MAGE-3抗原肽体外诱导肝癌患者免疫应答的研究

目的：利用载有MAGE－3抗原肽的树突状细胞（DC）活化原发性肝细胞癌（HCC）患者T淋巴细胞，探讨是否可以体外诱导特异性细胞毒T细胞细胞（CTL）应答。方法：通过逆转录多聚酶链反应和测序分析MAGE－3多肽表位密集区的核苷酸变异状况，体外培养HLA－A2表型的HCC患者及正常献血员外周血来源DC，并经孵育携带MAGE－3／HLA－A2抗原肽FLWG－PRALV，用以活化T淋巴细胞，利用特异性杀伤实验检测CTL应答。结果：中国HCC患者表达的MAGE－3序列高度保守。用特定细胞因子和无血清培养基可成功培养HCC患者外周血精源的DC。经多肽冲击的DC诱导，3例HCC例者和3例正常献血员可成功培养HCC患者外周血来源的DC。经多肽冲击的DC诱导，3例HCC患者的3例正常献血员中各有2例产生CTL免疫应答。结论：载有MAGE－3抗原肽的DC可以体外诱导特异性的CTL免疫应答。提示HLA－A2限制性的MAGE－3抗原肽经DC递呈可以作为有潜力的肝癌免疫治疗疫苗。     

锤头型核酶特异性阻断雄激素受体表达对前列腺癌细胞生长的影响

目的：探讨核酶阻断雄激素受体（AR）基因表达治疗前列腺癌的可能性。方法：在脂质体介导下，锤头型抗雄激素受体核酶表达载体转染前列腺癌细胞，采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）检测ARmRNA，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖活性，流式细胞仪（FCM）检测细胞周期时相，原位末端转移酶标记法检测细胞凋亡。结果：核酶表达载体转染1－5d后，前列腺癌细胞AR mRNA水平降低32．6％－40．7％（P＜0．05），细胞生长抑制率18．28％－35．34％（P＜0．05），细胞周期阻滞于G2／M期，诱导细胞凋亡，细胞凋亡比率增加20．70％（P＜0．01）。结论：应用核酶特异性切割ARmRNA，能有效阻断AR基因的表达，诱导前列腺癌细胞凋亡，有可能成为前列腺癌基因治疗的有效方法之一。     

蛋白激酶A对大鼠肾上腺嗜铬细胞钙通道电流的作用

目的研究蛋白激酶A(PKA)在大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞分泌儿茶酚胺(CA)中的作用机制。方法利用全细胞膜片钳技术,在维持电压-70 mV的条件下,给予细胞40 ms,从-60mV到+60 mV的序列除极方波,阶跃10 mv,引导出钙通道电流(ICa),观察各种不同浓度PKA激动剂对大鼠嗜铬细胞ICa的影响。结果100μmol/L dcAMP对大鼠嗜铬细胞内ICa作用不明显;1和10 μmol/L Forskolin对ICa有明显抑制作用,灌洗细胞10 min对ICa峰值抑制率分别为(15.8±2.0)％和(29.7±2.0)％。结论PKA在大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞CA分泌过程中的作用不明显。Forskolin能够明显抑制大鼠嗜铬细胞ICa,从而抑制CA的分泌,其机制可能是对钙通道的直接作用。     

诱生型一氧化氮合酶选择性抑制剂对急性胰腺炎大鼠胰腺组织的影响

目的　探讨急性胰腺炎大鼠胰腺组织中诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)选择性抑制剂(氨基胍 )对胰腺组织的影响。方法　分别测定各组胰腺组织中原生型一氧化氮合酶 (cNOS)和iN OS活性、一氧化氮 (NO)含量 ;观察各组胰腺组织病理变化 ,并对胰腺组织损伤进行评分。结果　与胰腺炎组比较 ,单用氨基胍可明显降低NO含量 [( 2 2 .4± 0 .3) μmol/g ,P <0 .0 5 ] ,而胰腺病理评分无降低 ( 8.8± 0 .6 ,P >0 .0 5 ) ,联合应用L 精氨酸不但可明显降低NO含量 [( 2 5 .6± 0 .4) μmol/g ,P <0 .0 5 ] ,并且胰腺病理评分明显降低 ( 6 .3± 1.4,P <0 .0 5 )。 结论　联合应用选择性iNOS抑制剂和NO供体 ,可降低胰腺组织中NO含量 ,并能改善胰腺组织病理损伤。     

Ephrin-B2在人胰腺癌的表达

目的　Ephrin B2基因及其受体在人胰腺癌组织中表达的意义。 方法　通过Westernblot检测 5例人正常胰腺和 15例不同分化程度胰腺癌中Ephrin B2基因的表达 ,HPIAS图象分析仪分析各组样本相对密度。结果　人正常胰腺组织中无Ephrin B2基因表达 ,无转移性胰腺癌中明显表达 ( 0 .90± 0 .0 3 ) ,转移性胰腺癌中Ephrin B2基因表达 ( 1.0 1± 0 .2 2、1.0 0± 0 .3 1)较无转移性肿瘤表达明显升高 (P <0 .0 5 )。结论　Ephrin B2基因在人胰腺癌中异常表达 ,其可能通过和受体相互作用参与胰腺癌生物学行为的调控。     

反义局部粘着斑激酶抑制肝癌侵袭生长的研究

目的　观察反义局部粘着斑激酶 (FAK)脱氧寡核苷酸 (ODN)转染对Bel740 2肝癌移植瘤侵袭性生长的影响 ,并探讨其作用机制。方法　以LipofectAMINE介导的反义FAKODN转染Bel 740 2肝癌细胞株后 ,于 6只裸鼠双侧颈背部、髋部共 4处皮下接种 ,观察移植瘤生长情况 ,并行肿瘤微血管密度 (MVD)的免疫组织化学检测及MMP2与TIMP2表达的逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测。结果　反义FAKODN转染使裸鼠皮下移植瘤的生长受到显著抑制 ,抑瘤率为3 5 .7% ;MVD在反义转染组 ( 9.5 99± 1.2 84)显著低于对照组 [( 13 .915± 2 .618) ,P <0 .0 5 ] ;MMP2表达在反义转染组 ( 0 .199± 0 .0 61)显著低于对照组 ( 0 .42 1± 0 .118) ,TIMP2表达在反义转染组( 0 .461± 0 .15 3 )则显著高于对照组 [( 0 .2 98± 0 .10 4) ,P <0 .0 5 ]。结论　信号转导分子FAK表达阻断可显著抑制Bel 740 2肝癌细胞株在裸鼠体内的侵袭性生长 ,病理性肿瘤血管生成减少及MMP2、TIMP2表达改变与其抗肿瘤作用密切相关。     

丹参对阻塞性黄疸内毒素血症及肝脏CD14mRNA的影响

目的 探讨丹参对阻塞性黄疸(OJ)时肠源性内毒素血症(IETM)的作用及其机制。方法 应用大鼠OJ模型，观察OJ7、14d及尾静脉注射丹参7、14d后血浆内毒素(ET)水平、末端回肠通透性、肝脏CD14 mRNA的表达。结果 OJ7、14d后大鼠出现明显的肝损害。表现为丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)的增高和白蛋白的降低，血浆ET水平随着阻塞时间的延长而逐渐增高。回肠细胞间隙可见大量的硝酸镧颗粒，肝脏CD14 mRNA的表达显著增强。注射丹参后，大鼠血浆ALT、TB较OJ7、14d明显下降；回肠通透性明显改善，细胞间隙无硝酸镧颗粒；CD14 mRNA的表达也较OJ7、14d组明显减弱。结论 丹参可明显改善由OJ引发的肝损害，其机制可能与其改善肠道通透性、下调CD14 mRNA的表达有关。     

肝癌组织辅助性T细胞-2细胞因子强势分泌研究

目的　探讨人肝癌组织中辅助性T细胞亚群 (Th1/Th2 )细胞因子表达模式。方法　收集我科手术切除肝癌组织标本 15例 ,肝良性疾病或肝硬化门静脉高压手术患者肝组织标本 15例作为对照 ,β 肌动蛋白 (β actin)作为参照 ,采用半定量逆转录 聚合酶联反应 (RT PCR)方法检测人肝癌组织中γ 干扰素 (IFN γ)和白细胞介素 4(IL 4)mRNA的表达。结果　人肝癌组织中IFN γmRNA表达 (相对数 :1.18± 0 .3 1)比对照组肝组织中IFN γmRNA表达弱 (相对数 :1.86±0 .5 0 ) ,而IL 4mRNA表达 (相对数 :1.73± 0 .5 1)比对照组强 (相对数 :0 .94± 0 .41,P <0 .0 5 )。结论　人肝癌组织中Th1类细胞因子表达弱 ,Th2类细胞因子表达强 ,呈现Th2细胞因子表达模式 ,肝癌组织局部微环境处于免疫抑制状态 ,肿瘤细胞易发生免疫逃逸     

胎儿和少儿皮肤内碱性成纤维细胞生长因子及其受体的基因表达

目的　探讨不同胎龄的胎儿和少儿皮肤中碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)及其两种受体 (bek和flg)基因表达的变化。 方法　提取 18例不同胎龄 ( 13～ 3 2周 )的胎儿皮肤和 6例少儿皮肤的总RNA后 ,分离mRNA ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测这 3种基因在不同组织中的表达。结果　在早期妊娠胎儿的皮肤中 ,bFGF ,flg和bek基因表达较强 ,随着胎儿的生长和发育 ,皮肤组织内这 3种基因表达逐渐降低 ,在少儿皮肤中 3种基因的表达量分别为晚期妊娠胎儿皮肤的 62 .5 % ,5 9.5 %和 5 2 .9% ,基因表达显著降低 ( P <0 .0 5 )。结论　bFGF及其受体基因可能在皮肤的发生、结构功能的维持以及伤后修复中起重要作用。这 3种基因在胎儿皮肤中表达水平较高可能与胎儿皮肤细胞增殖较快 ,皮肤创面愈合迅速有关。     

多孔碳酸钙陶瓷修复骨缺损的实验研究

目的 探讨多孔碳酸钙陶瓷修复骨缺损的可行性。方法 取20只新西兰大白兔，采用兔桡骨干1．5cm缺损的动物模型并植入多孔CaCO3陶瓷，分别于术后2、4、8、12及16周处死后取材，行大体、X线、扫描电镜和组织切片观察。结果 植入材料4周扫描电镜显示材料的骨结合紧密、且无纤维组织界面；组织学观察12周植入材料内有较多板层骨生成、植入材料被吸收，骨缺损得到修复。结论 多孔CaCO3陶瓷具有良好的生物相容性和降解率，是一种替代自体骨修复骨缺损较理想材料。