人巨细胞病毒UL/b'区基因多态性

人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）在人群中普遍感染,在新生儿中,HCMV先天感染可引起黄疸性肝炎、先天性巨结肠、小头畸形等各种消化系统和神经系统畸形。导致HCMV不同致病性的发病机制还不十分清楚,一方面与宿主免疫功能,即有效的细胞及体液免疫应答有关;另一方面与病毒的数量、入侵部位及病毒自身的基因结构相关,尤其是与病毒毒力、组织嗜性和病毒逃避机体免疫攻击能力密切相关的基因关系密切。对于HCMV基因多态性的研究可以在基因层面揭示不同来源临床株的结构特点,对全面认识HCMV基因组和进一步深入研究基因组功能具有重要意义,成为HCMV研究的热点领域之一。近年来,国际多个研究小组对HCMV临床株广泛存在而旧有实验室株缺失的UL/b’区基因进行了较系统的研究,取得了较快的进展。此专题对这方面的研究进展进行概要介绍,以供同行了解与深入研究。     

针刺“外风府”穴对椎-基底动脉血流速度的影响

椎-基底动脉系统血流速度异常会导致患者出现头晕等症状,脑血流图检测能较客观地反映其供血状况,不仅是该病的常用检查诊断方法,还可作为疗效评价的客观指标.2007年3月～2008年2月,笔者采用针刺"外风府"穴的新方法(简称针刺法)治疗该病30例取得满意疗效,现报告如下.     

一起新生儿柯萨奇病毒B组引起的暴发流行

对1993年9月至10月沈阳某妇婴医院发生的一起新生儿集体感染,用间接免疫荧光法检测了36例患儿血清中的柯萨奇B组病毒的特异性IgM抗体,28例阳性,阳性率为77.8％。病毒分离结果为:12例患儿咽拭子中1例阳性;9例患儿便标本中4例阳性;4例患儿骨髓标本中3例阳性。同时,3例死亡患儿的9份解剖标本(包括心肌、心血、心包积液、脑组织和肠组织)全部病毒分离阳性。其中2例死亡患儿的心肌分离株经中和试验鉴定为柯萨奇病毒B组3型。同时对部分(9例)患儿母亲和全部(20例)有关医护人员进行的柯萨奇B组病毒IgM抗体检测结果为,2例患儿母亲阳性。对1993年10月30日至1994年5月31日期间1616例临产孕妇的柯萨奇B组病毒IgM抗体检测中,65例阳性,阳性率为4.02％。其中1993年10月30日至11月17日期间的146例被检孕妇中,12例阳性,阳性率为8.22％。表明,1993年9～10月期间沈阳市有柯萨奇病毒流行。     

人巨细胞病毒PPUL44蛋白核定位信号结合多肽氨基酸序列分析

目的 寻找与人巨细胞病毒（HCMV）PPUL44蛋白核定位信号（NLS）具有较强能力的多肽,研究这些多肽的氨基酸序列特点。方法 采用合成的HCMV PPUL44 NLSA和NLSB分别在一个随机多肽文库中筛选出与NLS具有结合能力的克隆,用四色荧光自动测序的方法测定上述克隆的DNA序列,对这些克隆的多肽氨基酸序列进行同源性比较,并与蛋白质文库中已知蛋白的氨基酸序列进行比较。结果 与HCMV PPUL44 NLSA具有结合能力的多肽（bNLSApep)的氨基酸序列与细胞输入蛋白Importin α亚单位的氨基酸具有较高的同源序列,其中bNLSApep48氨基酸序列AVVTPVLTEILK与Importin α亚单位的Arm7区的第18至29氨基酸序列ANIFPVLTEILQ具有极高的相似性;bNLSBpep39氨基酸序列则与Imporin α亚单位的全部8个Am区的第10至21氨基酸的同源序列相似。结论 HCMV PPUL44 NISA可能是Importin α亚单位针对HCMV PPUL44蛋白的特异性识别位点,与Importin α亚单位Arm7区结合;而HCMV PPUL44 NLSB则为Importin α亚单位的非特异性识别位点。本研究结果提供了Importin α亚单位的Arm重复区是NLS结构结合区的实验证据。     

人巨细胞病毒UL148A、UL148B、UL148C、UL148D基因在临床株中的多态性研究

目的研究人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）UL148A、UL148B、UL148C和UL148D基因序列在临床低传代分离株中的多态性。方法对22株经荧光定量PCR方法（Q-PCR）检测HCMV-DNA为阳性的临床株进行HCMV UL148A、UL148B、UL148C和UL148D基因全序列PCR扩增，并对PCR扩增产物进行序列测定及分析。结果22株临床株序列与Merlin株相比，临床分离株UL148A基因的核苷酸变异率为0．5％-8．3％，氨基酸变异率为1．3％-6．3％；UL148B基因核苷酸变异率为0．5％-4．6％，氨基酸变异率为1．3％-5．0％；UL148C基因核苷酸变异率为0．5％-3．0％，氨基酸变异率为1．3％-3．9％；UL148D基因核苷酸变异率为0．6％-8．5％，氨基酸变异率为1．7％-8．1％。22株HCMV UL148A和UL148D序列均分为3个型。与Merlin株比较，除U96株外，来自未经传代的尿标本中的UL148A、UL148B、UL148C和UL148D基因编码产物含有的翻译后修饰位点均保守。结论UL148C基因无论在核苷酸序列还是在蛋白的氨基酸结构上均较为保守。统计学分析显示HCMV UL148A和UL148D基因呈现一定的相关性。     

人巨细胞病毒UL149基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的研究人巨细胞病毒(humancytomegalovirus,HCMV)UL149序列在临床低传代分离株中的多态性,探讨HCMV基因多态性与其感染引起不同临床症状之间的关系。方法对29株经荧光定量PCR方法(QPCR)检测HCMVDNA为阳性的临床低传代分离株的细胞培养上清液进行HCMVUL149全序列PCR扩增,并对PCR扩增产物进行序列测定及分析。结果29株临床低传代分离株有26株PCR扩增阳性,与HCMVToledo株进行序列比较分析,26株临床分离株UL149开放阅读框架(openreadingframe,ORF)之间存在着高度的多态性,种系进化树分析结果显示26个序列可分为3个型,黄疸患儿分布以G1型为主;小头畸形以G3型为主;巨结肠仅见于G1、G2型,G3型未见。部分临床分离株存在CKP位点的缺失及TKP位点增加。结论HCMVUL149基因在临床分离株中存在着高度的多态性。来自不同临床症状分离株的UL149基因及其编码蛋白具有一定的结构特点,并与基因型呈一定的相关性。     

人巨细胞病毒UL135基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）UL135基因编码序列在临床低传代分离株中的多态性，探讨HCMV基因多态性与其感染引起不同临床疾病之间的关系。方法：对29株经荧光定量PCR方法检测HCMV．DNA为阳性的临床低传代分离株的细胞培养上清液进行HCMVUL135全序列PCR扩增，并对PCR扩增阳性的25例标本进行序列测定及分析。结果：29株临床低传代分离株有25株PCR扩增阳性。25株分离株UL135开放读码框架（0RF）长度均与Toledo株相同，其核苷酸的变异率为0．1％-2．6％。与Toledo株相比，部分分离株具有氨基酸翻译后修饰位点的新增或缺失。25株临床分离株UL135蛋白质二级结构预测结果显示了第28位、313—317位、161—163位、171位氨基酸均有蛋白质结构二级的改变。结论：25株HCMV临床低传代分离株UL135基因及其编码产物的氨基酸序列比较保守，但仍存在一定程度的多态性，未发现UL135基因的变化与HCMV先天感染导致的不同疾病存在着相关联系。     

人巨细胞病毒UL143基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的 探讨人巨细胞病毒(human eytomegalovirus,HCMV)UL143序列在临床患儿低传代分离株中的多态性及其与临床疾病的关系.方法 对19株HCMV临床低传代分离株进行HCMV-UL143 PCR扩增分析及伞序列测定分析.结果 19株HCMV感染患儿临床分离株均因碱基插入造成移码突变,开放阅读框架(ORF)比Toledo株短.根据序列变异情况可将19个序列分为2组,第1组16个序列新增一个MYRISTYL位点;缺失2个PKC磷酸化位点.未发现黄疸、小头畸形、先天性巨结肠等不同疾病类型的序列之间的差异.结论 HCMV-UL143较多存在于临床低传代分离株中,序列呈现一定多态性.     

CLIA和ELISA检测婴儿肝病综合征患者人巨细胞病毒特异性IgM抗体的比较

目的评价LIAISON化学发光免疫分析法（CLIA）检测人巨细胞病毒（HCMV）特异性IgM抗体的方法学特点。方法采用CLIA法对婴儿肝病综合征患者血清进行HCMVIgM检测,同时用ELISA试验进行同一批样本中部分的测定。结果CLIA检测584例,阳性132例,阳性率22.6%。两种检测方法的一致性为88.8%,但CLIA法的敏感性和特异性均高于ELISA（P〈0.05）。结论CLIA检测HCMV IgM具有灵敏度高、检测所需时间短、人为影响因素少、结果准确等优点,适用于临床检测。     

人巨细胞病毒UL143基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的 探讨人巨细胞病毒(human eytomegalovirus,HCMV)UL143序列在临床患儿低传代分离株中的多态性及其与临床疾病的关系.方法 对19株HCMV临床低传代分离株进行HCMV-UL143 PCR扩增分析及伞序列测定分析.结果 19株HCMV感染患儿临床分离株均因碱基插入造成移码突变,开放阅读框架(ORF)比Toledo株短.根据序列变异情况可将19个序列分为2组,第1组16个序列新增一个MYRISTYL位点;缺失2个PKC磷酸化位点.未发现黄疸、小头畸形、先天性巨结肠等不同疾病类型的序列之间的差异.结论 HCMV-UL143较多存在于临床低传代分离株中,序列呈现一定多态性.