胎肝造血期胎肝间充质干细胞的分离、培养及生物学特性

【目的】分离、培养人胎肝造血期胎肝间充质干细胞(MSC) , 研究其生长特性及表面标记的表达。 【方法】取孕16～20 周人胚胎肝脏, 分离培养胎肝MSC, 传代培养成系并检测其增殖能力, 应用流式细胞术、免 疫荧光方法检测其造血相关表面标记和细胞蛋白表达。【结果】人胎肝MSC 呈成纤维样形态, 指数生长期倍增 时间约为16h, 细胞增殖26.5 倍。传代15 次仍有94.18%的细胞处于G0/G1 期。流式细胞仪检测结果显示人胎 肝MSC 表达CD29、CD44、CD105、CD106 和CD166, 不表达CD31、CD34、CD45, 不表达与GVHD 相关的HLADR 、CD80、CD86、CD40、CD40L。免疫荧光检测结果显示胎肝MSC 表达造血微环境细胞外基质蛋白 Fibronectin、α-SMA 及上皮细胞标记蛋白AFP 和E-cadherin。【结论】人胎肝MSC 具有胚胎造血组织和发育中的 肝脏特异的相关分子表达, 免疫原性弱, 可以作为研究造血、胎肝发育机制的模式细胞。     

胰岛素样生长因子1和胰岛素促胎儿生长作用探讨

胰岛素等是调节胎儿生长的重要激素 ,近来胰岛素样生长因子对胎儿的促生长作用愈来愈受到重视 [1 ,2 ] 。本研究通过对 6 4例新生儿脐血清胰岛素样生长因子 1(IGF- 1)和胰岛素的检测 ,探讨 IGF-1和胰岛素在胎儿生长中的作用 ,分析影响 IGF- 1水平的相关因素。一、对象和方法1.研究对象 :6 4例新生儿 ,男 2 5例 ,女 39例 ,胎龄 2 9～ 42周 ,体重 130 0～410 0 g。适于胎龄 (AGA)儿 43例 ,小于胎龄 (SGA)儿 15例 ,大于胎龄 (L GA)儿 6例。2 .方法 :新生儿出生时采集脐血 4ml,测量胎盘重量、新生儿体重 ,身长和孕母身高。采用放免法测…     

小儿重型β-地中海贫血肝穿刺活检病理特点及评价

目的探讨重型β-地中海贫血患儿肝脏病理改变特点及其与临床的关系,评价肝活检病理对治疗指导的意义.方法对22例重型β-地中海贫血患儿行肝活检病理检查,并结合临床资料进行分析.结果22例穿刺均1次成功,肝组织有不同程度的铁沉积,沉积程度与输血量及血清铁蛋白相关.汇管区纤维组织增生,纤维化程度与铁沉积程度无相关.结论我国重型β-地中海贫血患儿肝病理变化的特点是铁沉积重,纤维化程度相对轻.小儿肝穿刺活检是安全、可行的.     

地震救援军人创伤后应激障碍的随访

目的 调查参加汶川地震救援的军人在震后7个月和14个月时创伤后应激障碍的检出率及心理健康状况.方法 在参与地震救援的部队中随机抽取600人,在震后7个月和14个月时采用创伤后应激障碍症状自评量表、症状自评量表进行调查.采用SPSS 13.0统计软件对第一次调查的497份有效问卷和第二次的491份有效问卷的数据进行统计分析.结果 创伤后应激障碍症状的时点检出率,7个月为37.62％,14个月为26.28％,经卡方检验两组有显著性差异(x2=14.633,P=0.000).但其中中重度症状的检出率,7个月为2.01％,14个月为1.43％,两组无显著性差异(x2=0.502,P=0.479).创伤后应激障碍症状自评量表总均分7个月时(26.70±6.47);14个月时(25.77±5.86).秩和检验差异有显著性(P=0.000).结论 对参与地震严重灾难救援的军人,应注意发现创伤后应激障碍症状尤其是有中重度症状者,并应予以个别心理治疗或药物治疗.     

10例重型β地中海贫血并发急性免疫性溶血的临床分析

目的 :探讨重型 β地中海贫血 (重型 β地贫 )并发急性免疫性溶血的临床特点、治疗和预后。 方法 :10例患儿是 1996年 1月～ 2 0 0 4年 3月本院住院患者 ,男 7例 ,女 3例 ,年龄 9个月～ 15岁 ,确诊重型 β地贫 1个月～ 11年 ,均依靠输血治疗 ,原Hb维持在 70～ 14 0g/L。入院时患儿表现为慢性溶血基础上于感染或输血后发生急性溶血 ,2周内Hb平均下降 4 5 g/L ,伴黄疸、血尿 ,间接胆红素、血游离Hb明显升高等血管内溶血表现。 10例直接Coomb试验阳性 ,其中 7例伴C3 抗体阳性 ;血清抗IgG均阴性 ;1例患者Rh血型为CCDee,输ABO同型血后发病 ,血清特异性抗cE抗体阳性 ;9例直接Coomb试验阳性病例血清无血型免疫性不规则抗体 ;1例在配血时发现自身血液有凝集现象 ,检查Coomb试验阳性。确诊后均予激素治疗 ,7例予甲泼尼龙 2 0～ 30mg/kg·d -1× (3～ 4 )d ;1例予地塞米松 0 .5mg/kg·d-1× 3d ;2例治疗之初即予泼尼松口服 2mg/kg·d-1;急性溶血控制后均予口服泼尼松维持治疗 4周以上 ;3例需加用CsA ,1例加用骁悉 ,3例同时使用丙种球蛋白 (IVIG) 2g/kg。输注经严格交叉配血 (患儿血与献血者血在生理盐水、酶、抗人球蛋白介质中交叉配血无凝血、无溶血现象 )的洗涤浓缩红细胞 35ml/kg ,1例Rh血型为CCDee患儿予输注R     

护士生活质量及影响因素研究

近十余年来 ,随着对生活质量的日益重视 ,有关生活质量的研究也越来越多。为了使不同人群 (疾病患者和正常人群 )、不同文化群体之间的生活质量具有可比性 ,ＷＨＯ在 1993年制定了世界卫生组织生活质量评定量表 (ＷｏｒｌｄＨｅａｌｔｈＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎＱｕａｌｉｔｙｏｆＬｉｆｅｗｉｔｈ 10 0Ｑｕｅｓｔｉｏｎｓ ,ＷＨＯＱＯＬ - 10 0 ) ,并在全球18个国家和地区开展调查。方积乾等于 1999年完成了ＷＨＯＱＯＬ - 10 0中文版的制定[1,2 ] 。本研究应用ＷＨＯＱＯＬ - 10 0量表对综合医院 110 3名护士的生活质量进行评定 ,为了解…     

造血干细胞移植治疗儿童白血病的临床研究

【目的】评价造血干细胞移植 (HSCT)治疗儿童白血病的疗效及合并症。【方法】非血缘相关脐血移植 (UD UCBT)治疗儿童白血病 5例 (AML 4例 ,HR ALL 1例 ) ;同胞外周血造血干细胞移植 (allo PBSCT)治疗CML及HR ALL各 1例 ;自体外周血造血干细胞移植 (auto PBSCT)治疗AML 2例。UD UCBT中 4例为HLA 5 / 6相合 ,1例为全相合。输入的脐血 (UCB)平均有核细胞数 (NC)为 6 2 9× 10 7/kg ,CFU GM为 0 17× 10 5/kg ,CD34+ 细胞数为 4 6× 10 5/kg。预处理主要以马利兰 (Bu)、环磷酰胺 (CY)、氟达拉宾 (Flu)和马法兰 (Mel)等组成的方案。【结果】 4例可评价的UD UCBT患儿中 3例完全植入 ,1例未植入者自体造血恢复 ,2例allo PBSCT患儿均完全植入。UCBT后外周血中性粒细胞绝对计数 (ANC)≥ 0 5× 10 9/L的中位时间为 +2 1d ,血小板 (PLT)≥ 2 0× 10 9/L的中位时间为 +40d。 2例allo PBSCT患儿外周血ANC≥ 0 5× 10 9/L的中位时间分别为 +10d和 +12d ,PLT≥ 2 0× 10 9/L的中位时间为 +11d和 +14d。 3例植入的UCBT者 2例分别发生Ⅰ度和Ⅲ度aGVHD。 2例allo PBSCT患儿分别发生Ⅱ度和Ⅲ度aGVHD。随访 2 5个月 ,2例auto PBSCT患儿均复发。allo HSCT 7例中 2例复发 ,2例死于移植合并症 ,3例无病存活至今。【结论】H     

用胚胎干细胞诱导的造血干/祖细胞重建小鼠造血功能研究

目的 胚胎干细胞体外诱导分化出现CD34^ 造血干/祖细胞，然后将其注射入致死量照射小鼠体内，以研究其重建造血功能。方法 胚胎干细胞自由分化形成胚胎体后，加入造血刺激因子混合液以诱导产生CD34^ 造血干／祖细胞，将这些造血干／祖细胞注射入经致死剂量照射的小鼠，观察小鼠存活率的改变，并取存活2个月的小鼠骨髓和脾脏，PCR检测嵌合体形成。结果 体外分化第13日CD34^ 造血干／祖细胞比例可高达17．36％，将这些细胞注射入致死量照射小鼠后，可提高存活率达86．67％，存活小鼠的骨髓和脾脏均检测到供体来源的细胞。结论 胚胎干细胞体外分化获得CD34^ 造血干/祖细胞，且后者具有其相应的正常生物学功能。     

全反式维甲酸对正常人脐血及正常小鼠造血细胞作用的研究

[目的]了解全反式维甲酸(ATRA)在体外对正常人脐血造血细胞的作用以及其在体内对正常小鼠造血细胞的作用。[方法]①在人脐血单个核细胞(MNC)的粒系集落形成单位(CFU-GM)、红系集落形成单位(BFU-E)和混合集落形成单位(CFU-GEMM)的半固体培养基中加入不同浓度的维甲酸,观察其对人脐血造血细胞集落形成的影响;②用含0.5 μmol/LATRA和IL-6、G-CSF、EPO、SCF的体系培养人脐血MNC,第7、14天时检测扩增后的人脐血有核细胞(NC)数、CD34+细胞数并观察其CFU-GM、BFU-E和CFU-GEMM形成;③用不同剂量的ATRA处理BABL/c小鼠,分别于处理后2、4、6、8、10 d检测小鼠外周血中CD34+细胞、WBC、RBC及PLT含量的变化,从而观察ATRA在体内对造血细胞的影响。[结果]①一定浓度的ATRA在体外能明显促进人脐血CFU-GM的生长,但对BFU-E、CFU-GEMM的形成无影响;高浓度时抑制CFU-GM、BFU-E和CFU-GEMM的形成。促进CFU-GM形成的最佳ATRA浓度为0.5μmol/L,浓度为5.0μmol/L时开始起抑制作用。当浓度达到10μmol/L时,无任何集落形成。②0.5 μmol/LATRA联合IL-6、SCF、G-CSF和EPO在体外孵育人脐血MNC,第7天和第14天时,ATRA组NC数与对照组相比无显著性差异;但其CD34+细胞数明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05);且ATRA组CFU-GM、CFU-GEMM及BF     

小鼠T-bet基因重组腺病毒载体的构建

【目的】构建小鼠T-bet基因重组腺病毒载体，为T-bet基因在支气管哮喘治疗中的作用研究提供有效的T-bet生物表达系统。【方法】采用内切酶从质粒T-bet／GFP-RV中切获约1．7kb的小鼠T-betcDNA片段，与穿梭质粒pShuttle连接，再通过稀有酶切位点将含T-betcDNA的表达盒与Adeno-X腺病毒载体骨架连接，构建重组载体pAdeno-T-bet，测序鉴定无错配及插入移位等DNA顺序改变，并转染HEK293细胞，出现CPE后取含病毒上清的细胞培养液抽提病毒DNA行PCR鉴定。【结果】PCR及酶切证实：T-betcDNA正确克隆到穿梭质粒pShuttle中，带T-betcDNA的表达盒成功重组到腺病毒载体基因组E1A缺失区，并在HEK293细胞中成功包装出具有感染活性的重组腺病毒pAdeno-T-bet。【结论】本实验成功构建了小鼠T-bet基因重组腺病毒载体，并在HEK293细胞中成功包装出重组腺病毒。