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目的了解反复呼吸道感染(RRTI)儿童血清甘露聚糖凝集素(MBL)水平及第一外显子54密码子的突变率,探讨血清MBL水平与RRTI的关系。方法用ELISA方法检测2000～2003年在重庆医科大学附属儿童医院就诊的65例RRTI儿童和238名正常儿童血清MBL水平,测定其中11例低MBL血症的RRTI儿童的免疫学指标(IgG、IgA、IgM、C3、C4),并用聚合酶链反应(PCR)限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)方法与55名正常儿童MBL第一外显子54密码子基因多态性进行分析。结果RRTI儿童出现低血清MBL水平频率明显多于正常儿童(χ2=6.96,P<0.05),其MBL54密码子突变率亦明显增高(P<0.05),低血清MBL血症导致RRTI主要在2岁以前,血清MBL水平越低,感染频率越高,其C3、C4水平也越高。结论儿童MBL54密码子突变导致低MBL血症在2岁以前有反复呼吸道感染的倾向,MBL水平越低,感染机率越高。     

脱氧核酶在培养人气道上皮细胞体系内的抗甲型流感病毒NS基因效应

目的 探讨针对甲型病毒(influenza A virus,IFV)NS基因特异性的脱氧核酶(DNAzyme,DZ-NS)在培养的人气道上皮细胞(9HTEo)体系内对甲型流感病毒复制的抑制效应,方法 光镜观察DZ-NS对IFV致9HTEo细胞病变效应变化的影响;病毒空斑形成阻断试验及四甲基偶氮唑盐比色试验(MTT)检测脱氧核酶DZ-NS对IFV复制的抑制和对感染IFV的9HTEo细胞的保护作用;RT-PCR检测DZ-NS对IFV mRNA表达的抑制作用.结果 DZ-NS可明显改善IFV所致的细胞病变并能明显提高细胞感染IFV后的存活率(P＜0.01);可显著抑制IFV-NS基因mRNA的表达;空斑实验病毒抑制率可达80.11%;DZ-NS在细胞内对IFA病毒表达的抑制效率,明显高于作为对照的反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,AS-NS)(P＜0.05).结论 在9HTEo 感染IFV细胞模型系统,DZ-NS能高效阻断IFV的NS基因的表达,是一种特异性的、高效的抗IFV基因治疗剂.     

脂多糖、转化生长因子-β1对小鼠骨髓来源树突状细胞的生物学作用

目的:探讨加入LPS、TGF-β1体外刺激小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)的方法及其对生物学特性的作用.方法:GM-CSF和IL-4诱导培养小鼠BMDC 6 d后,分别用培养基(对照组)、LPS、TGF-β1、LPS+TGF-β1,刺激BMDC48 h后进行形态学观察,流式细胞术检测细胞表型CD11C、CD80、CD86、MHC Ⅱ,混合淋巴细胞反应检测其抗原提呈功能,收集上清液用ELISA检测IL-6,IL-12 p70.结果:LPS组具有最典型的成熟样DC形态,CD80、CD86及MHC Ⅱ的表达水平显著升高,混合淋巴细胞反应和分泌IL-4、IL-12 p70能力最强,与对照组,TGF-β1组,LPS+TGF-β1组比较差异具有统计学意义(P<0.05),TGF-β1组成熟样DC形态最不典型,CD80、CD86和MHC Ⅱ的表达水平最低,混合淋巴细胞反应和分泌IL-4、IL-12 p70能力最弱,与对照组,LPS组比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论:LPS在DC的分化晚期可以刺激其成熟,并且具有更高的生物学特性,TGF-β1不抑制DC的分化,但可以抑制DC的成熟,从而降低其生物学特性.     

小鼠CCR7基因重组腺病毒的构建及其在DC2.4的表达

目的构建含有小鼠趋化因子受体-7(CCR7)基因的重组腺病毒(AdCCR7),观察其体外感染DC2.4细胞效率。方法将小鼠CCR7基因克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在BJ5l83菌内和骨架质粒pAdeasy-1同源重组,筛选阳性克隆;经线性化后转染HEK293细胞,获得含小鼠CCR7基因的重组腺病毒AdCCR7;TCID50方法检测病毒滴度,PCR法鉴定病毒DNA。带绿色荧光蛋白腺病毒(AdGFP)和AdCCR7分别感染DC2.4(GFP-DC2.4和CCR7-DC2.4),同时设未处理DC2.4为空白对照。流式细胞术(FCM)检测各组细胞表面分子CD11c,MHCⅡ,CD86及CCR7表达,趋化实验检测CCR7的功能。结果获得滴度约为l.4×1010pfu/ml重组腺病毒AdCCR7。AdCCR7感染DC2.4后,CCR7-DC2.4组与另外两组细胞比较CD11c、MHCⅡ及CD86的表达均无明显差异,但CCR7表达升高;其对趋化因子CCL19的趋化率可达44.7%~60.0%,明显高于其它两组。结论成功构建含小鼠CCR7基因的重组腺病毒AdCCR7,该病毒可感染细胞株DC2.4,增加细胞表面CCR7表达以及细胞对CCL19的趋化性,为进一步体内实验研究携带CCR7基因的未成熟DCs功能提供了工作基础。     

反复呼吸道感染儿童细胞因子活性观察

反复呼吸道感染(RRTI)是儿童的常见疾病,其病因和发病机理复杂。本文测定了40例RRTI 患儿体外淋巴细胞增殖反应及T 细胞分泌的IL-2、BCGFs 和IL-6活性。结果发现RRTI 患儿体外T、B 淋巴细胞增殖功能低下,T 细胞分泌的IL-2、BCGFs 和IL-6活性降低。提示机体免疫功能低下或缺陷是RRTI 发病原因之一,细胞因子活性降低可能具有重要作用.     

毛细支气管炎患儿外周血单个核细胞产生IL-4、IL-6和IL-10水平研究

采用ＥＬＩＳＡ法测定２０例毛细支气管炎（毛支）患儿外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）产生Ｔｈ２类细胞因子水平。结果表明，毛支组ＩＬ－４、ＩＬ－６和ＩＬ－１０水平明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０１，０．０１，０．０５），即Ｔｈ２类细胞因子水平增高。提示毛支患儿可能存在与哮喘相似的免疫功能异常，即Ｔｈ亚群功能失衡，并与发病密切相关。     

静脉注射免疫球蛋白对川崎病患儿TH1/TH2的影响

目的研究静脉注射免疫球蛋白(IVIG)对川崎病急性期治疗前、后辅助T淋巴细胞1/辅助T淋巴细胞2(TH1/TH2)功能平衡状态的影响.方法采用ELISA法及流式细胞仪技术(FACS)检测了15例川崎病患儿急性期IVIG(剂量为1 g/kg,一次输入)治疗前外周血浆IgE、外周血单个核细胞(PBMC)经培养72 h产生白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)水平及CD4 T细胞膜蛋白CD30的表达率,并与IVIG治疗后(3～5 d)及对照组的15例门诊体检正常儿童比较.结果川崎病患儿急性期IVIG治疗前CD4 T细胞CD30表达率为(16.9±7.5)%、治疗后为(3.8±4.0)%;对照组为(3.0±1.8)%,IVIG治疗前与治疗后差异有显著性(t=7.02,P＜0.01),治疗前极显著高于对照组 (u=5.38,P＜0.01),治疗后与对照组的差异无显著性 (u=0.47,P＞0.05).治疗前PBMC培养上清IL-4水平[(146±27) ng/L]高于治疗后[(54±25) ng/L],差异有极显著性(t=9.65,P＜0.01).对照组[(67±24) ng/L]与治疗前的差异有极显著性(u=5.27,P＜0.01)、与治疗后差异无显著性(u=0.72,P>0.05).治疗前IFN-γ水平[(668±312) ng/L]与治疗后[(723±463) ng/L]无显著性差异(t=0.78,P＞0.05),治疗前与对照组[(1099±661) ng/L]差异有显著性(u=1.97,P＜0.05),治疗后与对照组比较无差异无显著性(u=1.40,P＞0.05).治疗前血浆IgE[(155±76) ng/L]明显高于治疗后[(77±57 ) ng/L],差异有极显著性(t=4.25,P＜0.01), 对照组[(38±52) ng/L]与治疗前比较差异有极显著性(u=4.58,P＜0.01)、与治疗后差异无显著性(u=1.83,P＞0.05).结论川崎病患儿急性期TH1/TH2功能平衡状态失衡,呈TH2优势活化状态,IVIG对急性期川崎病患儿TH1/TH2功能失衡状态有纠正作用,使TH2优势状态恢复正常.     

蚕豆病发病因素及免疫功能探讨

已知红细胞葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)的缺陷是基本内因,但引起溶血尚有蚕豆摄食及其他因素。如Nathan等研究发现蚕豆病人血清中缺乏对红细胞凝集的抑制因子;杨锡强等发现22例选择性IgA缺乏病例中,3例系蚕豆病患者。因此本研究重点为体液免疫的改变。     

重庆医科大学儿童医院急性呼吸道感染住院患儿病毒病原学分析

目的分析住院急性呼吸道感染(ARI)患儿病毒病原检测结果，为临床儿童急性呼吸道感染提供病毒病原学诊断依据。 方法选择2003年4月至2005年3月重庆医科大学儿童医院呼吸内科住院治疗的急性呼吸道感染患儿，取其鼻咽分泌物做免疫荧光检测筛查7种常见呼吸道病毒抗原，包括呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒、流感病毒A及B型、副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型，对检测标本阳性的病例进行统计分析。 结果1052份标本中，阳性标本409份，占3888%。其中RSV阳性标本360份，占总阳性标本例数的8802%，副流感病毒Ⅲ37份占905%；RSV发病高峰时期在12月至次年2月和7、8月两个时期；RSV感染多见于3岁以下，发病高峰年龄为2~6个月，男女发病比例为224∶1。 结论2003~2005年重庆地区急性呼吸道感染的病毒病原体仍以RSV为主。     

738例汉族儿童甘露聚糖结合凝集素血清水平测定

目的 通过检测健康新生儿脐带血、正常儿童以及成人血清甘露聚糖结合凝集素(MBL)水平,了解汉族血清MBL的分布范围.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测重庆、武汉、乌鲁木齐268例汉族足月顺产健康新生儿脐带血、重庆地区470例0～6岁正常儿童血清MBL水平,并以87例成人作为对照.结果 儿童(28 d～6岁)血清MBL值呈非正态分布,且无年龄、性别差异.根据不同年龄组分析,新生儿血清(884～1825μg/L,中位数1597μg/L)、新生儿脐带血的MBL水平最低(0～4604μg/L,中位数1462μg/L),与其他年龄组(儿童组0-7860μg/L,中位数2536μg/L;成人组98～6495μg/L,中位数2920μg/L)比较差异有统计学意义(P＜0.01).而28 d～组(214～4195μg/L,中位数2299μg/L)、6个月～组(5～4637μg/L,中位数2622μg/L)及2～6岁组(198～7860μg/L,中位数2585μg/L)组间MBL水平比较差异无统计学意义(P＞0.1).分析28 d～6岁儿童血清MBL水平数据得出中位数为2563μg/L,P2.5～P97.5为171～5079μg/L.结论 28 d～6岁儿童血清MBL水平呈非正态分布,无性别、年龄差别;28 d～6岁的正常儿童血清MBL水平95%的可信区间为171～5079μg/L.