神经干细胞移植数量对大鼠神经病理性痛的影响

目的 探讨神经干细胞(NSGs)移植数量对大鼠神经病理性痛的影响.方法 取出生1～3 d的SD大鼠,制备NSCs悬液.清洁级雄性SD大鼠84只,体重150～180 g,采用右侧坐骨神经半切断法制备大鼠神经病理性痛模型.采用随机数字表法,将大鼠随机分为7组(n=12),假手术组(S组):仅暴露坐骨神经,不切断,鞘内注射细胞培养液30 μl;神经病理性痛组(NP组):于模型制备后3d鞘内注射细胞培养液30 μl;NP+NSCs 103组(N1组)、NP+NSCs 104组(N2组)、NP+NSCs 105组(N3组)、NP+NSCs 106组(N4组)和NP+NSCs 107组(N5组):于模型制备后3 d,鞘内注射相应浓度的NSCs悬液.模型制备前1 d和制备后1、3.7、14和21 d时测右足机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL);于模型制备后7和21 d,痛阈测定结束后,取右侧腰膨大脊髓背角及L5背根神经节,测定脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA及其蛋白的表达水平.结果 与S组比较,NP组和N1～5组MWT降低,TWL缩短,脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达上调(P<0.05),BDNF阳性细胞数增多,染色加深;与NP组比较,N2～5组MWT升高,TWL延长,脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达上调(P<0.05),BDNF 阳性细胞数增多,染色加深;模型制备后7 d N1～5组MWT依次升高,TWL依次延长,脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达依次上调(P<0.05),BDNF阳性细胞数依次增多,染色逐渐加深;模型制备后14、21d,N1～3组MWT依次升高,TWL依次延长(P<0.05),模型制备后21 d,N1～3组脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达依次上调,BDNF阳性细胞数依次增多,染色逐渐加深;N3～5组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 NSCs移植减轻大鼠神经病理性痛的适宜移植数量为105个.

Abstract：

Objective To investigate the effect of intrathecal (IT) transplantation of different quantities of neural stem cells (NSCs) on neuropathic pain (NP) in rats.Methods Eighty-four adult pathogen-free male SD rats weighing 150-180 g were randomly divided into 7 groups ( n = 12 each) : group sham operation (S group) , NP group, NP+ NSCs 103 , 104 , 105 , 106 , 107 groups (N1-5 groups) . NP was induced by partial transection of right sciatic nerve. NSCs were transplanted into subarachnoid space in N1-5 groups. Paw withdrawal threshold to mechanical stimulation (MWT) and paw withdrawal latency to nociceptive thermal stimuli (TWL) were measured at 1 day before (baseline) and 1, 3, 7, 14 and 21 days after operation. Brain derived neurotrophic factor ( BDNF) expression in spinal dorsal horn and dorsal root ganglia (DRG) was detected by immuno-histochemistry and RT-PCR on the 7th and 21st day after operation. Results Partial transection of the sciatic nerve gradually reduced MWT and TWL after operation starting from day 1 until day 7 and 14 as compared with the baseline in group NP. IT NSC transplantation significantly increased MWT and TWL and expression of BDNF in spinal dorsal horn and DRG in a dese-dependent manner at day 7 after operation in N1-5 groups as compared with group NP. There were no significant differences in MWT and TWL and BDNF expression among N3, N4 and N5 groups at day 21 after operation.Conclusion The proper quantity of transplanted NSCs which are able to ameliorate NP induced by partial transection of sciatic nerve in rats is 105 .     

磷酸二酯酶4B蛋白在神经病理性痛大鼠脊髓炎症反应中的作用:与ERK的关系

目的 评价磷酸二酯酶(PDE)4B蛋白在神经病理性痛大鼠脊髓炎症反应中的作用及其与ERK的关系.方法 健康雄性SD大鼠60只,体重180 ～ 220 g,先行L5,6鞘内置管,第6天确定导管位置后,采用随机数字表法分为5组(n=12):假手术组(Sham组)、生理盐水组(NS组)、单纯载体组(Ⅴ组)、错配siRNA组(siR-M组)及PDE4B-siRNA组(siR-B组).结扎L5脊神经制备大鼠神经病理性痛模型.于结扎后即刻、第1、3、5、7天各组分别鞘内注射10 μl生理盐水、10μl生理盐水、Lipofecta-minTM RNAiMAX、错配siRNA和LipofectaminTM RNAiMAX包裹的PDE4B-siRNA(2 μg/10μl).术前1d及术后第2、4、6和8天分别测定大鼠机械痛阈;术后第8天行为学测试结束后处死大鼠取腰段脊髓,采用Western bolt法检测PDE4B、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)的蛋白表达,ELISA法测定TNF-α、IL-1β和IL-6水平.结果 与Sham组比较,NS组、Ⅴ组、siR-M组和siR-B组术后2、4、6和8d时机械痛阈降低(P＜0.05),Ⅴ组和siR-M组术后2、4、6和8d时机械痛阈差异无统计学意义(P＞0.05),脊髓p-ERK、PDE4B蛋白、TNF-α、IL-1β和IL-6水平升高(P＜0.05);与NS组相比,siR-B组术后2、4、6和8d时机械痛阈升高,脊髓p-ERK、PDE4B蛋白、TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低(P＜0.05),Ⅴ组和siR-M组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PDE4B蛋白参与了大鼠神经病理性痛的形成,可能与促进脊髓ERK磷酸化,增强炎性反应有关.     

血浆cAMP及cGMP含量与银屑病的关系

为了解银屑病患者血浆中cAMP, cGMP含量有无改变,近两年我们测定了104例银屑病患者及69例正常人血浆cAMP,cGMP含量.现将其结果简要总结报告如下.     

右美托咪定预防大鼠创伤后应激障碍的效果及其对海马ERK活性及ARC表达的影响

目的 评价右美托咪定预防大鼠创伤后应激障碍(PTSD)的效果及其对海马细胞外信号调节激酶(ERK)活性及活动调节骨架蛋白(ARC)表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠68只,体重250～280 g,采用随机数字表法,将大鼠分为4组(n=17)∶生理盐水组(NS组)、右美托咪定0.3 μg/kg组(D1组)、右美托咪定3.0μg/kg组(D2组)和右美托咪定9.0μg/kg组(D3组).于PTSD模型制备前30 min,NS组腹腔注射生理盐水2 ml,D1组、D2组和D3组分别腹腔注射右美托咪定0.3、3.0和9.0μg/kg.采用应激增强恐惧学习法制备PTSD模型.于模型制备第1天A室电击处理后15 min时采用Western blot法检测海马ERK、磷酸化ERK(p-ERK)的表达水平;第1天A室电击处理后30 min时采用Western blot法检测海马ARC的表达水平.结果 与模型制备第2天比较,3组大鼠模型制备第3天木僵率升高(P＜0.05);与NS组比较,D2组和D3组模型制备第3天木僵率均下降,海马p-ERK和ARC表达降低(P＜0.05),D1组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);D2组和D3组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).4组大鼠海马ERK表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 右美托咪定对大鼠PTSD有一定预防作用,且与剂量有关,该作用机制与抑制海马ERK活性,下调ARC表达有关.     

鞘内注射IL-18中和抗体对大鼠吗啡耐受形成的影响

目的探讨阻断脊髓IL-18对大鼠吗啡耐受形成的影响及可能机制。方法♂SD大鼠40只,随机均分为5组(n=8)。Ⅰ组为生理盐水对照组,Ⅱ组为吗啡耐受组,Ⅲ组为IgG对照组,Ⅳ组、Ⅴ组为IL-18中和抗体(0.4μg、4μg)处理组。所有大鼠均行鞘内置管,手术5 d后确定导管位置(记为第1天)。第3～9天,各组建立吗啡耐受模型并进行相应处理。第2、10天,测定各组大鼠热刺激缩足反应潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)及尾静脉注射吗啡后30 min的PWTL,计算30 min时最大可能镇痛效应比值(%MPE)。第10天行为学测试后,取大鼠脊髓腰膨大,采用免疫印迹法(Western blot)检测ERK与p-ERK蛋白表达水平,免疫荧光法分析星形胶质细胞标记物GFAP表达水平。结果①第2天:各组大鼠给予吗啡后30 min%MPE差异无统计学意义(P>0.05)。第10天:给予吗啡30 min后,与Ⅰ组相比,其余4组%MPE均明显降低(P<0.05)。与Ⅱ组相比,Ⅲ组、Ⅳ组差异无统计学意义(P>0.05),Ⅴ组%MPE明显升高(P<0.05)。②Western blot结果显示,与Ⅰ组相比,其余各组p-ERK表达量均升高(P<0.05)。与Ⅱ组相比,Ⅲ组、Ⅳ组p-ERK表达水平无统计学意义(P>0.05),V组明显降低(P<0.05)。③免疫组织荧光染色结果显示,与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组大鼠腰段脊髓背角GFAP阳性荧光明显增加。而与Ⅱ组相比,Ⅴ组大鼠腰段脊髓背角GFAP免疫荧光强度明显降低。结论 IL-18中和抗体可以缓解吗啡耐受的形成,该效应可能与其抑制脊髓ERK的磷酸化,缓解背角星形胶质细胞的活化有关。     

丙泊酚麻醉对新生期大鼠海马BDNF及Trk-B的影响

目的观察新生期大鼠丙泊酚麻醉对空间学习记忆能力发育的影响。方法 7日龄SD大鼠45只,随机平均分为3组:空白对照组,不做任何处理;丙泊酚麻醉组,腹腔注射丙泊酚25 mg.kg-1,每20 min给予首次剂量的1/2,麻醉维持2 h;中长链脂肪乳注射组,腹腔注射脂肪乳25 mg.kg-1,每隔20 min给予首次剂量的1/2。待麻醉后4 h,每组随机处死6只,免疫组化法分析海马的caspase-3表达,蛋白免疫印迹法测定BDNF和Trk-B的水平。其余同窝饲养至40 d时行Morris水迷宫测定。结果与对照组比较,丙泊酚麻醉组海马BDNF及Trk-B表达明显减少、caspase-3表达明显增加(P<0.05),脂肪乳组与对照组差异无显著性。Morris水迷宫实验中,丙泊酚组大鼠寻找隐藏平台潜伏期较对照组明显延长(P<0.05),在记忆保留实验中丙泊酚组大鼠穿越平台次数明显少于对照组(P<0.05),脂肪乳组与对照组均无明显差异。结论新生期大鼠丙泊酚麻醉可影响空间认知功能发育,该效应可能与新生期海马内神经元凋亡增加,BDNF途径抑制有关。     

鞘内移植神经干细胞对慢性缩窄性损伤模型大鼠脊髓背角和背根神经节胶质细胞源性神经营养因子表达的影响

目的神经病理性疼痛在临床中很常见,但治疗效果欠佳。文中应用鞘内移植神经干细胞(neural stem cells,NSC)治疗坐骨神经慢性缩窄性损伤模型(chronic constriction injury,CCI)大鼠,并观察脊髓背角和背根神经节(dorsal root gan-glion,DRG)胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的变化。方法成年SD大鼠72只,随机均分为A组(假手术+细胞培养液)、B组(CCI+细胞培养液)和C组(CCI+NSC),然后各组再随机分为:A1、B1和C1组(CCI后3 d鞘内移植组)和A2、B2和C2组(CCI后10 d鞘内移植组),每组12只。分别于术前1 d和术后1、3、7、14、21 d测机械痛阈(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热痛阈(thermal withdrawal latency,TWL)。术后7 d、14 d和21 d采用免疫组织化学染色和Real-time PCR技术观察DRG、脊髓背角中GDNF的表达变化。结果①与A组相比,B1、B2、C1、C2组术前1 d、术后1 d和21d MWT和TWL差异无统计学意义(P>0.05);术后3d MWT和TWL逐渐降低,至术后7d降低至最低点,在此期间各时间点痛阈与A1组比较,B1、B2、C1、C2组数值均有显著降低(P<0.01),之后缓慢升高,于术后21 d恢复至术前水平;与B组比较,C组术后7d、14dMWT和TWL明显上升(P<0.01)。②与B组比较,A组术后7d、14d和21d各组大鼠GDNF的表达呈低水平(P<0.05);术后7 d,C1组GDNF的表达量较B1组明显升高(P<0.05);术后14 d和21 d,C1、C2组GDNF的表达量高于B1、B2组(P<0.05)。结论鞘内移植NSC可通过提高脊髓背角和DRG中的GDNF表达量,从而对CCI模型引起的神经病理性疼痛起预防和治疗作用。     

高密度颗粒凝集试验应用于EHF早期诊断的研究

以高密度颗粒凝集试验,检测EHF病人血清中特异性抗体。急性期阳性检出率为90.4%,敏感性及特异性与IFA相似。高密度颗粒凝集试验方法简便、快速,适于基层推广使用,可作为EHF血清学早期快速诊断的方法。