Hint1基因抑制HepG2细胞AP-1转录因子活性的实验研究

目的 探索体外过表达Hint1基因对人肝肿瘤HepG2细胞AP-1转录因子活性的影响.方法 分子克隆获得Hint1基因序列,构建pHA-Hint1重组融合基因表达载体.阳离子脂质体介导,pHA-Hint1转导人肝母细胞瘤HepG2细胞,RT-PCR和Western blot检测HepG2细胞中外源HA-Hint1表达.pHA-Hint1质粒、启动子荧光素酶报告质粒AP-1/Luc及巨细胞病毒-β-半乳糖酶报告质粒(β-gel)共转导HepG2细胞.36 h后测定荧光素酶活性及β-gel活性.结果 重组质粒经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切,获约100 bp特异条带,测序证实成功构建pHA-Hint1表达载体.pHA-Hint1及空载体pcDNA3/HA转导HepG2细胞,半定量RT-PCR结果显示pHA-Hint1组Hint1mRNA表达高于空载体组(t=3.89,P<0.05);Western blot结果显示pHA-Hint1组HA标签蛋白表达高于空载体组(t=3.12,P<0.05).AP-1转录因子活性检测结果:pHA-Hint1终浓度为0 μg/ml,0.5 μg/ml,1.0 μg/ml,1.5 μg/ml,2.0 μg/ml时,AP-1转录因子相对活性(106)为:5.12±0025、4.24±0.74、3.43±0.31、2.62±0.48、2.09±0.21.随着pHA-Hint1浓度增加,荧光素酶活性呈明显下降,当pHA-Hint1浓度达到1.5 μg及2.0 μg时,差异有统计学意义(F=72.009,P<0.05).结论 过表达Hint1基因可抑制HepG2细胞AP-1转录因子活性.     

酒精性肝病啮齿动物模型建立的研究进展

酒精性肝病（alcoholic liver disease, ALD）是全世界最常见的肝脏疾病之一,由于长期酗酒引起肝脏发生一系列病理改变,最终导致肝脏疾病的发生,且发病率逐年上升。目前,酒精性肝病的发生机制及病理研究已经取得了显著进展,但ALD的相关机制并未研究透彻,需要通过改进目前现有的动物模型或建立一种新的更全面的ALD动物模型去模拟人类ALD。ALD的实验动物模型,特别是啮齿类动物,已被广泛用于模拟人类ALD,理想的酒精性肝病啮齿动物模型将有效地模拟酒精对人类肝脏的方方面面。但到目前为止,常用的动物模型都存在一定缺陷,还没有一个完整的动物模型能够模拟人类ALD。本文对ALD发病机制、ALD啮齿动物模型建立的相关方法及其影响因素进行了综述,为相关科研人员建立ALD啮齿动物模型提供理论依据。     

两种不同的左心耳形态分型方法与非瓣膜性心房颤动患者左心耳血栓形成和/或自发超声显影的关系

目的 探究两种不同的左心耳(LAA)形态分型方法与非瓣膜性房颤患者LAA血栓形成和/或自发超声显影(LAAT/SEC)的关系,并比较两种LAA分型方法的异同。方法 连续纳入2011年1月至2020年5月在中山大学孙逸仙纪念医院确诊为非瓣膜性房颤拟行射频消融治疗的住院患者485例,年龄为(61.4±10.1)岁,女性占比38.8%。所有患者入院前无常规抗凝治疗,射频消融术前均行经食管心脏超声和肺静脉CT检查。将所有患者根据经食管心脏超声检查结果分为LAAT/SEC组(78例,16.1%)及非LAAT/SEC组(407例,83.9%)。收集所有患者的临床资料及传统LAA分型、LAA-L/H分型等LAA相关指标。比较两种LAA分型的关系及其与LAAT/SEC的关系。结果 在485例患者中,LAA-L/H分型分为LAA-L型55例(11.3%)和LAA-H型430例(88.7%);传统LAA分型分为鸡翅型157例(32.4%)、风向标型88例(18.1%)、仙人掌型57例(11.8%)、菜花型183例(37.7%)。非LAAT/SEC组鸡翅型(149例,36.6%)较LAAT/SEC组(8例,...     

siRNA沉默CEACAM1基因对人胶质瘤SHG44细胞生物学行为的作用

目的 探讨CEACAM1基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对胶质瘤SHG44细胞增殖、体外迁移和侵袭能力的影响. 方法 设计并化学合成针对CEACAM1的3对siRNA,脂质体法瞬时转染SHG44细胞.Western blot检测转染后细胞中CEACAM1、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达水平变化.CCK-8法检测转染后的细胞增殖情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期的变化.通过Transwell小室迁移和侵袭实验,观察下调CEACAM1对SHG44细胞体外迁移和侵袭能力的影响.结果 三组特异性siRNA转染48 h后,Western blot的结果显示,3个siRNA转染组CEACAM1蛋白水平均低于正常对照组和阴性对照组(P＜0.01),以CEACAM1-siRNA3干扰效果最为明显.后续实验表明,与两个对照组相比较,CEACAM1-siRNA组的细胞增殖减慢,β-catenin和Cyclin D1表达水平明显减少(P＜0.05).Transwell小室迁移和侵袭实验表明CEACAM1下调后的SHG44细胞迁移和侵袭能力较正常对照组及阴性对照组明显降低(P＜0.05). 结论 CEACAM 1-siRNA能有效抑制人胶质瘤SHG44细胞CEACAM1蛋白的表达,并抑制细胞增殖,降低细胞的体外迁移及侵袭能力.     

中药复方防治脑梗死机制研究进展

脑梗死是临床常见性、多发性脑血管病,现代医学多以超早期溶栓、神经细胞保护、介入和外科手术等治疗为主,虽然近期疗效显著,但无法避免的副作用及严格的治疗准入条件使其临床应用大受限制。中医学整体审察、辨证论治的诊疗观以及复方多靶点、多环节、多途径、网络整合调节的治疗特点,在脑梗死防治方面有着不可或缺的优势。基于此,本文拟从抗氧自由基损伤、抑制凋亡基因激活、促进血管内皮生长及神经再生等方面系统综述中药复方治疗脑梗死的作用原理,以期为中医药防治缺血性脑血管疾病提供部分科学循证依据。     

益气扶正中药对非小细胞肺癌化疗患者增效减毒作用的临床研究

目的观察益气扶正中药对非小细胞肺癌化疗患者增效减毒作用的影响。方法选取晚期非小细胞肺癌患者80例,随机将其分为两组,对照组予以西医常规化疗方法进行治疗,观察组在西医常规化疗基础上联合益气扶正中药治疗,28 d为1个疗程,连续观察2个疗程。观察两组患者的临床疗效,生活质量,毒副反应,测定治疗前后免疫学指标。结果两组患者治疗后疗效比较差异有统计学意义(P0.05),观察组患者生活质量改善情况明显优于对照组(P0.05),不良反应发生率明显少于对照组(P0.05),免疫学指标改善情况明显优于对照组。结论益气扶正中药对非小细胞肺癌化疗患者临床疗效显著,值得在临床进一步推广。     

断流分流联合手术前后血浆NO和血管紧张素II的水平

目的 :探讨门静脉高压症贲门周围血管离断并脾 肾静脉分流联合手术前后血浆NO和血管紧张素Ⅱ (AgⅡ )水平变化的意义 .方法 :门脉高压患者 36例 ,对照组 4 0例 .术前 1d和术后 7d抽取晨空腹静脉血用荧光检测法测定NO ,放射免疫分析法测定AgⅡ .结果 :肝硬化门脉高压患者术前NO(μmol·L-1)及AgⅡ (μg·L-1)含量分别为 7.4± 0 .4 ,12 1±37,较对照组 3.6± 0 .4 ,32± 11显著升高 (P <0 .0 1) ;断流分流联合手术后 7dNO ,AgⅡ分别为 5 .8± 0 .4 ,6 8± 30 ,与术前比均有显著降低 (P <0 .0 1) ,但仍高于对照组 (P <0 .0 5 ) .结论 :NO ,AgⅡ的变化在肝硬化门脉高压症的形成过程中起着重要作用 ;贲门周围血管离断并脾 肾静脉分流联合手术能有效降低血浆NO和AgⅡ水平 ,促进肝功能的恢复     

腹腔镜下行肝切除术对患者术后血清皮质醇及细胞免疫能力的影响

目的探究腹腔镜下行肝切除术对患者术后血清皮质醇及细胞免疫能力的影响。方法回顾性分析2016年1月-2016年12月我院行肝切除术患者68例临床数据资料,根据手术方案的不同分为腹腔镜组(n=36)与开腹组(n=32),比较两组患者术后恢复指标(术后进食时间、住院总时间等),观察两组患者术前、术后1、2、3d血清皮质醇、外周淋巴细胞亚群(CD3~+、CD4~+、CD8~+)变化。结果腹腔镜组患者术后首次进食时间、总住院时间明显短于开腹组的(P0.05),两患者术后并发症发生率比较,差异无统计学意义(P0.05);两组患者术后1、2d血清皮质醇水平均高于术前(P0.05),而腹腔镜组患者术后3d皮质醇水平与术前相当(P0.05),开腹组患者术后1、2、3d血清皮质醇水平均高于腹腔镜组的(P0.05);两组患者术后1d的CD3~+、CD4~+均低于术前(P0.05),腹腔组患者术后第2、3d CD3~+、CD4~+与术前比较,差异无统计学意义(P0.05),两组患者术后CD8~+与术前比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论腹腔镜下行肝切除术较传统开腹手术对患者血清皮质醇、细胞免疫能力影响更小,有助于患者术后康复。     

巴林特小组结合“角色扮演”活动在神经重症监护室护士中的应用

目的探讨巴林特小组结合"角色扮演"活动在神经重症监护室(neurological intensive care unit,NICU)护士中的应用方法及效果。方法 2017年1-6月,便利抽样法发选择海军军医大学长海医院NICU的12名护士为研究对象,12名护士成立巴林特小组,共开展12次巴林特小组结合"角色扮演"活动。采用护士工作压力源量表、中文版护士职业倦怠量表(nursing burnout scale,NBS)在活动前后对护士进行评价并比较。结果活动后,NICU护士工作压力源量表的总分及时间与工作量、患者护理、管理与人际关系维度的得分均低于活动前,差异均有统计学意义(均P0.05);NBS量表的情绪衰竭、个人成就感维度得分及职业倦怠的发生率均低于活动前,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论巴林特小组结合"角色扮演"活动,可有效减轻NICU护士的工作压力,缓解其职业倦怠。     

circPUM1通过调控miR-524-5p表达对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环状RNA PUM1(circPUM1)对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结肠癌组织、癌旁组织中circPUM1、微小RNA-524-5p(miR-524-5p)的表达量。体外培养人结肠癌细胞株SW620,分别将si-NC、si-circPUM1、miR-NC、miR-524-5p mimics、si-circPUM1与anti-miR-NC、si-circPUM1与anti-miR-524-5p转染至SW620细胞。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证circPUM1是否能够结合miR-524-5p;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达量。结果结肠癌组织circPUM1的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),miR-524-5p的表达水平显著降低(P<0.05);干扰circPUM1表达或miR-524-5p过表达后,细胞活力显著降低(P<0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05),p21、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实circPUM1可靶向结合miR-524-5p的作用位点;抑制miR-524-5p表达可减弱干扰circPUM1表达对SW620细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的作用。结论circPUM1可通过海绵吸附miR-524-5p促进结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭,抑制细胞凋亡。