黄芪及其复方中药治疗小儿β地中海贫血的前瞻性临床研究

目的：评价黄芪及其复方中药颗粒治疗小儿β地中海贫血的疗效及安全性。方法：采用随机对照双盲的临床试验法,57例入选患儿先按中间型及重型分层,再随机分入黄芪组、复方组(黄芪+党参+龟板)、安慰剂对照组,疗程12周,观察各组血液学指标及安全性指标。结果：经12周的治疗,中间型患儿复方组血红蛋白提升值为1.21±1.12 g/dL,黄芪组为1.05±0.80 g/dL,而对照组则下降了0.28±0.51 g/dL,3组比较差异有统计学意义（P<0.01）。疗程结束后复方组及黄芪组的Hb水平均显著高于对照组（P<0.05）。黄芪及其复方治疗均显著提升了胎儿血红蛋白水平,一定程度上提升了红细胞总数、平均血红蛋白含量及网织红细胞。中间型患儿复方组总有效率为64%,黄芪组为62%,均显著高于对照组（9%;P<0.01）。在重型患儿中也有类似以上效果,但逊于中间型患儿。服用药物对患儿白细胞总数、中性粒细胞总数、血小板总数及肝肾功能均无显著性影响。结论：黄芪及其复方治疗小儿β地中海贫血具有一定疗效且较安全。     

新生儿长期胃肠外营养相关性胆汁淤积的发生率及其影响因素

目的观察新生儿胃肠外营养相关性胆汁淤积(PNAC)的发生率及其影响因素。方法对2007年1月-2008年12月本院新生儿科胃肠外营养(PN)≥14d的98例新生儿进行临床分析。按PNAC的有无分组并进行临床资料(一般情况、PN相关指标)比较,计量资料用t检验,计数资料用χ2检验,危险因素以单因素及多因素Logistic回归模型进行分析。P<0.05为差异有统计学意义。结果PN≥14d的98例新生儿中,发生PNAC8例,发生率为8.16%。PN持续时间、氨基酸累积用量、脂肪累积用量、达到全胃肠道营养的时间与PNAC密切相关,胎龄<30周、感染在2组间差异均有统计学意义(Pa<0.05);氨基酸累积用量是PNAC发生的独立危险因素(OR=1.037,95%CI:1.004～1.071,P=0.004)。结论PN、氨基酸累积用量、脂肪累积用量、达到全胃肠道营养的时间可能是影响新生儿PNAC发生的因素,其中氨基酸累积用量可能是PNAC发生的独立危险因素。     

人类珠蛋白基因表达调控机制研究进展

人类 β珠蛋白基因簇的顺次切换表达机制包括 :在转录水平多个转录调控元件如 L CR、EKL F、CCAAT等的作用 ,在转录后各 m RNA的翻译及加工也受到影响。而 α珠蛋白基因簇的切换机制则为 ζ基因的关闭。另外 ,α及 β- m RNA3′U TR结构对其自身稳定性具有决定性作用 ,并进而影响其蛋白质水平。     

抗人血管内皮生长因子发夹状核酶基因 真核表达载体的构建及其 对靶 mRNA的切割

肿瘤的生长和转移需要血管形成，现已发现有多种生物因子参与其形成过程。而血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor, VEGF）被认为是最重要的血管生成因子之一，在肿瘤的生长与转移中起重要作用 [1]。我们曾在卵巢癌中发现有 VEGF的高表达 [2]，因此，我们自行设计和构建了针对 VEGF mRNA的发夹状核酶基因的真核表达载体，试图采用核酶（ ribozyme）技术抑制 VEGF的表达，以探讨卵巢癌基因治疗的新途径。 1 材料和方法 1． 1 菌种、质粒和试剂 大肠杆菌 DH5α、真核表达载体 pcDNA3由第四军医大学生化教研室提供。限制性内切酶及 T4 DNA连接酶等购自原平公司。 1． 2 抗人 VEGF核酶基因的合成 针对人 VEGF mRNA第三外显子，设计并合成抗人 VEGF发夹状核酶基因的两条互补单链。为便于克隆和鉴定，该基因的 5′端及 3′端分别设有 BamH I和 EcoR I酶切位点和两个保护碱基，共 66个碱基对。核酶基因两条链的序列为： V1， 5′ -CGG GAT CCC TGA TAA GAA TCC AAC CAG AGA AAC ACA CGT TGT GGT ATA TTA CCT GGT AGA ATC CCG-3′； V2， 5′ -CGG AAT TCT ACC AGG TAA TAT ACC ACA ACG TGT GTT TCT CTG GTT GGA TGT CTA TCA GGG ATC CCG-3′     

黄芪的含药血清诱导K562细胞表达^Gγ-mRNA和合成HbF

目的研究黄芪对K562细胞的^Gγ-珠蛋白基因表达的作用。方法以K562细胞为体外模型，用联苯胺染色方法来确定黄芪的含药血清诱导K562细胞向红系分化的作用；用RT—PCR方法研究黄芪的含药血清诱导K562细胞^Gγ-珠蛋白mRNA的表达；用Western Blot方法研究黄芪的含药血清诱导K562细胞HbF的合成。结果黄芪的含药血清作用于K562细胞5d后联苯胺染色阳性率达19．8％；同时伴有^Gγ-珠蛋白mRNA的表达的增加（最高可达3．6倍）和HbF的合成的增加，与丁酸钠组比较，黄芪组诱导K562细胞^Gγ-珠蛋白基因mRNA的表达可以持续3～5d，而丁酸钠组只有1d。结论黄芪有望成为一种有效的γ蛋白基因诱导剂。     

黄芪不同提取物对K562细胞向红系分化的诱导作用研究

目的探讨黄芪不同提取物对K562细胞向红系分化的影响。方法用超声醇提水提法从黄芪根中获取富含黄芪总苷(AST)的醇溶部分和富含黄芪多糖(APS)的水溶部分并分别作用于K562细胞,联苯胺染色法观察K562细胞向红系分化的情况,MTT法测定细胞活性。以丁酸钠(BA)处理的K562细胞作为阳性对照。结果以不同浓度(1、2、4、8mg/ml)APS作用于K562细胞后显示其有诱导后者向红系分化的作用,以4mg/ml为最适浓度,而AST诱导作用不明显。4mg/ml APS、AST及0.5mmol/L BA作用后K562细胞的联苯胺染色阳性率(BZ%)峰值分别为13.2%、2.9%及17.5%。以4mg/ml APS作用于K562细胞24、48、72h后,其BZ%显著低于同时点BA组(P<0.01),但72、96h的联苯胺染色阳性细胞总数明显高于BA组(P<0.01)。MTT测定结果显示,APS、AST对K562细胞的生长无明显抑制作用,而BA对细胞生长有明显抑制作用(P<0.01)。结论黄芪可诱导K562细胞向红系分化,其有效成分在富含多糖的水溶部分(APS),以4mg/ml浓度的诱导作用最强。黄芪提取物对K562细胞的生长无明显抑制作用。     

用反向点杂交法对广东地区35例重型β地中海贫血患儿及双亲的基因突变研究

为探讨临床对β地中海贫血（β－地贫）的快速基因诊断方法，应用ＰＣＲ反向点杂交（ｒｅｖｅｒｓｅｄｏｔｂｌｏｔ，ＲＤＢ）技术，对广东地区３５例重型β地贫患儿及其双亲的基因突变特征进行了研究。结果显示：（１）广东重型β地贫基因突变可见７种类型：ＣＤ４１－４２（－ＴＣＴＴ），ＩＶＳ２ｎｔ６５４（Ｃ→Ｔ）。ＴＡＴＡｂｏｘ－２８（Ａ→Ｇ），ＣＤ１７（Ａ→Ｔ），βＥ（２６）（Ｇ→Ａ），ＣＤ７１－７２（＋Ａ）及ＣＤ１４－１５（＋Ｇ），其结构比依次为：４０％，２８．６％，１１．４％，７．１％，７．１％，７．１％，４．３％及１．４％，和１３种基因组合形式；（２）基因突变类型不同致临床表型不同，β°纯合子临床多表现重症，发病早（３～６个月），靠输血维持生命；β°／β－（Ｅ或－２８）双重杂合子多表现中间型或重型，发病年龄较晚，贫血较轻，输血较少，ＰＣＲ－ＲＤＢ技术不需依赖同位素、操作简便、快速，宜于临床推广应用。     

特异性小分子干扰RNA抑制K562细胞肺耐药相关蛋白表达及其功能的研究

肺耐药相关蛋白（LRP）是与多药耐药（MDR）相关的糖蛋白。在儿童白血病及成人急性髓系白血病（AML）中，LRP表达是独立的预后决定因素之一，其过度表达造成患者对化疗不敏感，提示预后不良.近年来，小分子干扰RNA（siRNA）介导的RNA干扰（RNAi）既可以特异地降解同源mRNA序列，从而有效阻止相应蛋白质的表达，并且与相应的单链反义核酸相比，siRNA造成的基因抑制效率更高、特异性更好，所需有效浓度却大大减低。国内外学者将siRNA技术应用于消减慢性粒细胞白血病bcr／abl基因以及逆转p蛋白引起的MDR等的研究，取得了良好的效果。我们设计合成了LRP特异性siRNA-LRP，并转染丁酸钠（NaB）诱导的高表达LRP的K562细胞模型（K562／N），观察siRNA-LRP抑制LRP基因和蛋白表达、消除LRP改变细胞内药物蓄积和分布作用的效果，以期为逆转LRP介导的肿瘤细胞MDR、提高难治性和复发性白血病患者疗效探索新的方法，并探讨以siRNA介导的RNAi用于肿瘤细胞MDR治疗的可行性。     

绞股蓝多糖对免疫功能的影响

绞股蓝多糖（２５,５０１００ｍｇ／ｋｇ,ｉｐ）能明显提高小鼠碳粒廓清速率,其Ｋ值分别为０．０５１７±０．０１１７,０．０４１９±０．０１１９,０．０５７６±０．０４８,与对照组（ＮＳ）０．０１６９±０．０１１７相比有显著差异（Ｐ＜０．０５）。能增强肝癌Ｈｅｐｓ小鼠ＮＫ细胞活性,其活性（％）分别为２１．４０±４．００,４１．１９±１１．５６,４９．６５±５．０６,除２５ｍｇ／ｋｇ剂量组外,均显著高于对照组１７．９９±２．３５（Ｐ＜０．０５）,而对肉瘤Ｓ１８０小鼠ＮＫ细胞活性无明显影响。另外对小鼠血清溶血素和Ｓ１８０小鼠脾指数有显著提高作用,但对Ｈｅｐｓ小鼠脾和胸腺指数、Ｓ１８０小鼠胸腺指数和脾淋巴细胞转化无显著作用。     

脐血HLA抗原分型研究

脐血ＨＬＡ抗原分型研究本研究旨在初步确立脐血ＨＬＡ分型方法，为异基因的脐血造血细胞（ＣＢＨＣ）移植选择适当供者和建立标定ＨＬＡ分型的脐血细胞库创造条件。１．正常顺产的新生儿脐带血ＡＣＤ抗凝。所有孕妇均无内科和产科合并症，肝功正常，ＨＢｓＡｇ阴性，外周...