糖蛋白1(hrβ₂-GP1)对抗磷脂抗体综合征(APS)患者血清诱导内皮细胞系产生细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响。 方法：应用pQE30表达载体表达hrβ₂-GP1,Western blotting对重组蛋白进行鉴定;应 用hrβ₂-GP1处理前后的APS患者血清分别与内皮细胞株EA.hy926共孵育,细胞ELISA和 RT-PCR方法分析处理前后EA.hy926表达ICAM-1的变化。 结果：成功构建pQE30-hβ₂-GP1,并对表达产物进行了纯化和鉴定,所获得的蛋白与预期的大小一致,并具有人β₂-GP1的抗原性;rhβ₂-GP1处理后的APS患者血清与处理前比 较,与其孵育的内皮细胞系EA.hy926表达ICAM-1在蛋白和mRNA水平均明显降低,这种抑制作用随着rhβ₂-GP1的浓度增加而逐渐增强。 结论：抗β₂糖蛋白1抗体(anti-β₂GP1)促进内皮细胞系EA.hy926表达ICAM-1, hrβ₂-GP1可中和此作用。     

构建人肝细胞癌相关抗原HCA661和mtHSP70刺激表位的融合基因疫苗

目的：构建人肝细胞癌相关抗原661（HCA661）与牛型结核分枝杆菌热休克蛋白70 （mtHSP70）刺激表位的融合基因疫苗。方法：通过PCR技术扩增HCA661基因,定向克隆至真核表达质粒pCI-neo后测序。通过PCR技术从牛型结核分支杆菌基因组中扩增包含mtHSP70刺激表位的DNA片段,亚克隆至pGEM-T easy后测序。将该刺激表位片段插入pCI-HCA661中HCA6 61下游,利用PCR和酶切方法鉴定重组真核表达质粒pCI-HCA661-mtHSP70E。结果：HCA661 PCR扩增产物为1 040 bp,mtHSP70表位PCR产物为312 bp,测序结果均分别与GenBank登记的序列完全相同。PCR和酶切鉴定结果表明,构建的重组真核表达质粒 pCI-HCA661-mtHSP70刺激表位中含有正确编码的融合基因片段。结论：成功构建含有人肝细胞癌相关抗原HCA661-mtHSP70刺激表位的融合基因疫苗。     

凋亡抑制蛋白Survivin在原发性肝细胞癌中的表达及其意义

目的：通过研究凋亡抑制蛋白Survivin在原发性肝细胞癌（HCC）中的表达情况及其与临床病理特征之间的关系,探讨Survivin在HCC发生、发展中的作用。方法：采用流式细胞术（FCM）及免疫组化（SP）法对30例肝癌组织、20例癌旁组织及10例正常肝组织中的Survivin蛋白进行定量检测,并结合临床资料进行分析。结果：① Survivin在HCC组织中的表达率显著高于癌旁组织及正常肝组织（P<0.05）;②Survivin蛋白在癌旁正常组织中无表达;③Survivin蛋白的表达与肿瘤的大小、部位、包膜、AFP无关联（P>0.05）,而与镜下门静脉癌栓形成有关联（P<0.05）。结论：Survivin基因蛋白在HCC组织中过表达是反应HCC生物学行为的有效指标,Survivin基因蛋白表达的特异性有望成为HCC基因诊断与治疗的靶点。     

CA125联合中性粒细胞与淋巴细胞比值对卵巢癌诊断及预后判断的意义

目的:探讨CA125联合中性粒细胞和淋巴细胞比值对卵巢癌诊断及预后判断的临床意义。方法:检测152例卵巢癌患者外周血CA125及血细胞计数,对比CA125水平及中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)与健康体检者及卵巢良性疾病患者间的差异,评估二者及二者联合(联合标志物)在诊断卵巢癌方面的敏感性和特异性,并分析检测指标与卵巢癌患者临床特征的相关性。结果:卵巢癌患者的CA125水平及NLR值明显升高,与对照组及良性肿瘤组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05);在敏感性上CA125最为显著,但在特异性上NLR及联合标记物要比CA125高;联合标志物与疾病的疗效及预后密切相关(r=0.683,P<0.01)。结论:CA125联合中性粒细胞和淋巴细胞比值测定是卵巢癌诊断的敏感指标,且具有更高的特异性,在对卵巢癌的诊断、病情评估及预后判断方面具有指导意义。     

抑制c-FLIP_L表达增强rhTRAIL蛋白杀伤肺癌A549细胞的研究

目的:探讨抑制c-FLIPL表达增强rhTRAIL蛋白杀伤肺癌A549细胞株的可行性。方法:构建c-FLIPL序列特异性siRNAs表达载体并转染A549细胞抑制c-FLIPL基因表达,化学抑制剂他莫昔芬抑制c-FLIPL蛋白表达。RT-PCR和Western blot法检测c-FLIPL的mRNA和蛋白表达的变化。Western blot法检测caspase-8的活化情况。流式细胞仪检测A549细胞凋亡率,MTT法检测联合应用RNAi+rhTRAIL和他莫昔芬+rhTRAIL对A549细胞的杀伤活性。结果:特异性siRNA片段能显著降低A549细胞中c-FLIPL的mRNA水平和蛋白水平。他莫昔芬可以显著抑制c-FLIPL蛋白的表达。两者均可以实现caspase-8的活化,并促进rhTRAIL对A549细胞诱导凋亡作用,凋亡率从2.52%提高到64.5%和59.2%(P<0.05),他莫昔芬和siRNA均可显著促进rhTRAIL蛋白对A549细胞的增殖抑制作用,抑制率分别提高到73.2%和69.5%(P<0.05)。结论:靶向抑制FLIP蛋白表达能增加A549细胞对rhTRAIL诱导细胞凋亡的敏感性,有利于促进rhTRAIL蛋白在治疗NSCLC方面的研究应用。     

氟比洛芬酯用于乳腺癌改良根治术后患者自控镇痛的临床观察

目的:观察氟比洛芬酯注射液自控镇痛用于乳腺癌改良根治术后的临床效果。方法:选择60例乳腺癌患者(35～60岁),随机双盲分为两组,每组30例。Ⅰ组30例单纯采用芬太尼自控静脉镇痛;Ⅱ组30例采用氟比洛芬酯复合芬太尼自控静脉镇痛。观察4、8、12、24、48h各组静息时视觉模拟评分(VAS)。结果:应用自控静脉镇痛(PCIA)48h镇痛期间I组与Ⅱ组镇痛效果比较差异无统计学意义,两组患者均无明显呼吸抑制及循环抑制,恶心的发生率差异无统计学意义;Ⅱ组患者呕吐及嗜睡的发生率明显高于Ⅰ组,Ⅰ组患者PCIA按压次数明显高于Ⅱ组。结论:氟比洛芬酯(凯纷)是以脂微球为药物载体的非甾体类镇痛剂,无成瘾性,具有较强的镇痛、解热、抗炎作用,用于乳腺癌改良根治术后自控镇痛,降低患者呕吐及嗜睡的发生率效果更佳。     

CEA抗原表位串联体与FL共表达基因疫苗抑制小鼠肝癌细胞体内生长的研究

目的:观察CEA抗原表位串联体与FL共表达基因疫苗抑制荷瘤小鼠肿瘤生长。方法:利用基因重组技术将CEA抗原表位三串联体和FL基因片段克隆到质粒pcDNA3.0上,肌注免疫BALB/c小鼠,观察重组基因疫苗对CEA阳性肿瘤的抑制作用、小鼠生存时间及其诱导小鼠杀伤效应细胞的活性。结果:pcDNA-triCEA625-667-sFL免疫组小鼠生存时间延长,肿瘤生长速度缓慢,瘤块较小,与对照组小鼠比较有显著性差异(P0.01);经pcDNA-triCEA625-667-sFL免疫的小鼠脾细胞对H22-CEA+的杀伤率明显升高,差异有显著性(P0.01)。结论:共表达三倍体CEA抗原表位和FL的基因疫苗可以有效抑制CEA阳性肿瘤在小鼠体内的生长,并增强小鼠杀伤效应细胞的活性。