双抗体夹心免疫PCR—检测神经肽Y

建立了一种双抗体夹心免疫ＰＣＲ和神经肽Ｙ单克隆抗体包被；多克隆抗体作为夹心抗本，生物素标记的羊抗免ＩｇＧ和游离的亲合素格为连接分子；生物素化的腺病毒六邻本基因重组质粒ＤＮＡ作为指示分子；用腺病毒六邻体基因的特异引物扩增指标分子。     

用琼脂糖凝胶电泳快速检测轮状病毒RNA

本研究用琼脂糖凝胶电泳快速检测轮状病毒ＲＮＡ，并与聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了比较。对１１５例婴幼儿腹泻的粪便检测结果表明，腹泻粪便中的轮状病毒ＲＮＡ经浓缩后琼脂糖电泳的阳性率与聚丙烯酰胺凝胶电泳的阳性率无明显差异。并且证明了用琼脂糖糖凝胶电泳检测ＲＴＶ的ＲＶＮ比聚丙烯酰胺凝胶电泳速度快、简单和经济，特别适用于临床上用于诊断ＲＴＶ的感染，且可以在电泳过程中随时观察ＲＴＶ的ＲＮＡ的泳动情况和型别。     

人喉癌P53,Rb基因突变的PCR—SSCP检测

应用聚合酶链式反应－单链构象多态分析技术，检测了喉癌中抗癌基因Ｐ５３第５－８和１１外显子及Ｒｂ基因第２０外显子的突变。结果表明：Ｐ５３、Ｒｂ基因突变与癌组织病理分化程度有关，中、低分化癌的突变例数明显多于高分化癌；Ｐ５３、Ｒｂ基因突变失活与喉癌发生、发展及恶性度有关。     

儿童肾炎血栓弹力图的变化

为探讨儿童肾炎血液凝固性的变化，本文用血栓弹力图研究了５１例儿童肾炎和２６８例健康儿童血液的凝固性。结果表明：各组病人均有不同程度的血栓弹力图变化；１１例（１１／１４）肾小球肾炎；１０例（１０／２３）肾病综合征；８例（８／１０）过敏性紫癜肾炎和４例（４／４）尿毒症病人血液呈高凝状态。儿童肾炎血栓弹力图以高凝状态为主，特别是有肾功能衰竭的病人，主要表现在血栓弹力图ｍａ／ｍ值明显升高。血栓弹力图特别适用于监测儿童肾炎血液凝固状态和指导临床用药。     

糖尿病大鼠心肌GluT_4mRNA的表达水平

目的　探讨ＧｌｕＴ４ ｍＲＮＡ的表达水平与糖尿病心肌病的相关性。方法采用逆转录聚合酶链式反应的方法对链脲佐菌素 （ＳＴＺ）诱导的糖尿病大鼠心肌 ＧｌｕＴ４ ｍＲＮＡ的表达水平进行检测并与正常对照组大鼠对比。结果糖尿病大鼠心肌 ＧｌｕＴ４ ｍＲＮＡ的表 达水平明显低于正常对照组（Ｐ＜０．０１）。结论在发生糖尿病的同时,大鼠心肌细胞ＧｌｕＴ４ ｍＲＮＡ的表达受抑制,含量降低,导致心肌的能量代谢紊乱,引起糖尿病心肌病。     

藏灵菇发酵乳中降胆固醇乳酸菌的分离及鉴定

目的：筛选具有降胆固醇功能的乳酸菌菌株,为乳酸菌体外、体内的降胆固醇生理特性和机制研究奠定基础。方法：利用邻苯二甲醛法从源于藏灵菇发酵乳中的 7 株乳酸菌中筛选具有较高降胆固醇能力的乳酸菌菌株,并研究其耐酸性、耐胆盐活性、生长曲线、产酸特性及抑菌特性;结合生理生化实验及16S rRNA 寡核苷酸碱基序列分析鉴定菌株。结果：筛选得到1株降胆固醇效果明显的乳酸菌 LA1,胆固醇降解率达到 50.36%,且呈现较好的耐酸性和耐胆盐活性,其中 LA1 在第 10 小时进入对数生长期,第 18 小时进入稳定期;其能在 pH 1.5 的 MRS 培养基中存活至少 3 h,在含 0.3% 胆盐的 MRS 培养基中生长良好,经鉴定为嗜酸乳杆菌;抑菌实验表明：该菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作用。结论：该菌株可作为后续体内活性和机制研究的原始菌株。     

藏灵菇发酵乳中乳酸菌的分离纯化与鉴定

目的从藏灵菇发酵乳中分离益生乳酸菌,并研究其生理生化特性,为今后功能性乳制品的开发提供优良菌种。方法用乳酸菌分离培养基从藏灵菇发酵乳中分离乳酸菌;对分离的乳酸菌进行生理、生化鉴定和16S rRNA序列测定,并对其生长特性、耐酸及耐胆盐特性进行分析。结果从藏灵菇发酵乳中分离出两株乳酸菌LP1和LA1,初步鉴定两株乳酸菌分别为植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌;并能抵抗pH 3.0的酸性环境和0.3%-0.5%的高胆盐环境。结论植物乳杆菌LP1和嗜酸乳杆菌LA1具有较好的耐酸性和胆盐耐受力,具备作为益生菌应用的潜能。     

与人体肥胖相关的神经肽Y基因克隆及序列分析

目的 克隆与肥胖相关的人神经肽Y(NPY)基因,并鉴定该克隆基因序列的正确性.方法 根据GeneBank中收录的NPY基因序列,设计该基因上下游序列,经过PCR反应合成NPY的cDNA.然后与pET28a+载体重组,筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定,测序后与GeneBank中NPY基因进行同源性比较和序列分析.结果 PCR扩增出一个100 bp左右的DNA片段,与载体重组后和DNA序列分析鉴定,DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY基因.且所克隆的基因共编码36个氨基酸,分子量为4.2 kD,与GeneBank中NPY基因序列同源性达100%.结论 克隆的人NPY基因与Genebank中NPY序列完全一致,为进一步应用分子生物学技术深人研究NPY与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础.     

人CDC2基因的克隆和原核表达及鉴定

目的：从人肝癌组织中克隆出人细胞分裂周期基因2（ CDC2）,并在大肠杆菌中表达CDC2蛋白。方法：从人肝癌组织中提取RNA,采用RT-PCR法扩增CDC2 cDNA,用DNA凝胶回收试剂盒纯化并回收RT-PCR产物,将RT-PCR产物插入pET28a(+)载体NdeⅠ和 XhoⅠ两酶切位点之间,转化大肠杆菌BL21(DE3);IPTG诱导表达人CDC2蛋白。结果：RT-PCR扩增出约894 bp的DNA片段,与GenBank中的CDC2基因序列完全一致。经限制性内切图谱和测序鉴定,成功构建了pET28a(+)/CDC2原核表达载体。SDS-PAGE分析结果显示人CDC2蛋白在大肠杆菌中得已表达。结论：从人肝癌组织中成功地扩增出CDC2基因,并在大肠杆菌中表达。     

人CD200基因克隆及pcDNA3-CD200表达质粒的构建

目的：克隆人CD200基因并构建pcDNA3-CD200表达质粒。 方法：采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法,从用200 μg Con A刺激62 h后的正常人外周血白细胞中扩增出CD200基因,与pMD18T载体连接后,做全自动DNA测序,并用亚克隆的方法构建pcDNA3-CD200表达质粒。 结果：从正常人外周血白细胞扩增的人CD200基因与GenBank中人CD200序列（NM -005944）完全相同。 结论：成功地克隆人CD200基因并构建了pcDNA3-CD200表达质粒。