联麦氧钒对糖尿病大鼠心肌GluT4mRNA含量的影响

钒元素的降糖作用国内外已有较多研究 ,其作用机理之一可能是提高葡萄糖运转蛋白 (Glu T4)的基因表达。 Glu T4参与心肌能量代谢。本实验观察联麦氧钒 (BMOV)对糖尿病大鼠心肌 Glu T4m RNA的影响。一、材料与方法1.动物分组、饲养 ,糖尿病模型制备 ,联麦氧钒合成及使用方法 ,各项常规检查的方法 ,请参见 [1 ]2 .标本 :乙醚麻醉 ,处死大鼠后即取心脏于液氮中冷冻之后 - 70℃保存。3.引物 :r- Actin引物 1:5′- ATG GAA GAA GAA ATCGCC GC- 3′;r- Actin引物 2 :5′- ACA CGC AGC TCG TTGTAG AA- 3′;Glu T4引物 1:5′…     

重组人神经肽Y受体Y5融合蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析研究

目的 在大肠杆菌中表达人神经肽Y Y5受体,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析.方法 取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-Y5转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni2+-NTA亲和层析纯化.然后利用相关在线软件进行生物信息学分析Y5受体蛋白.结果 经IPTG诱导含有pET28a-Y5重组质粒的DE3菌,表达出重组人Y5融合蛋白.重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白.经相关在线软件分析后获得了Y5受体的相关生物学特性.结论 重组质粒pET28a-Y5在大肠杆菌DE3中成功表达,亲和层析纯化后获得较高纯度融合蛋白,并对Y5受体蛋白的生物学特征进行了预测,为进一步研究其生物学功能及其抗体的研制奠定了基础.     

大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶自杀基因对人胃癌细胞的作用

目的：探讨大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶自杀基因对胃癌细胞MKN-45的抑制及杀伤作用, 并证实旁观者效应。方法：构建真核表达载体pcDNA3.1-ePNP, 将重组载体转染MKN-45细胞获得高表达大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶基因（ePNP）的MKN-45细胞克隆。在MKN-45/ePNP细胞培养物中加入前体药物MePdR, 观察MePdR对该细胞的杀伤作用及旁观者效应。结果：随MePdR浓度的增大, MKN-45/ePNP细胞的生存率逐步下降,在MePdR浓度达到1 mg•L^-1时MKN-45/ePNP细胞全部被杀灭, 而未经转染的MKN-45细胞的生存率则不受影响，MePdR对MKN-45/ePNP有显著的抑制及杀灭作用；当MKN-45/ePNP细胞占总细胞的10%时，全部细胞被杀死。结论:ePNP/MePdR 自杀基因系统对胃癌细胞有生长抑制及杀伤作用并具有旁观者效应。     

PCR检测技术中模板DNA的简易快速提取法

本文报道用胰酶消化分散组织细胞,再用蛋白酶K和非离子去垢剂从肺癌组织细胞中提取DNA。结果表明:本方法只需 100mg左右的组织即可提取 10μg左右的 DNA,并且简单快速,省去以往用匀浆器破碎细胞的繁琐操作,提取的DNA不需用酚和氯仿抽提就可直接用于PCR。     

免疫酶染色法检测克山病患儿血清柯萨奇B组病毒的特异性IgM

<正> 克山病的病因至今尚未明确,研究者们认为有水土因素,生物因素以及两者的综合因素。生物因素方面有不少研究者报道病毒感染与克山病关系密切,尤其柯萨奇B组(CoxB)病毒较多。目前病毒感染的常规诊断方法主要是依靠分离病毒或恢复期抗体效价高于急性期四倍,这些方法不仅需要特殊设备还需时较长,只能作为回顾性诊断。为此,     

多重聚合酶链反应检测女性生殖道病毒感染

应用多重聚合酶链反应(PCR)检测了女性生殖道单纯疱疹病毒、乳头瘤病毒和巨细胞病毒。结果显示:在健康体检200例中,9例为阳性(4.50％);门诊病人712例中,142例为阳性(19.94％)。多重PCR具有一次可检测多重病原,且速度快、敏感和特异的优点,非常适用于临床检测女性生殖道病毒感染。     

DNA介导人胰岛素基因的转染及表达研究

ＤＮＡ介导人胰岛素基因的转染及表达研究白求恩医科大学儿科系（长春，１３００２１）王德林，严超英，胡克恒长春吉林省儿科研究所郑永晨，金慧敏胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）是儿科常见的疾病，为探索新的治疗手段，国内外学者进行了大量的实验研究，我们于１９９４...     

与人体肥胖相关的神经肽Y受体Y1基因的克隆及序列分析

目的 克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y1(NPYlR)基因,并鉴定该克隆基因序列的正确性.方法 从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录,以此为模板用PCR扩增NPY1R基因的cDNA,然后与pET 28a+载体重组,筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定,测序后与GeneBank中NPY1R基因进行同源性比较和序列分析.结果 PER扩增出一个1100 bp左右的DNA片段,与载体重组后DNA序列分析鉴定,DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY1R基因,且所克隆的基因共编码384个氨基酸,分子量为44 KD,与GeneBank中NPY1R基因序列同源性达100%.结论 克隆的人NPY1R基因与GeneBank中NPY1R序列完全一致,为进一步应用分子生物学技术深入研究NPY1R与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础.     

纤溶酶产生菌的分离筛选与鉴定

目的分离筛选具有较高纤溶活性的产酶菌株,对产酶菌株进行初步鉴定,并进一步对产酶菌株的体外溶栓机制进行初步研究。方法用生理盐水浸提实验菌固体发酵的大豆制备纤溶酶粗酶,通过纤维蛋白平板法筛选具有较高纤溶活性的产酶菌株,并进一步对菌株的菌落形态、菌体特征和生理生化特征进行鉴定。同时采用加热纤维蛋白平板法对菌株产生的纤溶酶在体外水解纤维蛋白的方式进行研究。结果从采集的多个样品中分离筛选到两株具有较高纤溶活性的产酶菌株C1A-01和C1A-03,初步确定这两个菌株均属于枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。体外溶栓实验表明,C1A-01和C1A-03是通过直接溶解纤维蛋白的方式发挥溶栓作用,而不是通过激活纤溶酶原间接起作用。结论获得了两株产较高纤溶酶活性的枯草芽孢杆菌菌株C1A-01和C1A-03,而且溶纤方式特殊,有望开发成新一代的抗栓溶栓药物。