大鼠牙髓组织中甲硫氨酸脑啡肽合成位点及其调控的实验研究

目的:探讨大鼠牙髓组织甲硫氨酸脑啡肽(MEK)的细胞内生物合成位点及其调控机制.方法:①将健康雄性大鼠随机分成四组:对照组,牙髓炎组,FOY-305注射组和牙髓炎加FOY-305注射组,分别测定各组牙髓组织中MEK值.②采用分次离心法分离各亚细胞成分:胞核,线粒体,溶酶体,微粒体和上清液,对比经胰蛋白酶处理前后大鼠牙髓细胞各亚细胞成分中MEK含量的变化情况.结果:①炎性牙髓组织中MEK含量较正常牙髓组织有显著性升高,FOY-305可显著抑制炎症反应引起的MEK含量的升高,而对正常牙髓无明显抑制作用.②经胰蛋白酶处理后,牙髓组织的上清液、胞核、微粒体的MEK样肽含量显著增加,表明这些部分富含前体.结论:在炎性刺激下,胰蛋白酶参与牙髓中MEK的生成.而微粒体部分可能是IdEK前体蛋白分布的合理位点.     

弓形虫微线体蛋白1部分基因原核表达重组质粒pWR450-1-MIC1的构建、鉴定及测序

目的：构建弓形虫ZS2分离株pWR450-1-MIC1原核表达重组质粒，为进一步表达及免疫做准备。方法：用PCGENE软件分析MIC1基因可能的TB抗原表位，自行设计引物，用聚合酶链反应（PCR）技术从弓形虫ZS2分离株的基因组DNA中扩增编码微线体蛋白1（MCC1）的基因片段，经酶切，连接，重组入pWR450-1原核表达载体，再经含氨苄培养基筛选，酶切，PCR鉴定和测序。结果：从ZS2分离株基因组DNA中扩增出特异的MIC1基因片段，克隆成功pWR450-1－MIC1重组质粒，测序表明MIC1这部分基因与RH株相应碱基序列完全一致。高度保守，为下一步表达及免疫奠定基础。     

弓形虫GRA8基因真核表达重组质粒的构建、鉴定及测序

目的 构建弓形虫RH株pcDNA3，1( )-GRA8真核表达重组质粒，为进一步DNA免疫做准备。方法 用聚合酶链反应(PCR)从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码致密颗粒蛋白(GRA8)的基因片段，纯化后重组入pUC-19克隆载体，再经含IPTG，XGal氨苄培养基蓝白筛选，挑选白色克隆酶切，低溶点琼脂糖纯化，回收目的基因亚克隆入pcDNA3．1( )，经氨苄培养基过夜培养挑选6个克隆提纯酶切，PCR鉴定和测序。结果 从RH株基因组DNA中扩增出特异的GRA8基因片段，克隆成功pcDNA3．1( )-GRA8重组质粒。测序表明GRA8这部分基因与GENEBANK相应基因序列完全一致。结论 本结果为研究抗弓形虫核酸疫苗打下基础。     

兔层流架的研制和兔实验室的改造

采用自制兔用层流架,配合带过滤罩的换气扇作为空气净化设备,建立面积为11 .5 m2 的动物实验室。经检测,动物实验室和层流架内噪声均低于60 dB;动物实验室工作照度为160 ～180lx;层流架内动物照度为13 ～20 lx。消毒后,层流架内落菌数为(1 .4 ±0 .5 ～3 .4 ±1 .8) 个/ 皿(90) ,携菌数测试未测到细菌。新西兰离乳兔饲养3 个月生长发育正常,表明层流架性能良好。该层流架价格低廉,维持费用低,使用操作简便,能保证清洁级环境,适用于中小规模的清洁级动物饲育和动物实验     

钩端螺旋体LipL21基因真核表达载体pcDNA3.1(+)/LipL21的构建与鉴定

目的构建钧端螺旋体外膜脂蛋白LipL21基因片段的真核表达载体，寻找新的预防钧端螺旋体感染的候选疫苗。方法应用PCR技术从钧端螺旋体黄疸出血群赖型56601株基因组模板中扩增LipL21基因，纯化回收后克隆入pUCm-T载体，再亚克隆入真核表达载体pcDNA3．1（＋）。结果双酶切及测序鉴定证明成功构建了LipL21真核表达载体pcDNA3．1（＋）／LipL21，DNA测序显示重组质粒含有561bp的目的基因片段，读码框架正确，无碱基错配及移码突变。测序后结果经与GenBank登录的序列做blast比较，载体上所连目的基因片段序列与GenBank登录的LipL21基因序列完全一致。结论成功构建了钧端螺旋体LipL21基因真核表达载体pcDNA3．1（＋）／LipL21。     

日本血吸虫成虫cDNA表达文库的构建及鉴定

目的　通过构建日本血吸虫成虫 c DNA表达文库 ,免疫筛选全长目的基因 ,研究其结构和功能。　方法　采用 TRIZOL试剂提取日本血吸虫成虫总 RNA,Oligotex m RNA Midi Kit分离 m RNA,并用 Stratagene的建库试剂盒构建日本血吸虫 c DNA表达文库。　结果　构建的日本血吸虫成虫 c DNA表达文库容量为 2× 10 6 pfu/ ml,扩增后文库的滴度为 1.4× 10 7pfu/ ml。文库的重组率达到 96%以上 ,插入片段平均长度为 1.4kb。　结论　本文库可望用于日本血吸虫疫苗候选基因及诊断抗原分子的筛选     

克山病患者红细胞、血清、尿超氧化物歧化酶活性、含量及相互关系

选择山东省克山病病区患者,并以3组人群为对照,检测红细胞、血清、尿液超氧化物歧化酶(SOD)活性和含量。结果显示,克山病患者红细胞内SOD活性、含量较非病区人群低下,血清3种SOD活性及血清、尿液SOD含量程度不同的高于非病区人群。此表明克山病患者体内存在自由基代谢紊乱和组织细胞膜的损伤。病区正常人SOD活性、含量具有同克山病患者相似改变。提示病区致病因素仍存在,应继续加强克山病的监测和预防。     

057 协同刺激途径与支气管哮喘

T细胞激活在支气管哮喘（哮喘）形成和发展中起着主导作用，T细胞激活需要抗原肽－T细胞受体与协同刺激途径共同作用方能完成。协同刺激分子在哮喘患者有着重要改变，并与哮喘的发生密切相关。实验证明，阻断协同刺激途径可阻止哮喘的发生。