应用多重PCR和MLPA技术检测DMD患者和携带者的基因突变及产前诊断

目的 应用多重PCR和多重连接依赖探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术检测Duchenne/Becker肌营养不良症(Duchenne/Becker muscular dystrophy,DMD/BMD)患者、携带者并应用于产前诊断.方法 首先采用多重PCR对临床诊断为DMD/BMD的患者检测DMD基因的26个外显子,未查到缺失突变者和可能的携带者采用MLPA检测全部79个外显子是否有缺失或重复突变.对产前诊断病例,用PCR法检测缺失突变,用MLPA法检测重复突变.结果 多重PCR对22例患者的DMD基因的26个外显子检测.13例有缺失突变.未查到常见缺失突变的9例患者经MLPA检测DMD基因的全部79个外显子,3例为重复突变、1例为单个第18外显子缺失、其他5例未查到缺失和重复突变.16例携带者中,3例有家族史,其中2例检出突变;13例为检测到突变的散发病例患儿的母亲,有8例检测到突变.产前诊断9个胎儿(其中双胎1例),2例胎儿有突变,引产后核实无误;7例胎儿未检测到突变,现均已分娩.结论 多重PCR可检出92.86%的缺失突变并可用于缺失突变的产前诊断,因其简便、可靠、价廉可作为临床上DMD/BMD基因诊断的初选.MLPA可用于多重PCR未检测到缺失突变的患者及携带者的检查.     

用模式抗原OVA研究CTA1-DD／IgG佐剂的免疫调节作用

目的：进一步研究新型佐剂CTA1-DD/IgG的免疫调节作用。方法：小鼠经鼻内免疫抗原（鸡卵清白蛋白OVA）联合佐剂CTA1-DD或CTA1-DD/IgG复合物,用ELISA检测血清中OVA特异性IgG抗体生成和IgG抗体亚类,用酶联免疫斑点试验检测脾脏抗体分泌细胞。结果：CTA1-DD/IgG佐剂在小鼠中诱导血清特异性IgG抗体及脾脏特异性抗体分泌细胞的能力均高于CTA1-DD佐剂;CTA1-DD/IgG或CTA1-DD作为佐剂联合OVA免疫后IgG1、IgG2a、IgG2b 抗体皆提高,且IgG2a/IgG1＞1。结论：CTA1-DD/IgG佐剂的免疫调节作用强于CTA1-DD,且能产生混合IgG抗体亚型,促进平衡的免疫应答。     

儿童原发膜性肾病肾小球C1q或IgA沉积的意义探讨

目的探讨儿童原发膜性肾病(PMN)肾小球C1q或IgA沉积与临床和病理表现的关系。方法回顾性总结并分析2012年12月至2020年12月北京大学第一医院儿科诊断的33例PMN患儿临床及病理表现[肾组织磷脂酶A2受体(PLA2R)抗原、IgG亚型检测]、血清抗PLA2R抗体及治疗反应等资料。分别根据PLA2R检测结果、肾脏病理表现、是否有C1q沉积、是否有IgA沉积分别分为PLA2R相关组和非PLA2R相关组、典型PMN组和不典型PMN组、C1q沉积组和无C1q沉积组、IgA沉积组和无IgA沉积组。组间比较采用t检验、Mann-WhitneyU检验或Fisher确切概率法。结果 33例PMN患儿中男20例、女13例, 起病年龄11(8, 13)岁, 临床表现为肾病水平蛋白尿者32例。病程4.6(2.1, 11.6)个月时行肾活检, 28例(85%)在肾活检前接受糖皮质激素和(或)免疫抑制剂治疗。PLA2R相关组20例(61%), 非PLA2R相关组13例(39%)。与非PLA2R相关组相比, PLA2R相关组发病年龄偏大[12(10, 13)比7(3, 12)岁, Z=-2.52, P=...     

估算的尿蛋白在儿童肾小球疾病中的适用性

目的评价不同公式估算尿蛋白反映儿童肾小球疾病24 h尿蛋白定量的可靠性。方法横断面研究, 收集2001年1月至2021年12月就诊于北京大学第一医院儿科的443例肾小球疾病患儿实测24 h尿肌酐和通过6个相关公式计算得出的估算24 h尿肌酐、实测24 h尿蛋白定量、实测尿蛋白肌酐比(UPCR)、尿沉渣镜检结果, 用实测24 h尿肌酐或估算24 h尿肌酐乘实测UPCR计算得到估算尿蛋白。采用Spearman相关分析、Bland-Altman分析法及线性回归分析比较估算尿蛋白和实测UPCR与24 h尿蛋白定量间的相关性、一致性和准确性, 并分析尿蛋白水平和尿红细胞数目对于二者关系的影响。结果 443例患儿中男221例、女222例, 年龄(11±4)岁, 其中肾病综合征216例、IgA肾病78例、Alport综合征47例、系统性红斑狼疮42例、紫癜性肾炎58例以及孤立性蛋白尿2例。Spearman相关分析提示实测UPCR与24 h尿蛋白定量具有相关性(r=0.90, P<0.05), 应用实测24 h 尿肌酐得到的估算尿蛋白和24 h尿蛋白定量相关性得到改善(r=0.94, P<...     

阿加曲班对实验性大鼠脑出血周围组织神经元损伤的保护作用

目的研究阿加曲班对大鼠实验性大脑内出血的脑保护作用及其可能机制。方法选择SD大鼠60只,按随机数字法分为假手术组(1 2只)、脑出血组(12只)和阿加曲班治疗组(治疗组,36只)。治疗组又按注射阿加曲班1.0、1.5、2.0 mg/kg剂量分为治疗1组(12只)、治疗2组(12只)和治疗3组(12只)。观察应用阿加曲班前后脑出血大鼠神经功能缺损变化情况;应用免疫组织化学和Western blot法,观察阿加曲班干预前后大鼠大脑血肿周围组织中神经元烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性神经元数目的变化,以及NSE、诱导型一氧化氮合酶和GFAP表达水平的变化。结果与假手术组和治疗组比较,脑出血组大鼠血肿周围组织中NSE阳性神经元数目明显减少,GFAP阳性神经元数目明显增多,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。与脑出血组比较,治疗组大鼠血肿周围组织中NSE表达水平明显升高,而诱导型一氧化氮合酶及GFAP表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论阿加曲班可以有效拮抗大鼠脑出血血肿周围组织中NSE的丢失,其机制可能与阿加曲班降低神经元活性氧含量以及抑制炎性反应等作用有关。     

氯沙坦对幼龄肾硬化大鼠的保护作用及其机制探讨

目的观察血管紧张素Ⅱ受体-1拮抗体(AT1RA)——氯沙坦对幼龄肾硬化大鼠的保护作用,并探讨其减轻细胞外基质(ECM)积聚的机制。方法17只SD幼龄大鼠(1月龄,体重100g左右)随机分为3组:对照组(5只)、模型组(6只)和治疗组(6只)。对后两组大鼠行单侧肾切除,1周后加阿霉素(5mg/kg)注射,诱导肾硬化模型。术后治疗组予氯沙坦5mg/(kg·d)共12周。观察各组大鼠尿蛋白、血生化指标变化及肾组织的病理改变,并用免疫组化方法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)在肾小球的蛋白表达。结果氯沙坦于实验的第9、12周显示出较好的降尿蛋白作用,治疗组尿蛋白与同期模型组相比分别为2.41mg/24h,1.97mg/24h,2.96mg/24h,3.54mg/24h比17.28mg/24h,7.39mg/24h,14.20mg/24h,0.55mg/24h(P均<0.01)。实验结束时,氯沙坦形态学上显示有减轻肾小球系膜增生和硬化的作用,治疗组与模型组相比,系膜增生率和硬化指数分别为3.45%、3.36%比35.40%、40.28%和0.25%、0.13%比1.86%、2.61%(P均<0.05);其且下调了TGF-β1在肾小球内的蛋白表达,两组TGF-β1的光密度值(A值)之比为(0.143±0.023)比(0.221±0.036)(P<0.01)。结论在此单侧肾切除阿霉素肾病幼鼠肾硬化模型上,氯沙坦显示了降尿蛋白及减轻肾小球系膜增生和硬化的作用;并提示AT1RA对此肾组织学改变的保护作用可能与下调TGF-β1在肾内的表达以抑制细胞外基质积聚有关。     

延期妊娠378例临床分析

目的探讨延期妊娠对围生儿的影响及其临床处理方法。方法收集我院自1998年1月至2004年12月就诊的延期妊娠378例的临床资料,并随机抽取同期我院收治的378例足月妊娠资料,两组进行对比。结果延期妊娠组羊水过少、羊水污染、新生儿窒息、剖宫产等发生率较足月妊娠组明显增高（P〈0．01）,两组间巨大儿、低体重儿发生率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论延期妊娠时胎盘功能减退、胎儿宫内环境差、胎儿对缺氧耐受性降低、高危程度增加,故应积极采取措施,适时计划分娩,产前产时需严密监护,以确保母婴安全。     

普洱市消渴病前期病证结合解析

目的探讨普洱市消渴病前期病证特点,并观察给予对应治疗后获得的临床效果。方法选择该院2017年11月-2019年1月收治的普洱市120例消渴病前期患者作为实验对象;数字奇偶法分组后探究每组拟定的治疗方案;比照组(60例):拟定二甲双胍药物治疗方案展开;实验组(60例):拟定中医治疗方案展开;就组间血糖控制有效率、糖尿病发生例数以及治疗前后总胆固醇水平、血糖水平展开对比。结果实验组消渴病前期患者血糖控制总有效率(71.67%)高于比照组(53.33%)明显,糖尿病发生例数(21.67%)低于比照组(48.33%)明显(P<0.05);治疗前,实验组消渴病前期患者总胆固醇水平以及血糖水平同比照组比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,实验组消渴病前期患者总胆固醇水平以及血糖水平均低于比照组明显(P<0.05)。结论消渴病前期患者于临床接受中医治疗后,利于血糖控制有效率的提升,糖尿病发生例数的降低,总胆固醇水平以及血糖水平的降低,最终促进消渴病前期患者的健康状态提升。     

微小RNA的差异表达与胚胎质量的相关性

目的探讨微小RNA(micro RNA, miRNA)差异表达与胚胎质量的相关性, 为胚胎的植入前选择提供新的依据。方法用TaqMan微小RNA阵列(MicroRNA Array)对8个囊胚样本进行miRNA表达谱检测, 筛选稳定高表达且有价值的miRNA。扩大样本量后选择囊胚, 针对筛选的miRNA进行逆转录PCR检测, 同时采用二代测序平台检测胚胎的染色体异常, 对结果进行分析比较。结果 MicroRNA Array检测发现mir-720、mir-372、mir-886-3p和mir-512-3p表达量较高, 而mir-145表达量较低, 推测与早期胚胎发育相关。选择56个废弃囊胚, 对上述5种miRNA进行检测, 结果显示mir-145和mir-886-3p在染色体正常组中显著低表达。mir-145以相对表达量9作为阈值, mir-886-3p以相对表达量3作为阈值, 其以上均未见胚胎染色体检测为正常者。结论特定的miRNA表达差异与胚胎染色体异常存在相关性, 有可能作为一种新的胚胎选择的生物标记。     

准分子激光原位角膜磨镶术双面切削法治疗高度近视远期疗效

目的 探讨准分子激光原位角膜磨镶术（LASIK）矫正高度近视角膜厚度不足时的治疗方法。方法 制作以角膜鼻侧或颞侧为蒂部的角膜瓣,角膜瓣翻转后将20%拟矫正手术量切削在角膜瓣基质面,80%手术量切削于角膜基质床。随访24～30月共28眼。结果 术后末次随访裸眼视力≥1.0共23眼（82.1%）,≥0.8共26眼（92.8%）。术后角膜地形图无明显的偏心及散光形成,未见明显角膜瓣并发症。结论 LASIK角膜瓣翻转后激光切削为高度近视角膜厚度不足的患者提供了一种完全矫正方法。手术操作的要点是要保证切削区中心的重合,并注意缩短手术时间以保护角膜上皮。