防御素5和LL37真核重组质粒构建及转染人阴道上皮细胞的研究

目的:构建防御素5(HD5)和LL37的真核重组质粒并瞬时转染人阴道上皮细胞,以期探讨阴道上皮细胞抵抗微生物感染的机制.方法:(1)从人阴道上皮细胞中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出HD5和LL37的cDNA,并将其插入真核表达载体pcDNA3.1 (+)-EGFP中、构建重组质粒pcDNA3.1 (+)/HD5-EGFP和pcDNA3.1(+ )/LL37-EGFP.(2)经组织块法原代培养入阴道上皮细胞并传代,将2种质粒分别或联合转染人阴道上皮细胞,转染6、12、24和48 h后,采用荧光显微镜检测细胞转染情况,ELISA方法测定细胞培养上清液中HD5及LL37的表达情况.结果:成功构建了pcDNA3.1( +)/HD5-EGFP和pc DN A3.1(+ )/LL37-EGFP真核表达载体,实现了HD5和LL37在阴道上皮细胞中表达,细胞培养上清中有HD5和LL37蛋白分子表达,且在转染24h时表达量最高.联合转染组的HD5和LL37水平高于单独转染组,单独转染组高于未转染组,差异均有统计学意义(均P＜0.001).LL37组和联合转染组的LL37水平,联合转染组的HD5水平均是6h时分泌最低,24h达高峰,然后呈下降趋势.HD5组的HD5水平随时间增加而呈增加趋势.结论:HD5和LL37成功转染人人阴道上皮细胞并成功表达,为研究重组HD5和LL37的抗菌功能及阴道上皮细胞先天免疫机制奠定了基础.     

P27，P73和CyelinD1蛋白在子宫内膜癌中表达的相关性

目的：探讨P27,P73和CyclinD1在子宫内膜癌组织中的表达及其相关性。方法：采用免疫组化SP法对14例正常增殖期子宫内膜、19例不典型增生内膜以及43例子宫内膜癌组织中P27,P73和CyciinD1蛋白的表达进行研究。结果：在子宫内膜癌中。P27表达降低或缺失,P73和CycJinD1表达明显增高,与正常增殖期子宫内膜和不典型增生内膜相比差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。P27的表达缺失、P73的过表达与组织学分级有关,CyclinD1的高表达与手术一病理分期有关。有肌层浸润者P27,P73和CyclinD1的表达与无肌层浸润者差异均有统计学意义（均P〈0．05）。有淋巴结转移者P73和CyclinD1均明显高表达。子宫内膜癌中,P27与CyclinD1呈负相关（R=-0．3627,P〈0．05）,P73与CyclinD1呈正相关（r=0．3923,P〈0．05）。结论：子宫内膜癌中P27表达缺失,P73和CyclinD1过度表达,联合检测可能成为子宫内膜癌高危人群早期筛查、判断内膜癌的生物学行为及评估预后的参考指标。     

阴道镜检查在宫颈细胞学ASCUS分流管理中的应用

目的探讨电子阴道镜检查在宫颈细胞学意义未明的不典型鳞状细胞(atypical squamous cell of undeter-mined significance,ASCUS)分流管理中的临床应用价值。方法对2006年7月至2008年7月在天津医科大学第二医院门诊行宫颈液基细胞学检查(TCT)结果为ASCUS的471例患者进行电子阴道镜检查,其中203例阴道镜诊断为宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及以上病变者在可疑病变区取活检送病理检查;268例阴道镜检查为正常或慢性宫颈炎者给予阴道用药治疗1~3个疗程,3个月后复查宫颈涂片,4例细胞学仍异常者行阴道镜下取活检送病理检查,余264例细胞学阴性者定期复查宫颈细胞学。结果471例宫颈细胞学AS-CUS患者中,共行活体组织病理学检查207例(43.95%),检出宫颈上皮内瘤样病变(CINⅠ~Ⅲ)131例,宫颈癌4例,余264例避免了宫颈活检损伤,随访6~30个月复查宫颈细胞学均未发现异常。结论电子阴道镜结合宫颈细胞学检查可有效检出宫颈细胞学ASCUS中CIN及宫颈癌患者,可作为基层医院对ASCUS进行有...     

耳针BPS和脐血流速波对妊高征胎儿的监护

对９６例妊高征孕妇应用耳针刺激唤醒儿生物物理活动和彩色和多普勒超声测定胎儿脐血流速波Ｓ／Ｄ值，及脐动脉血ＰＨ监测妊高征胎儿的预后，结果显示：耳针刺激有效者，胎儿生物物理象评分均＞６分，Ｓ／Ｄ值异常仅占１５．２％，胎儿预后不良占６．３％。耳针刺激无效者ＢＰＳ均≤６分，Ｓ／Ｄ值异常高达１００％，胎儿预后不良者占６４．７％，二者有明显区别，提示耳针刺激唤醒胎儿ＢＰＳ和脐动脉血流速波Ｓ／Ｄ值监测妊高征胎儿     

羊水过少胎儿生物物理监护中耳针刺激的效果

羊水过少是常见妊娠并发症，围产儿并发病机率（病率）很高。本文对２０３例羊水过少孕妇应用耳针刺激胎儿生物物理象（ＢＰＳ）进行再次综合评价，降低了胎心无负荷试验（ＮＳＴ）的假无反应率，唤醒了生理休眠状态的胎儿，降低了以胎儿宫内窘迫为指征的剖宫产率。试行对部分羊水过少耳针刺激有效者，在严密产程观察下引产阴道试产，剖宫产率由９２％降至５８％，围产儿病率３％（６／２０３），无围产儿死亡。     

术中冰冻切片对卵巢肿瘤诊断的临床意义

目的：评价卵巢肿瘤手术中冰冻切片诊断的临床意义。方法：回顾分析我科1996年－1999年90例卵巢肿瘤术前冰冻诊断和与术后石蜡切片诊断的符合情况,并分析误诊原因。结果：术中冰后片与术后石蜡切片诊断的符合率为98．8％。结论：讨论影响术中冰冻切诊断的原因,强调病理医师与临床医师合作的重要性。     

人血管内皮抑素腺相关病毒载体包装质粒0pSNAV-hEndostatin-CMV-EGFP的构建

目的:构建人血管内皮抑素(Endostatin)腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)载体包装质粒pSNAV-hEndostatin-CMV-EGFP.方法:采用分子克隆技术,从pCD-sEndostatin质粒获得hEndostatin cDNA,并将PCR扩增产物插入至AAV包装质粒pSNAV上,构建pSNAV-hEndostatin-CMV-EGFP的AAV重组质粒,经PCR、酶切及测序鉴定.结果:经PCR、酶切鉴定及基因测序证实AAV包装质粒pSNAV-hEndostatin-CMV-EGFP构建成功.结论:构建的AAV包装质粒pSNAV-hEndostatin-CMV-EGFP可作为rAAV-hEndostatin-EGFP表达载体的包装质粒.     

干扰素γ与子宫内膜异位症

子宫内膜异位症（EMs）是生育期妇女常见的良性疾患。发病率逐年增加。EMs的病因尚未完全明确。研究发现EMs患者腹腔液中的免疫细胞的变化最为明显．多种免疫细胞及因子的改变，对异位内膜的黏附、种植、增殖等各环节均起重要作用。干扰素（IFN）作为一种最早被发现的细胞因子，在人体免疫系统中起重要的调节作用。IFN-γ通过对各种免疫细胞、细胞因子及基因的调节在EMs的发生发展中起重要的作用。     

宫颈脱落细胞中hTERC 基因和宫颈病变的关系*

目的：探讨在各级宫颈病变中人类端粒酶hTERC 基因的扩增情况,与宫颈脱落细胞学诊断及活检组织的病理诊断关系。方法：应用双色间期荧光原位杂交技术（FISH）检测各级别宫颈病变脱落细胞标本中hTERC 基因的扩增情况,其中正常对照20例,宫颈病变患者共100 例;并将FISH检测结果与脱落细胞学及组织病理学诊断结果比较。结果：hTERC 基因扩增的比例随宫颈细胞学诊断的分级增加,NILM、ASC-US、LSIL 、HSIL、SCCA 各组分别为（8.22± 4.34）、（ 10.54± 4.12）、（ 12.21± 4.29）、（ 18.62±5.74）、（ 18.33± 4.73）,低级别病变与高级别病变之间比较差异有统计学意义（P<0.05）。 宫颈活检组织CIN Ⅰ组、CIN Ⅱ组、CIN Ⅲ组、宫颈癌组和正常对照组发生hTERC 基因扩增的细胞比例分别为（8.56± 3.14）、（ 11.61± 4.10）、（ 14.86± 3.11）、（ 21.44± 5.55）和（4.11± 1.71）,hTERC 基因扩增的比例随宫颈上皮内病变程度的升高而增加,差异有统计学意义（P<0.01）。 结论：FISH技术可以检测宫颈脱落细胞中hTERC 基因的扩增状态;hTERC 基因扩增随宫颈病变的严重程度而增加。FISH检测hTERC 基因的扩增可作为对宫颈细胞形态学及分子细胞遗传学检查的补充。