人巨细胞病毒UL137基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）UL137基因在先天巨细胞病毒感染临床低传代分离株中的多态性。方法：选择经荧光定量PCR方法检测HCMV-DNA为阳性的临床分离株进行涵盖UL137全序列的UL136，UL138基因全序列PCR扩增，对扩增阳性的标本进行全序列的测序，核实测序结果，拼接出UL137基因编码序列，进行相关分析。结果：经分析获得22株HCMV临床分离株UL137ORF核苷酸序列，核苷酸变异分布于整个编码区，但主要集中在5’端220—290bp处，均为核苷酸碱基替换，无插入及移码突变。在UL137预测编码蛋白氨基酸序列中，新增2个半胱氨酸位点，导致17株临床分离株在71-76位氨基酸出现了N相连豆蔻酰化位点（MYR）的新增，及第90～92位氨基酸硫化cAMP位点的相应缺失。结论：HCMVUL137基因在临床低传代分离株中高度保守，但存在一定的多态性。     

寻常型天疱疮抗原Dsg3基因的真核表达

目的 探讨寻常型天疱疮自身抗原Dsg3EC1-EC5在哺乳动物细胞的克隆、表达及纯化,并以重组的Dsg抗原检测寻常型天疱疮患者及正常人血清中的天疱疮抗体.方法 根据基因库中的Dsg3基因序列分析,采用RT-PCR法扩增自身抗原Dsg3EC1-EC5多肽片段的cDNA,定向插入真核表达质粒pcDNA3.1TM/myc-His(-)B中,稳定转染人宫颈癌细胞系表达重组融合蛋白,并经Ni+亲和层析柱纯化.采用蛋白质印迹法鉴定蛋白表达产物.以重组Dsg3EC1-EC5蛋白为抗原用ELISA检测40份寻常型天疱疮患者及40份正常人对照组血清.结果 成功构建真核表达重组体pcDNA3.1TM/myc-His(-)B-Dsg3.纯化的Dsg3EC1-EC5蛋白能够与寻常型天疱疮患者血清中的天疱疮抗体发生反应.ELISA方法检测寻常型天疱疮患者血清,结果显示,天疱疮抗体的阳性率为95%.结论 真核表达的Dsg3EC1-EC5蛋白与寻常型天疱疮患者血清中的抗体发生特异性反应.     

柯萨奇B组病毒感染与儿童相关疾病关系的研究

目的探讨柯萨奇Ｂ组病毒感染与儿童急性白血病、过敏性紫癜、脊髓炎和川崎病等发生的关系。方法采用间接免疫荧光方法检测２５５例患儿血清和４７７例对照组血清柯萨奇Ｂ组病毒特异性ＩｇＭ抗体。结果３７例急性白血病患儿血清阳性率为１８９２％;７５例过敏性紫癜患儿血清阳性率为１０６７％;４１例脊髓炎患儿血清阳性率为１２２０％;５３例川崎病患儿血清阳性率为９４３％。４９例胰岛素依赖型糖尿病患儿血清阳性率为４０８％。４４７例对照组患儿血清阳性率为１３４％。除胰岛素依赖型糖尿病患儿外,其他实验组与对照组的检测结果经统计学分析,差异非常显著。结论柯萨奇Ｂ组病毒感染与儿童急性白血病、过敏性紫癜、脊髓炎和川崎病等的发生有关     

《中国肿瘤整合诊治指南:腹膜肿瘤》解读

腹膜肿瘤整体预后较差,以往继发性腹膜肿瘤的诊疗只能参考相应病种的指南。《中国肿瘤整合诊治指南:腹膜肿瘤》将相关癌种的诊治指南及文献进行整合,并进行全面规范性阐述,重点聚焦国内腹膜肿瘤临床实践和研究结果,最大特点在于立足“中国特色”“中国模式”,是国内外首部腹膜肿瘤诊治指南。笔者通过“防-筛-诊-治-康”全过程对《中国肿瘤整合诊治指南:腹膜肿瘤》进行解读。     

人巨细胞病毒UL142基因在临床低传代分离株中的多态性

目的研究人巨细胞病毒(HCMV)UL142基因在低传代分离株中的多态性,探讨其多态性与HCMV先天性感染不同致病性之间的关系。方法27株经荧光定量PCR方法检测HCMVDNA阳性的低传代分离株进行UL142全序列PCR扩增,阳性13株PCR产物进行UL142基因测序及结果分析。结果27株分离株UL142PCR扩增,13株阳性,阳性率48.2%,以Toledo株为参考株序列比较表明,13株UL142可读框长度均与Toledo株相同,为921bp,编码307个氨基酸的蛋白。DNA序列变异均为核苷酸替换,不同临床分离株UL142基因与Toledo株进行同源性比较,结果在核苷酸水平为94.4%~95.9%,氨基酸水平为89.9%~99.6%。二级结构预测分为三种构象。大多数HCMVUL142蛋白重要功能基团位点在所有分离株中均高度保守,仅四个位点在一些分离株中存在缺失或新增。系统进化树分析除Toledo株外,13株核苷酸及氨基酸序列可分为3个基因组。结论13株临床低传代分离株HCMVUL142基因DNA及其编码产物的氨基酸序列比较保守,但仍存在一定多态性。未发现不同临床分离株UL142基因多态性与HCMV先天性感染不同疾病表现的关系。     

筛选与分析与人巨细胞病毒UL133编码蛋白相互作用的蛋白

目的 应用酵母双杂交技术筛选人胎脑cDNA文库中与人巨细胞病毒(HCMV)UL/b′ UL133编码蛋白相互作用的蛋白,为研究UL/b′编码蛋白的生物学功能,揭示HCMV先天感染的致病机制奠定基础.方法 设计特异性引物,在引物上下游分别引入NdeⅠ和BamHⅠ限制性内切酶识别位点,采用PCR技术扩增 HCMV临床分离株H株的UL133基因片段,将其扩增产物与载体pGBKT7 同时使用NdeⅠ和BamHⅠ进行双酶切,纯化后,将UL133片段插入到pGBKT7载体上,构建诱饵质粒 pGBKT7-UL133,并测序分析.利用醋酸锂小量酵母转化方法,将测序正确的诱饵质粒pGBKT7-UL133转化入AH109酵母感受态细胞中,然后将转化的菌液涂布在色氨酸缺陷型培养基(-Trp)上,筛选阳性菌落.再将人胎脑cDNA文库质粒转化到含pGBKT7-UL133质粒的AH109菌株中,在四缺培养基(-Ade/-His/-Leu/-Trp)中筛选,在铺有X-Gal的滤纸上进行显色反应,提取显蓝色的阳性酵母筛选质粒,运用电穿孔方法将其转化到TG1的大肠杆菌中,并行PCR鉴定,提取大肠杆菌中的文库质粒,并将其回转到含诱饵质粒pGBKT7-UL133 的酵母菌株中,进行回转验证.对筛选到的阳性克隆进行测序和生物信息学分析.结果 用于酵母双杂交筛选的诱饵质粒pGBKT7-UL133成功构建,含有诱饵质粒的酵母菌株在-Trp上生长.转化有人胎脑cDNA文库和诱饵质粒pGBKT7-UL133的酵母菌AH109,在四缺培养基中观察到有28个酵母菌落生长,通过显色反应、酵母质粒转化及回转酵母细胞筛选得到4个阳性克隆.通过序列比对,发现在这些基因中,其中一个基因编码人类还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)依赖性氧化还原酶1.结论 成功应用酵母双杂交系统筛选出与HCMV UL/b′区UL133编码蛋白相互作用的蛋白-NADPH,提示UL133蛋白可能在增加病毒毒力和传染性,干扰细胞间的信号传导和细胞的生长、分裂、凋亡等方面发挥重要作用.     

浅谈推拿手法在小儿脑瘫康复中的应用

介绍小儿脑瘫的病因病机、临床分型以及脑瘫康复的推拿方法。其方法主要是在脑、头部、上下肢、背腰部运用点、按、揉、拿、滚、四指推法等推拿手法治疗各型脑瘫患儿,并配合做分髋、屈髋屈膝、压足弓等被动运动,对患儿的康复起到了很好的治疗作用。     

病毒性传染病的病原学实验室诊断

病毒性传染病从来没有远离过人类，对人类健康和生命的威胁一直存在。文章以新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2) 的实验室检测为例，重点介绍了目前实验室进行病毒性传染病病原 学检测的实时荧光定量PCR技术和血清学抗体检测技术各自的优势和局限性。以期对病毒性传染病，尤其是 COVID-19的临床诊断有一定的启示和帮助。     

人巨细胞病毒UL135蛋白结合蛋白的酵母双杂交筛选

目的 利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选与人巨细胞病毒(HCMV)UL135编码蛋白相互作用的蛋白.方法 将成功构建的酵母诱饵表达载体pGBKT7-UL135转化到酵母菌AH109中,再将人胎脑文库DNA转化到含有pGBKT7-UL135的酵母细胞中,筛选与HCMV UL135编码蛋白相互作用的细胞蛋白,并对阳性克隆进行测序和生物信息学分析.结果 最终确认60个克隆与HCMV UL135编码蛋白相互作用,其中2个克隆与Thy-1高度同源.结论 成功应用酵母双杂交系统筛选出与HCMV UL135编码蛋白相互作用的蛋白,其中Thy-1在HCMV感染致病过程中可能起重要作用.     

人类巨细胞病毒UL147基因在临床低传代分离株中的多态性

目的: 探讨人类巨细胞病毒(HCMV)UL147序列在临床患儿低传代分离株中的多态性及其与临床疾病的关系.方法: 对23株HCMV临床低传代分离株及2例同年龄组健康儿尿液HCMV-DNA采用PCR方法检测, 阳性健康儿尿液进行HCMV-UL147基因全序列测定及分析.结果: 25株分离株147 ORF长度为464-480 bp,序列呈现较高的多态性, 所有研究的标本中没有序列与Toledo完全一致.序列差异多位于序列的5'端, 二级结构预测表现为2种类型, 在重要的蛋白质功能区氨基酸序列高度保守.未发现黄疸、小头畸形、先天性巨结肠等不同疾病类型的序列之间的差异.结论: UL147基因可能在HCMV致病中起一定的作用.