遗传法检测和噬菌斑杂交法鉴定cDNA表达库的比较

遗传法检测和噬菌斑杂交法鉴定ｃＤＮＡ表达库的比较南京医学院王黎熔，林敏，姜传仓，冯笑川，周作民，胡志刚，沙家豪关键词ｃＤＮＡ表达，噬菌斑杂交法鉴定ｃＤＮＡ表达库构建是否成功的一个重要指数是重组率，常规的测定是用遗传检测法，为能更精确地反映出我们所构建...     

精子发生相关基因DYS1的分析

用ＰＣＲ方法检测了核型正常（４６，ＸＹ）的９５例无精子症患者和３５例严重少精子症患者基因组ＤＮＡ中的ＤＹＳ１，发现４例无精子症患者有ＤＹＳ１的丢失，严重少精子患者中发现３例有ＤＹＳ１的丢失。结果表明：应用ＰＣＲ法检测ＤＹＳ１基因片段是切实可行的，对无精子症和严重少精子症患者的病因诊断具有一定的应用价值。     

半定量PCR比较正常小鼠和Tfm小鼠Leydig细胞17α－羟化酶mRNA的水平

本研究运用反转录合成ｃＤＮＡ和半定量ＰＣＲ的方法，测定了正常小鼠和Ｔｆｍ小鼠Ｌｅｙｄｉｇ细胞中１７α－羟化酶ｍＲＮＡ／β－肌动蛋白ｍＲＮＡ的比值，以比较二者睾丸Ｌｅｙｄｉｇ细胞中１７α－羟化酶ｍＲＮＡ的水平。结果显示：１．正常小鼠Ｌｅｙｄｉｇ细胞的１７α－羟化酶和β－肌动蛋白ｃＤＮＡ的ＰＣＲ扩增指数期均在２８个循环时完成，Ｔｆｍ小鼠的β－肌动蛋白ｃＤ－ＮＡ的ＰＣＲ扩增指数期在２８个循环完成，而１７α－羟化酶ｃＤＮＡ的ＰＣＲ扩增指数期直至３２个循环仍没完成；２．在指数期时，正常小鼠Ｌｅｇｄｉｇ细胞中１７α－羟化酶ｃＤＮＡ／β－肌动蛋白ｃＤＮＡ为４．２８±０．８８，Ｔｆｍ小鼠为０．０７９±０．０４；正常小鼠１７α－羟化酶ｍＲＮＡ的水平高于Ｔｆｍ小鼠５４．１８倍。结果进一步证实Ｔｆｍ小鼠Ｌｅｙｄｉｇ细胞１７α－羟化酶ｍＲＮＡ水平低下是导致该酶活性降低的根本原因。     

不育患者精子DNA断裂指数与精子质量参数的相关性分析

随着精子发生过程研究的深入,精子生成过程中DNA的损伤越来越受到重视,已有研究表明,精子中DNA损伤与受精和早期胚胎发育相关,但精子DNA损伤与精子质量参与的关系研究甚少,特别是精子质量参数正常的患者是否可能存在精子DNA的异常尚未见报道.     

精子蛋白质组的研究进展

蛋白质组学及其技术是新世纪最具有价值的生命科学研究手段之一。它标志着生命科学已经进入了后基因组时代。双向凝胶电泳和质谱分析方法在蛋白质组学中的成功运用,创造出更受研究者欢迎的新研究策略,并提高了研究者探索未知领域的效率。将其运用在精子蛋白质的研究后,已经取得了不少令人惊喜的成果。本文在简要概括蛋白质组及蛋白质组学的相关信息后,着重介绍近年全精子蛋白的研究情况,获能相关精子蛋白,精卵结合相关精子蛋白,以及蛋白质组学及技术在精子免疫方面的研究与应用。     

mRNA差异显示法克隆小鼠精子发生相关基因p38MAPK基因

目的：克隆1、2、3、4周龄小鼠睾丸之间差异表达的基因。方法：应用改良的mRNA差异显示技术,对1、2、3、4周龄小鼠睾丸进行基因表达的差异显示分析,并对其中1个从2周龄小鼠中高表达的cDNA片段进行了克隆和测序。结果：所克隆的cDNA片段与小鼠大脑、造血干细胞p38MAPK（p38beta mitogen-activated protein knase,p38MAPK-β）基因的同源性分别为91％和85％.Northern dot blot结果显示该基因在小鼠睾丸和脑组织 中表达最高。结论：小鼠p38MAPK基因基因可能与小鼠精子发生相关。     

无精子症配偶宫颈粘液内的抗精子抗体分析

目的：研究无精子症男子配偶宫颈粘液中的抗精子抗抗体。方法：应用ＥＬＩＳＡ方法检测宫颈粘液中的抗精子抗体。结果：４００例有精子男子配偶中９２例为抗精子抗体阳性（２３％），２００例无精了症男子配偶中４２例为抗精子抗体阳性（２１％），两组比较差异不显著。结论：无精子症病人配中抗精子抗体的产生可能是精浆中的精子吸附怕的结果。     

mRNA差异显示法筛选小鼠精子发生相关基因

目的筛选小鼠精子发生相关基因。方法应用改良的mRNA差异显示技术对1、2、3、4周龄小鼠睾丸进行了基因表达的差异显示分析,并对差异表达的cDNA片段进行了克隆和测序。结果获得了27个在不同周龄小鼠睾丸组织存在明显表达差异的基因片段,其中3个片段分别与Genbank中已知基因LTBP-3、rjs、P38 MAPK基因高度同源,其余基因片段为无同源序列的新基因片段。结论上述结果表明精子发生是一个多基因参与的过程,筛选出的这些基因可能在精子发生的不同阶段调控着精子发生的全过程。     

一种从总RNA制备非放射性cDNA探针的方法

目的介绍一种从总ＲＮＡ制备ＤＩＧ标记的非放射性ｃＤＮＡ探针的方法。方法以总ＲＮＡ的反转录产物为模板,用随机引物延伸法掺入ＤＩＧ－１１－ｄＵＴＰ来制备ｃＤＮＡ探针。结果该方法标记的探针灵敏度较高,可达０．０１ｇｐ。结论这种ｃＤＮＡ探针可用于差异筛选的反向杂交及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交。