用琼脂糖凝胶电泳快速检测轮状病毒RNA

本研究用琼脂糖凝胶电泳快速检测轮状病毒(RTV)RNA,并与聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了比较。对115例婴幼儿腹泻的粪便检测结果表明,腹泻粪便中的轮状病毒RNA经浓缩后琼脂糖凝胶电泳的阳性率与聚丙烯酰胺凝胶电泳的阳性率无明显差异,并且证明了用琼脂糖凝胶电泳检测RTV的RNA比聚丙烯酰胺凝胶电泳速度快、简单和经济,特别适用于临床上用于诊断RTV的感染,且可以在电泳过程中随时观察RTV的RNA的泳动情况和型别。     

用聚合酶链反应检测呼吸道感染的肠道病毒

本文用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测了儿童肺炎鼻咽分泌液和细胞培养液中的肠道病毒RNA。在30例鼻咽分泌物中有15例病毒分离阴性;15例分离出病毒,11例为肠道病毒,其中有5例为柯萨奇B组病毒。在用RT—PCR检测这30例鼻咽分泌物时,仅有4例阳性,且其病毒分离也阳性。提示:RT—PCR在检测鼻咽分泌物中肠道病毒RNA时敏感性较低,需在方法上进行改进,但本方法比较适用于鉴定细胞培养中的肠道病毒。     

干扰素对柯萨奇B组病毒及对7型腺病毒不同基因组型敏感性的比较

本文应用中性红摄取法对柯萨奇B组病毒的6个血清型(CoxB_(1～6))在细胞培养上对自然人白细胞干扰素(nIFN～α)的敏感性进行了比较研究。表明:CoxB_(1～6)对nIFN—α的敏感性有显著差异(P<0.01),其中CoxB_4最为敏感,CoxB_3最不敏感。本文同时比较了3型腺病毒(Ad_3)和7型腺病毒(Ad_7)的2个基因组型Ad_(7b)和Ad_(7b)对nIFN—α的敏感性,结果表明:Ad_3较Ad_(7b)和Ad_(7d)敏感(P<0.01和P<0.05),并且Ad_(7b)和Ad_(7d)对nIFN—α的敏感性也不同(P<0.05)。本文为干扰素的临床应用提供了实验依据。     

大鼠血红素氧化酶 1的基因克隆和原核表达

目的：从大鼠脾中克隆出血红素氧化酶1（RHO-1）基因，构建其原核表达载体，并在大肠杆菌中表达其蛋白。方法：用RT-PCR从大鼠脾总RNA中扩增出RHO-1 cDNA，并将其克隆入pMD18-T载体， 经TA克隆测序分析后,将阳性TA克隆RHO-1片段亚克隆入pET28a(+)原核表达载体，转化大肠杆菌BL-21，经限制性内切酶图谱鉴定后，阳性菌株经IPTG诱导，SDS-PAGE分析。结果：TA克隆测序分析证实该基因全长870 bp,编码289个氨基酸,所克隆的基因序列与GenBank中登录的RHO-1基因序列完全一致；限制性内切酶图谱结果表明成功构建了RHO-1的原核表达载体；SDS-PAGE结果显示RHO-1基因在大肠杆菌中获得表达。结论：用RT-PCR正确克隆RHO-1基因，构建pET28a(+)/RHO-1表达载体，并成功表达RHO-1融合蛋白。     

质量放大压电免疫传感器法测定人血清胸苷激酶的临床实验

目的探讨将质量放大压电免疫传感器方法检测血清中胸苷激酶(TK)作为肿瘤临床诊断的可行性。方法采用质量放大压电免疫传感器方法检测正常人、不同肿瘤患者血清。结果肝癌血清的TK水平最高(2.44±0.46)ng/ml,其次为乳腺癌(1.16±0.24)ng/ml,两者的TK水平均明显高于其他恶性肿瘤(P<0.001)。肺癌、胃肠恶性肿瘤、生殖系统恶性肿瘤以及其他恶性肿瘤血清间的TK水平接近,差异无统计学意义(P>0.05),但与良性肿瘤之间的差异有统计学意义(P<0.001)。此外,良性肿瘤血清的频移值亦显著大于正常人血清(P<0.001)。结论质量放大TK压电免疫传感器法作为一种简便灵敏hTK测定新方法,可用于临床肿瘤普查以及区分肿瘤类型,尤其是肝癌、乳腺癌临床的诊断。     

新分离枯草芽孢杆菌蛋白酶基因的克隆和鉴定

目的 从新分离的枯草芽孢杆菌中克隆和鉴定蛋白酶基因.方法 用PCR方法从新分离的枯草芽孢杆菌DNA扩增出蛋白酶基因,PCR产物克隆入pMD-18T载体,DNA序列分析鉴定重组的插入片段;DNA序列分析结果与GenBank上的序列进行比较确定新克隆蛋白酶基因的种类.结果 从枯草芽孢杆菌DNA中扩增出大约1 200 bp的PCR产物,重组入pMD-18T载体,DNA序列分析结果显示插入的DNA片段全长1 146个核苷酸,在Genbank搜索显示为枯草芽孢杆菌蛋白酶基因全序列,与GenBank报道的所有序列均有差别.结论 从新分离的枯草芽孢杆菌DNA中克隆出新的蛋白酶基因.     

人胸苷激酶基因cDNA克隆

目的　克隆人胸苷激酶基因cDNA。方法采用逆转录PCR方法扩增胸苷激酶cDNA ,用十二烷基氟波酯 (TPA)刺激人外周血细胞的mRNA为模板 ;扩增的PCR产物经TA克隆重组和内切酶鉴定 ,以及DNA序列分析确定克隆基因的序列。结果经逆转录PCR扩增出一个 70 0bp左右的DNA片段 ,TA克隆出现 1 6个阳性克隆 ,选择其中的一个克隆 (TKTA8)进行DNA序列分析 ,序列分析结果表明TKTA8克隆重组的序列是人胸苷激酶的cDNA序列。结论从外周血细胞中得到了hTK完整的开放读码框架。     

三七皂甙对兔髂动脉再狭窄模型血管直径及c-jun基因表达的影响

目的 探讨三七皂甙对兔髂动脉再狭窄模型的预防作用及其疗效，初步探讨其机制。方法 成年健康白兔30只，随机分为二组，经球囊血管内膜剥脱法制成髂动脉再狭窄动物模型。实验组给予路路通注射液(含三七皂甙25mg／ml)5m1．对照组给予同量生理盐水。30d后重复造影，观察血管影像学改变；处死动物，取出手术段血管，采用RT—PCR法检测血管中膜c—fos、c—jun基因的表达水平。结果 造影可见兔髂动脉经球囊过度扩张后，30d后实验组髂动脉有30％左右的狭窄，对照组有60％-70％的狭窄，程度重于实验组(P＜0．05)。经RT—PCR法检测，实验组c—jun表达水平低于对照组(P＜0.05)．而c—fos表达未得到阳性结果。证明 c—jun表达与扩张前血管造影直径和30d后血管造影直径之差存在相关性(r＝0．7394)。结论 三七皂甙能够在一定程度上抑制平滑肌细胞的增殖和迁移，从而抑制PTCA后再狭窄的发生，其机制可能与抑制原癌基因的表达，从而直接抑制平滑肌增殖的细胞周期有关。c—jun的表达水平与再狭窄有关。     

白色念珠菌分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶活性与其毒力的关系

目的： 探讨临床白色念珠菌感染者不同标本中分离的白色念珠菌分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶活性与其毒力的关系。方法： 分别采用牛奶平板和卵黄培养基法检测白色念珠菌感染者不同标本（痰、血液、鹅口疮、伤口、阴道分泌物）中分离的190株白色念珠菌分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶的活力，分别将产酶株的菌丝相和孢子相菌悬液（5×10⁶ CFU•mL^-1）注射小鼠尾静脉，1个月内观察小鼠死亡率及平均存活时间，以平均存活时间评价菌株毒力。结果：190株白色念珠菌分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶阳性检出率分别为83.68%和85.26%。动物实验结果表明，菌丝相白色念珠菌分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶的活力均显著高于孢子相(P<0.01，P＜0.05)；注射菌丝相白色念珠菌的小鼠死亡率高于注射孢子相的小鼠(P<0.05)，且平均存活期短于注射孢子相的小鼠(P<0.01)。结论：分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶是白色念珠菌重要毒力因子，酶活力可直接地反映其毒力和致病性。     

与人体肥胖相关的神经肽Y受体Y5基因的克隆及序列分析

目的 克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y5(NPY5R)基因,并鉴定该克隆基因序列的正确性.方法 从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录,以此为模板用PCR扩增NPY5R基因的cDNA,然后与pET28a+载体重组,筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定,测序后与CeneBank中NPY5R基因进行同源性比较和序列分析.结果 PCR扩增出-个1 300 bp左右的DNA片段,与载体重组和DNA序列分析鉴定,DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY5R基因,且所克隆的基因共编码445个氨基酸,分子量为50KD,与CeneBank中NPY5R基因序列同源性达100%.结论 克隆的人NPY5R基因与CeneBank中NPY5R序列完全一致,通过对其相关生物学信息的明确分析,为进一步应用分子生物学技术深入研究NPY5R与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础.