顺铂对人子宫内膜癌RL-952细胞系Matriptase,uPA-mRNA表达的影响

目的探讨顺铂对人子宫内膜癌RL-952细胞系Matriptase,uPA-mRNA表达的影响。方法体外培养人子宫内膜癌RL-952细胞,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测顺铂对人子宫内膜癌RL-952细胞Matriptase,uPA-mRNA表达的影响。结果 Matriptase,uPA-mRNA在人子宫内膜癌RL-952细胞系呈阳性表达。顺铂可下调Matriptase,uPA-mRNA在人子宫内膜癌RL-952细胞系的表达,具有浓度依赖性。8mg/L顺铂溶液作用不同时间后,4h后RL-952细胞Matriptase-mRNA表达量即明显下降(P0.05),而uPA-mRNA表达量于作用8h后才开始下降(P0.05),具有时间依赖性。结论顺铂可抑制人子宫内膜癌RL-952细胞系Matriptase,uPA-mRNA的表达,并具有浓度依赖性。8 mg/L的顺铂作用于人子宫内膜癌RL-952细胞后,Matriptase-mRNA比uPA-mRNA更早出现表达下调的变化。     

雌、孕激素对子宫内膜癌细胞孤儿受体ERRα的调控作用

目的:探讨孤儿受体ERRα与雌激素(E)、孕激素(P)之间的相互关系及其在子宫内膜癌发病中的作用.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测不同浓度(10-10,10-8,10-6mol/L)17β-雌二醇(17β-E2)作用于Ishikawa细胞系不同时间(0 min,15 rmin,30 min和24 h)后ERRα mRNA的变化,并应用ER拮抗剂ICI182780同时作用细胞,观察是否可阻断E2对ERRα的调控作用;检测不同浓度孕酮(10-8,10-7,10-6,10-5mol/L)作用于Ishikawa细胞系24 h后ERRα mRNA的变化.结果:10-10mol/L 17β-E2作用于Ishikawa细胞系15 min,30 min及24 h后ERRα mRNA水平与未加E2相比均稍有增加,而10-8,10-6mol/L 17β-E2作用于细胞系15 min,30 min及24 h后ERRα mRNA明显减小,以10-8mol/L作用后减少最明显.同时加入E2和ICI182780作用于细胞系后,E2对ERRα mRNA的减小作用被阻断.10-8mol/L孕酮作用于细胞系24 h后,ERRα mRNA与对照组相比无明显变化,但加入10-7,10-6和10-5mol/L孕酮后,ERRα mRNA表达均出现明显增加.结论:17β-E2可减少子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞ERRα mRNA的表达,此减少作用是通过ER介导完成的.孕酮可增加ERRα mRNA的表达.     

人雌激素受体相关受体逆转录病毒载体的构建及鉴定

目的 构建人雌激素受体相关受体α(hERRα)逆转录病毒载体。方法 用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切pSG-hERRα质粒和pLXSN空白质粒，采用凝胶DNA回收方法回收纯化hERRα片段，用T4连接酶进行连接反应，构建成PLXSN-neo-hERRα重组体。结果 经PCR、酶切鉴定、测序等对重组体进行鉴定，证实构建的重组体方向、序列正确。结论 已成功构建hERRα逆转录病毒载体，为研究hERRα的功能奠定了基础。     

卵巢恶性肿瘤端粒酶活性与C-myc基因mRNA表达的研究

目的　研究端粒酶活性、C -myc基因在卵巢恶性肿瘤中的表达和相互关系。方法　在卵巢恶性肿瘤、交界性肿瘤、良性肿瘤和正常卵巢组织中 ,采用PCR -ELISA方法检测端粒酶活性 ,RT -PCR方法检测C -myc基因的mRNA表达。结果　恶性卵巢肿瘤端粒酶活性值及阳性率 (91 30 % ) ,明显高于交界性卵巢肿瘤(2 0 0 0 % ,P <0 0 1 )、良性卵巢肿瘤 (7 1 3% ,P <0 0 1 )和正常卵巢 (0 0 0 % ,P <0 0 1 )。交界性卵巢肿瘤端粒酶表达率与后两者的端粒酶活性表达率也存在显著差异 (P <0 0 1 ) ;卵巢良性肿瘤与正常卵巢组织之间端粒酶活性无差别 (P >0 0 5 )。端粒酶活性值在恶性卵巢肿瘤Ⅲ、Ⅳ期明显高于Ⅰ、Ⅱ期 (P <0 0 5 ) ;分化程度低者高于分化高者 (P <0 0 5 ) ;但在组织类型和组织起源上差异无显著性 (P >0 0 5 )。恶性卵巢肿瘤组织中端粒酶活性值明显高于癌旁组织 (P <0 0 5 )。端粒酶阳性率在恶性卵巢肿瘤临床分期、组织类型和组织起源上均无差异 (P >0 0 5 )。利用RT -PCR检测C -myc基因的表达 ,发现 1 2例 (5 2 1 7% )恶性卵巢肿瘤C -myc基因有mR NA表达 ,而在良性、交界性和正常卵巢组织中均未见表达。C -myc基因阳性组端粒酶活性值显著高于阴性组。结论　端粒酶活化可以作为恶性肿瘤的分子生物     

雌孕激素对子宫内膜癌细胞中IGFs表达的调控

目的　通过体外研究雌、孕激素对IGF - 1、IGF -IR以及IGFBP - 1表达的影响 ;探讨糖尿病与子宫内膜癌的关系 ,并为激素依赖性子宫内膜癌的治疗提供思路。方法　运用蛋白免疫印迹技术分别检测雌激素 (E2 )和孕激素 (P)在不同浓度和不同时间作用后对子宫内膜腺癌细胞系Ishikawa细胞中IGF - 1、IGF -IR以及IGFBP - 1表达的影响。结果　①在Ishikawa细胞中IGF - 1、IGF -IR和IGFBP - 1蛋白表达均为阳性。②E2可使癌细胞中IGF - 1和IGF -IR表达增强 ,在E2 浓度为 1 0 -8M时作用最强 ,IGF - 1和IGF -IR表达量约可达刺激前 2 5倍 (2 2 5± 0 1 0 ,1 89± 0 0 2 )。E2 浓度为 1 0 -8M时 ,作用 2 4h后IGF - 1表达最高 (2 4 9± 0 0 3) ;作用4 8h后IGF -IR表达最高 (2 2 9± 0 0 3)。③P可使癌细胞中IGFBP - 1表达增强。当P的浓度为 1 0 -6M时IGFBP- 1表达最强 :IGFBP - 1表达强度可达刺激前的 1 8倍 (2 6 6± 0 0 4 ) ,此浓度作用 2 4h后IGFBP - 1表达最强(2 98± 0 0 3)。结论　雌激素可促进子宫内膜癌细胞分泌IGF - 1和IGF - 1R ,孕激素可上调子宫内膜癌细胞的IGFBP - 1 ,且二者均有时间和浓度依赖性     

卵巢恶性肿瘤细胞端粒酶表达和hTERT基因，c—myc基因的调控

目的　研究端粒 (TL M)在卵巢恶性肿瘤中的表达和相互关系。　方法　 (1)采用 PCR- EL ISA半定量方法研究端粒酶活性在卵巢恶性肿瘤、癌旁组织、交界性肿瘤、良性肿瘤、正常卵巢及卵巢肿瘤细胞株的表达情况。(2 )采用 RT- PCR方法检测人端粒酶逆转录酶 (h TERT)基因 m RNA和 c- myc基因m RNA在上述标本中的表达情况 ,分析端粒酶活性、h TERT基因、c- myc基因间的关系。(3)用顺铂对卵巢肿瘤细胞株 HO-8910、COC1 进行处理 ,同步检测 h TERT和 c- myc基因 m R-NA、端粒酶活性表达情况 ,分析 h TERT和 c- myc基因 m R-NA水平改变与端粒酶活性的相互影响。　结果　 (1)卵巢良性肿瘤组织与正常卵巢端粒酶活性差别无显著性 (P>0 .0 5 ) ,正常卵巢端粒酶活性 0 .2 2为上限 (0 .2 13± 0 .0 70 ,可信区间97.5 % ) ,恶性卵巢肿瘤组织端粒酶活性表达率 91.30 % ,明显高于交界性卵巢肿瘤组织 2 0 .0 0 % (P<0 .0 1)、良性卵巢肿瘤组织 7.13% (P<0 .0 1)和正常卵巢 0 (P<0 .0 1)。交界性卵巢肿瘤组织端粒酶活性表达率与后两者差异具有显著性 (P<0 .0 1)。端粒酶活性值在恶性卵巢肿瘤组织表达中临床分期 、 期明显高于 、 期 (P<0 .0 5 ) ,分化程度低者高于分化高者 (P<0 .0 5 ) ,恶性卵巢肿瘤组织端粒酶活性明显高     

两种不同人乳头瘤病毒检测方法对子宫颈上皮内病变筛查价值的比较

目的比较酶切信号放大法高危型HPV检测(enzyme digestion signal amplification method in detection of HR-HPV,称为Cervista法)和PCR反向点杂交法HPV检测(PCR-RDB)对宫颈病变的筛查价值。方法从宫颈癌筛查患者中选取319例宫颈液基细胞学检测(TCT)异常(≥ASCUS)和319例同期同年龄段TCT正常患者作为研究对象,并同时进行Cervista、PCR-RDB HPV检测。TCT异常和(或)高危型HPV阳性者均进一步行阴道镜下活检。以病理结果为金标准,比较两种方法结果的一致性、敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值,同时计算宫颈上皮内病变组HPV阳性人数与HPV阴性人数比值和宫颈正常组HPV阳性人数与HPV阴性人数的比值比(OR)。结果两种方法对14种高危型HPV的检测结果一致率85.6%(546/638),KI值为0.708。Cervista诊断低级别宫颈上皮内病变(CIN1)和高级别宫颈上皮内病变(CIN2+)的敏感性分别为85.7%和93.0%,PCR-RDB诊断CIN1和CIN2+的敏感性分别为92.9%和95.5%。Cervista高危型HPV阳性时患CIN1和CIN2+的OR值分别为14.207(95%CI:5.048~39.984)和18.078(95%CI:8.284~39.449),Cervista A9组HPV阳性时患CIN1和CIN2+的OR值分别为15.832(95%CI:5.296~47.327)和32.031(95%CI:14.356~71.470)。PCR-RDB高危型HPV阳性时患CIN1和CIN2+的OR值分别为9.685(95%CI:4.854~19.323)和20.705(95%CI:10.901~39.328),PCR-RDB HPV16阳性时患CIN1和CIN2+的OR值分别为11.909(95%CI:3.768~37.640)和86.864(95%CI:39.087~193.039)。两种HPV检测方法对ASCUS患者发生CIN1和CIN2+的诊断敏感性均分别为86.7%和91.3%。Cervista与TCT联合筛查对CIN1和CIN2+的诊断敏感性分别为99.1%和99.4%,特异性分别为51.5%和45.3%。PCR-RDB与TCT联合筛查对CIN1和CIN2+的诊断敏感性均为100%,特异性分别为38.3%和33.5%。结论两种HPV检测方法结果一致性良好。除PCR-RDB方法对CIN1筛查敏感性略高于Cervista外,两种HPV检测方法对CIN2+的筛查价值相当。     

微小RNA在妇科肿瘤中的研究进展

微小RNA（microRNA,miRNA）是一类在动植物中广泛存在的内源性21~25个核苷酸的短序列、高度保守的小分子非编码RNA。这类分子调节基因的表达,参与细胞分化、增殖和凋亡,肿瘤的发生、DNA甲基化及染色质改变等一系列的重要进程。综述miRNA的生物合成、作用机制及在妇科肿瘤中的一些研究进展。     

广泛性子宫切除手术前、后近期下尿道功能的改变

广泛性子宫切除手术（Ⅲ型扩大子宫切除术）是目前治疗宫颈癌、子宫内膜癌等妇科恶性肿瘤的一种标准术式。膀胱功能障碍是该术式的常见术后并发症,其原因尚不明确。目前国内外对广泛性子宫切除术前、术后尿动力学数据的报道尚不多见,且报道的研究例数有限。     

利用寡核苷酸微阵列芯片分析ERRα过度表达对子宫内膜癌HEC-1A细胞转录因子活性的影响

目的:讨论过度表达雌激素受体相关受体(ERRα)对子宫内膜癌细胞HEC-1A中不同转录因子转录活性的影响。方法:构建带有绿色荧光蛋白和G418耐药基因筛选标记的真核表达质粒pEGFP-N1-3FLAG-ERRα,将质粒转染子宫内膜癌细胞株HEC-1A,荧光显微镜下检测并通过G418高浓度筛选、低浓度维持建立ERRα稳定高表达的子宫内膜癌细胞株HEC-1A/ERRα。分别抽提子宫内膜癌细胞HEC-1A、转染质粒空载体的HEC-1A/空载体细胞,ERRα过度表达的HEC-1A/ERRα细胞的核蛋白。将核蛋白与CY3、CY5双色标记的326检测信号通道的转录因子芯片(寡核苷酸微阵列芯片)杂交并通过双色共聚焦激光扫描仪分析。结果:转染ERRα真核表达质粒后,与HEC-1A细胞和转染载体的HEC-1A/空载体细胞对比,子宫内膜癌细胞HEC-1A/ERRα中ERRα的mRNA和蛋白表达明显增加。HEC-1A-ERRα细胞株与HEC-1A/空载体细胞株转录因子活性比较显示7个转录位点的活性发生显著改变,其中调控SREBP,AP-1,c-Myc,Usf-1/2转录因子的结合位点活性下调,而调控RFX-1,PPAR-α,PPAR-γ的转录因子的结合位点活性上调。而在HEC-1A/空载体细胞株和HEC-1A细胞株中未检出上述7种转录因子的差异表达。结论:①寡核苷酸微阵列芯片是一种有效的筛选转录因子的工具;②ERRα过度表达下调子宫内膜癌细胞HEC-1A中转录因子SREBP,AP-1,c-Myc,Usf-1/2的转录活性,上调RFX,PPARα,PPARγ的转录活性。