PVL基因阳性与阴性MRSA对坏死性肺炎的致病性比较及机制

目的研究Panton—Valentine杀白细胞素（PVL）基因对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）在坏死性肺炎中致病能力的影响及机制。方法取18只小鼠随机分为模型1组、模型2组及对照组各6只,分别通过气管灌注MRSA标准菌株ATCC43300、铜-23菌悬液及生理盐水,实验后24h及48h分别检测三组外周血白细胞计数。实验后48h光镜观察肺组织病理结构,收集支气管肺泡灌洗液（BALF）脱落细胞以电镜观察形态变化、流式细胞术检测凋亡率和坏死率。结果与对照组比较,实验后24h和48h外周血白细胞计数模型2组下降、模型1组升高;模型2组肺组织炎细胞浸润及支气管上皮细胞破坏情况重于模型1组、BALF中脱落细胞坏死率高于模型1组。结论PVL基因阳性CA—MRSA对坏死性肺炎的致病性强于PVL基因阴性MRSA,可能机制为前者能够分泌PVL基因并可编码PVL毒素。     

某三甲医院临床分离的革兰阴性杆菌分布及耐药性分析

目的了解医院临床分离的常见革兰阴性杆菌分布及耐药变迁,指导临床合理使用抗菌药物。方法回顾性分析2007年1月-2009年12月医院临床标本分离的革兰阴性杆菌分布和耐药性。结果 3年共分离革兰阴性杆菌6643株,主要为铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、鲍氏不动杆菌和肺炎克雷伯菌,分别占24.8%、23.1%、16.6%、10.7%;肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产ESBLs检出率有增加趋势;对肠杆菌科细菌敏感性较高的抗菌药物有亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦,铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌对亚胺培南耐药率显著增加。结论 3年医院临床分离的革兰阴性杆菌耐药率有较快增长,加强耐药性监测,合理使用抗菌药物非常重要。     

57例门诊皮肤软组织感染细菌的分布及药物敏感性分析

皮肤软组织感染是门诊常见病之一,为了解门诊皮肤及其软组织感染菌分布及对常用抗菌药物的敏感性,更好的指导临床用药,我们于2005年7～9月对我院门诊57例皮肤软组织感染患者进行病原细菌分离鉴定和药物敏感试验,且由于近年来国外报道耐甲氧西林金黄色葡萄球菌致皮肤及其软组织感染呈上升趋势,我们也对分离的金黄色葡萄球菌进行甲氧西林耐药检测,结果报道如下。     

金葡菌细胞壁变化与对万古霉素耐药的关系

目的了解金葡菌细胞壁变化与万古霉素耐药的关系，探讨耐药机制。方法将1株从临床标本中分离的异质性耐万古霉素的金葡菌（h-VRSA）在含有不同浓度的万古霉素培养基上连续诱导转种，用微量肉汤稀释法和菌谱分析法检测其对万古霉素的敏感性；同时采用扫描电镜和透射电镜分别对细胞壁的表面结构和厚度进行摄片观察；用PCR方法检测万古霉素耐药基因（vanA、vanB和vanC）。结果随万古霉素诱导浓度的增加，金葡菌对万古霉素的MIC逐渐增加；菌谱分析显示耐药亚群逐渐增加；电镜摄片可见细胞壁增厚，细胞壁粗糙，有结节状凸起；van基因检测为阴性。结论在万古霉素的选择性压力下金葡菌的耐药性可逐渐增加，细胞壁增厚是金葡菌对万古霉素耐药的重要机制。     

Tumstatin-EGFP在CHO细胞中的表达和活性分析

目的分析融合蛋白tumstatin-EGFP在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的表达及生物学活性。方法经过酶切和测序正确的真核表达载体PIRESneo3/STL-EGFP、PIRES-neo3/sig-EGFP和空载体稳定转染CHO细胞后,用Western blot从细胞上清液中检测融合蛋白的表达、倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。通过生长曲线分析外源基因的导入对CHO细胞生长的影响,MTT法和管状形成抑制试验评估tumstatin-EGFP融合蛋白的tumstatin样活性,体外靶向试验验证tumstatin能否携带融合蛋白特异性结合内皮细胞。结果获得了稳定转染的CHO细胞系。生长曲线表明转染后的较未转染的CHO细胞生长缓慢,MTT试验和管状形成抑制试验分别证实了融合蛋白tumstatin-EGFP具有抑制内皮细胞增殖,明显抑制血管管状结构的形成的作用;体外靶向试验也验证了tumstatin-EGFP能够特异性结合内皮细胞。结论重组真核表达载体在CHO细胞获得稳定表达,融合蛋白tumstatin-EGFP的表达不影响tumstatin和EGFP各自的生物学活性,并且在体外tumstatin能特异性携带EGFP靶向内皮细胞,为进一步tumstatin及其融合蛋白的研究奠定基础。     

不同人群血脂与血小板数量、平均血小板体积的相关性

目的研究不同人群血脂与血小板数(PLT)和平均血小板体积(MPV)的相关性,探讨血脂对PLT和MPV的影响。方法以1501例正常血脂的体检人群作为对照组,分析335例单纯性血脂异常人群、156例冠心病(CAD)患者、85例心肌梗死(MI)患者,以及85例MI患者中的28例急性心肌梗死(AMI)患者阿司匹林治疗前后的甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、PLT和MPV的变化。结果高血脂组占体检总数的18.3%。PLT在高血脂组变化无统计学意义,在CAD组和MI组显著下降(P0.05,P0.01),在AMI组经治疗后恢复不明显。MPV在高血脂组和CAD组升高(P0.05),在MI组显著下降(P0.01),在AMI组经治疗后显著恢复升高(P0.01)。结论血脂与MPV有明显相关性,MPV可以作为血脂异常诱发血小板活化并导致心血管疾病发生发展的监测指标。     

rPVL对Balb/C小鼠肺组织损伤及细胞因子的影响

目的研究rPVL对Balb/C小鼠肺组织损伤及肺组织匀浆中细胞因子的影响。方法 20只成年Balb/C小鼠分两组,对照组、rPVL组。对照组注射生理盐水,rPVL组注射rPVL,两组分别于注射后3 h、9 h处死小鼠,每个时间段5只,ELISA方法测肺组织匀浆中TNF-α、IL-8水平,RT-PCR方法测肺组织匀浆TNF-α、IL-8mRNA的表达。结果 rPVL刺激小鼠后3 h、9 h肺组织匀浆TNF-α、IL-8蛋白含量、mRNA表达量均高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,rPVL组TNF-α、IL-8蛋白含量、mRNA表达量随时间延长而升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 rPVL能引起小鼠肺组织严重损伤,且肺组织匀浆中TNF-α、IL-8大量释放,提示细胞因子在rPVL对小鼠肺组织损伤过程中起重要作用。     

RNA干扰技术及其在抗微生物感染方面的进展

研究证实RNA干扰现象是生物进化过程中抵御病毒感染和外源基因的特异性进化保守机制,这一结果开拓了RNA干扰研究与运用的新领域。现RNA干扰技术已在功能基因组学、疾病治疗、细胞信号传导通路分析等得到了成功的应用。随着传统药物治疗耐药性病毒和细菌感染越来越困难,RNA干扰技术的进步和发展为解决这一难题提供了一个很好的选择。现就RNA干扰技术及其在抗病毒和细菌感染方面的进展作一综述。     

74株溶血葡萄球菌重新鉴定的结果分析

目的 调查近年来临床标本中溶血葡萄球菌迅速增多,而金黄色葡萄球菌显著减少的原因。方法 使用生物化学和分子生物学的方法对临床分离的74株溶血葡萄球菌重新进行鉴定。结果 74株溶血葡萄球菌经传代培养后,有6株的血浆凝固酶、甘露糖和甘露醇等试验由阴性转变为阳性iPCR检测后,有15株细菌显示金黄色葡萄球菌种特异性基因（nuc和coa）阳性。结论 临床标本中葡萄球菌菌种构成比的变迁与部分细菌生化反应改变而导致的菌种鉴定错误有关,使用某些作用于细胞壁的抗生索可能是其原因之一。     

多黏菌素药物敏感性检测及临床解读专家共识

多黏菌素是耐药革兰阴性杆菌的重要治疗药物。2020年美国临床和实验室标准协会变更了多黏菌素药物敏感性折点，取消了多黏菌素敏感折点，仅报告中介(I≤2 mg/L)与耐药(R≥4 mg/L)，而欧洲抗菌药物敏感性试验委员会则建议采用敏感(S≤2 mg/L)、耐药(R＞2 mg/L)作为临床折点。多黏菌素药物敏感性试验的操作难度以及国际药物敏感性折点的不统一给国内临床实验室一线人员带来极大困扰。因此，如何精准开展多黏菌素药物敏感性检测，规范其报告解读是当前国内抗菌药物应用和抗感染领域亟待解决的问题。本共识对多黏菌素药物敏感性试验方法及结果进行规范解读，并提出相应建议。