IL-12与IL-18在体外培养系统中诱导肿瘤特异性CTL杀伤活性的比较

目的：分别应用重组人白细胞介素12（rhIL-12）及重组人白细胞介素18（rhIL-18）在体外培养系统(CCs)中诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),比较IL-18与IL-12诱导的肿瘤特异性CTL的杀伤活性，探索IL-18的抗肿瘤作用机制。方法：采用Stem Sep^TM免疫磁性细胞分离法分离人外周血NK细胞、T细胞及DCs细胞，流式细胞仪分析细胞表型，¹²⁵I-UdR标记的细胞毒实验检测杀伤活性。结果：在CCs中、在肿瘤抗原存在的条件下，rhIL-18和rhIL-12均能诱导产生针对U251、MCF7特异性CTL，其作用能力与rhIL-18和rhIL-12的浓度呈剂量依赖关系，但rhIL-18诱导肿瘤特异性CTL的作用明显高于rhIL-12（P<0.01）；rhIL-18和rhIL-12在诱导肿瘤特异性CTL过程中具有协同作用，两者联合应用诱导肿瘤特异性CTL的能力明显高于单独应用rhIL-18和rhIL-12（P<0.01）。结论：rhIL-18和rhIL-12在CCs中均能够诱导并促进CTL介导的肿瘤特异性杀伤效应，rhIL-18诱导的肿瘤特异性CTL的能力明显高于rhIL-12，两者在诱导肿瘤特异性CTL过程中具有协同作用。     

人Flt3配体基因的克隆及在Hela细胞中的表达

目的：克隆人Flt3配体（FL）基因．检测其在Hela细胞中转录及表达蛋白的活性。方法：Trizol法提取K562细胞总RNA，经RT-巢式PCR得到FL的cDNA，PCR产物亚克隆入pGEM-T栽体测序，构建pcDNA3／hFL。经Lipofectamine2000介导转入Hela细胞．RT-PCR法检测转染细胞中hFL基因的转录．ELISA法检测培养上清中hFL的含量．增殖和促生存实验鏊定hFL的活性。结果：所得FL基因序列正确。转染后的Hela细胞能转录FL基因．上清中hFL蛋白含量为56．8ng／ml／l．hFL能促Raji细胞生存及抑制凋亡（P〈0.01），促进HL-60细胞增殖（P〈0.05）。结论：构建的pcDNA3／hFL质粒在Hela细胞表达系统中能够有效转录．表达的hFL蛋白具有生物学活性。     

损伤肝组织匀浆诱导间充质干细胞甲胎蛋白和白蛋白的表达

目的：建立分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）的方法，探讨损伤肝组织匀浆对MSCs的诱导分化作用。方法：采用密度梯度离心、贴壁培养法分离培养大鼠MSCs，以含10%损伤肝组织匀浆、10%FBS的L-DMEM培养基诱导培养，并在不同时间点采用免疫组织化学方法（SP）检测甲胎蛋白（AFP）和白蛋白（Alb）的表达。 结果：MSCs在含10%损伤肝组织匀浆的10%FBS L-DMEM培养基中培养，呈类上皮样细胞。诱导组在培养7 d时，大部分细胞呈AFP阳性表达（75.2%），与对照组比较差异有显著性(P<0.05)； 诱导培养 14、21和28 d AFP表达阳性率分别为35.2%、12.3%和2.0%，组间比较差异有显著性（P<0.05）；诱导组在培养7 d仅少数细胞Alb呈阳性表达（14.6%），诱导培养14、21和28 d Alb表达阳性率分别为67.6%、88.9%和95.6%，诱导组与对照组比较及不同时间点比较差异均有显著性(P<0.05)。结论：此方法可获得纯度较高MSCs，损伤肝组织匀浆可诱导MSCs表达AFP和Alb。     

去氢表雄酮及其代谢产物对人肿瘤细胞系的抗增殖作用

目的: 研究去氢表雄酮（DHEA）及其代谢物去氢表雄酮硫酸酯（DHEAs）对HepG2和HT-29细胞增殖的抑制作用及其机制。方法: HepG2和HT-29细胞分别分为对照组、不同浓度（1、 10、 50、 100及200 μmol•L^-1）DHEA组和DHEAs组，孵育8、24、48及72　h后，分别采用噻唑蓝（MTT）比色法和BrdU 测定法检测DHEA对肿瘤细胞的生长抑制率，同时测定3-羟基-3-甲基戊二酸单酰A还原酶（HMGR）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）及乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果： ①MTT法结果显示，与对照组比较，不同浓度DHEA组HepG2和HT-29细胞增殖抑制率均显著增加（P<0.05）。作用24 h时，100 μmol•L^-1DHEA组细胞增殖抑制率降低最显著（P<0.05），而DHEAs组差异无显著性（P>0.05）。②BrdU法结果显示，当DHEA浓度在50、100和200 μmol•L^-1时细胞的生长均显著受到抑制，尤其以HepG2细胞的生长抑制率最高（P<0.05）。③DHEA对HepG2细胞HMGR活性抑制率为62%，对HT-29细胞HMGR活性抑制率为51％，而 DHEAs则无明显作用。④100 μmol•L^-1DHEA抑制G6PD的效力为85%，而DHEAs的抑制效力仅为6%。⑤DHEA和DHEAs对细胞LDH的活性影响组间比较差异无显著性（P>0.05）。结论：DHEA对HepG2和HT-29两种肿瘤细胞系均具有较强的抗增殖作用，能明显降低细胞的G6PD或HMGR活性，DHEAs则无明显作用。     

Topiramate对宫内缺血大鼠脑组织含水量及神经细胞凋亡的影响

目的 : 观察topiramate对宫内急性脑缺血损伤的Wistar大鼠神经细胞凋亡及脑组织含水量的影响。方法 : 夹闭足月妊娠大鼠子宫血管，制成急性脑缺血损伤的新生鼠模型(n=315)，随机分为topiramate 1次和5次给药组及缺血组（n=105），另取105只正常Wistar大鼠作为正常对照组。治疗组给予topiramate，观察脑缺血后再灌注3 h、6 h 、24 h、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d海马TUNEL法标记的凋亡神经细胞的变化及生后7 d内脑组织 含水量的变化。结果 ： topiramate 1次组脑组织含水量12和72 h显著低于缺血对照组，topiramate 5次组48和72 h显著低于缺血对照组及topiramate 1次组（P<0.05）；topiramate 1次组24 h、3 d、7 d、21 d 凋亡神经细胞数明显低于缺血对照组，topiramate 5次组3和7 d凋亡神经细胞数明显低于缺血对照组和topiramate1次组（P<0.05）。结论 ： topiramate可以明显减少宫内急性脑缺血后新生大鼠神经细胞的凋亡数目，并可以缩短凋亡持续时间；延缓脑水肿的发生，减轻脑水肿的程度, 并缩短其持续时间,多次给药组的作用明显高于1次给药 组。     

羧基荧光素琥珀酰亚胺酯标记肿瘤细胞及其在细胞毒检测中的价值

目的探讨化学染料羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯（CFDA-SE）标记肿瘤细胞的最佳条件及其在细胞毒检测中的价值。方法用不同浓度的CFDA-SE标记K562（人红白血病细胞）、YAC-1（小鼠淋巴瘤细胞）、A375（人乳腺癌细胞）、MCF-7（人黑色素瘤细胞）不同肿瘤细胞系，并检测其0—24h的荧光强度，观察荧光强度变化的时间动力学，选择CFDA-SE标记细胞的最佳浓度；CFDA-SE标记细胞后孵育时间为1—6h，再用DNA染料碘化丙啶（PI）标记，流式细胞仪分析CFDA-SE和PI双标记细胞，并计算细胞死亡率，研究CFDA-SE对细胞的毒性。CFDA-SE标记时间分别为5、6、7、8、10、15min，测定标记不同时间的荧光强度和细胞的死亡率，选择最佳标记时间；用CFSE在最佳条件下标记靶细胞进行细胞毒检测实验。结果对于不同肿瘤细胞系，CFDA-SE标记的最佳浓度不同；CFDA-SE对细胞没有毒性，死亡率低于5％；最佳标记时间为8min。人外周血单个核细胞和BALB／c鼠脾淋巴细胞对肿瘤细胞K562、YAC-1均表现出杀伤活性，杀伤百分率随效靶比和共孵育时间的增加而增加。最佳效靶比为50：1—25：1，共孵育时间为2—4h。结论CFDA-SE具有标记细胞稳定，能用于细胞培养时间较长的研究，不影响细胞功能，适用于流式细胞仪检测细胞毒实验的优点，是一种很好的标记细胞的荧光素染料。     

HIF-1α治疗家兔肢体缺血模型的实验研究

目的探讨缺氧诱导因子（HIF-1α）基因治疗家兔肢体缺血模型的疗效。方法在家兔缺血模型的肢体内注射携带／HIF-1α基因的重组腺病毒AdHIF-1α，检测HIF-1α基因在缺血肌组织中表达情况，并观察其生物学特点。实验以携带GFP基因的重组腺病毒AdCFP为对照。结果免疫组化染色均检测到H1F-1α的表达。转AdHIF-1d基因治疗组毛细血管计数及小动脉计数均高于AdGFP转导的对照组（P〈0．05）。动脉造影证明基因治疗组促进缺血肢体侧支循环建立更为有效。结论家兔缺血肢体内注射AdHIF-1α能够获得外源基因蛋白质的有效表达，能有效的促进血管生成及侧支循环建立。     

IL—2在小鼠抗弓形虫作用的研究

目的分析IL—2的抗弓形虫作用,并探讨其机制。方法采用3H一尿嘧淀（3H—U）特异性标记弓形虫在小鼠腹腔巨噬细胞（MouseperitonealmacrophageMPM）内的增殖实验及125I-UdR标记的细胞毒实验,观察IL—2在小鼠抗弓形虫中的作用。结果体外应用IL—2对MPM抗弓形虫作用无影响,体内应用IL—2能明显延长急性弓形虫感染小鼠的生存时间（P＜0.05）。IL—2治疗组小鼠脾细胞杀伤肿瘤细胞及弓形虫感染自身靶细胞的能力,明显高于对照组（P＜O.001）;正常小鼠NK细胞及LAK细胞杀伤自身感染弓形虫靶细胞的能力,显著低于杀伤肿瘤细胞的能力（P＜0.001）;IL—2诱导的LAK细胞杀伤自身感染弓形上靶细胞的能力,明显高于NK细胞（P＜0.001）,且与LAK细胞杀伤肿瘤靶细胞的能力无明显差别。结论以上结果表明,IL—2体内应用提高弓形虫感染小鼠生存能力的机制,可能与提高体内LAK细胞杀伤自身感染弓形虫靶细胞的能力有关;NK细胞的抗弓形虫机制,可能在于激活NK细胞产生IFNγ和TNFα等细胞因子,间接作用于巨噬细胞而发挥作用。     

IL-4、IL-6对IFN-γ诱导的小鼠腹腔巨噬细胞抗弓形虫作用的影响

本文以Ｃ５７ＢＬ／６小鼠腹腔巨噬细胞（Ｍｏｕｓｅｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅ,ＭＰＭ）为靶细胞,通过３Ｈ－尿嘧啶（３Ｈ－Ｕ）特异性标记的弓形虫在ＭＰＭ内的增殖实验,研究了ＩＬ－４、ＩＬ－６对ＩＦＮ－γ诱导的ＭＰＭ抗弓形虫作用的影响。结果表明,ＩＬ－４能够部分抑制弓形虫在ＭＰＭ内的增殖,且与ＩＦＮ－γ具有相加作用;ＩＬ－６促进弓形虫在ＭＰＭ内的增殖,且可部分逆转ＩＦＮ－γ诱导的ＭＰＭ抗弓形虫作用;抗ＴＮＦ－α抗体能够逆转ＩＦＮ－γ的抗弓形虫作用,但对ＩＬ－４及ＩＬ－６则无明显影响     

实验性抗磷脂综合征小鼠CD4~+CD25~+调节性细胞及foxp3表达的变化

目的:观察实验性抗磷脂综合征(experimental anti-phospholipid antibody syndrome,EAPS)进展过程中小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)数量和功能变化。方法:以重组人β2糖蛋白1(rhβ2GP1)主动免疫BALB/c小鼠建立实验性APS模型,免疫12周后检测抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2-GP1)、抗心磷脂抗体(ACA)、流产率(%)、活化部分凝血活酶时间(aPTT)、血小板计数(PLT PBC)。以流式细胞术检测小鼠PBMC中CD4+CD25+Treg细胞频率,RT-PCR检测转录因子Foxp3 mRNA的表达水平。结果:模型小鼠anti-β2-GP1、aCL水平明显升高,aPTT延长,PLT PBC降低,流产率提高,差异有统计学意义(P0.05)。模型小鼠PBMC中foxp3基因表达在4周短暂高于对照组(P0.05),8周后随着APS进展开始逐渐降低,12周后明显低于对照组(P0.05)。PBMC中CD4+CD25+Treg细胞频率8周前与对照组相比差异无统计学意义(P0.05),12周后逐渐减少,明显低于对照组(P0.05)。结论:CD4+CD25+Treg数量和功能下降参与抗磷脂综合征的发病机制。