呼吸道合胞病毒感染后期Poly(I:C)诱发小鼠气道炎症及其机制研究

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染后再发呼吸道病毒感染时诱发气道炎症及反复喘息的致病机制。方法 64只6~8周雌性BALB/c小鼠随机分为对照组、RSV组、Poly(I:C)组及RSV+Poly(I:C)组(n=16)。收集各组肺泡灌洗液(BALF),计数BALF中细胞总数及分类计数,苏木精-伊红(HE)染色观察肺部病理损伤,检测小鼠气道反应性(AHR),ELISA法检测BALF中IFN-γ、IL-4、IL-13、基质金属蛋白酸9(MMP-9)及基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)水平。结果 RSV+Poly(I:C)组小鼠的气道炎症细胞浸润总数及AHR较其他3组显著增高(P0.05)。RSV+Poly(I:C)组小鼠的肺组织病理损伤较对照组及RSV组加重(P0.01);BALF中MMP-9水平较其他3组明显升高(P0.05),IL-4及TIMP-1显著低于RSV组(P0.01)。结论 RSV感染后病毒再感染可能引起MMP-9/TIMP-1表达失衡,加重气道炎症反应。     

Mina和IL-4基因交互作用与儿童哮喘相关性研究

目的研究Mina基因rs4857304(G/T)位点、IL-4基因位点rs2243248(T/G)和rs2070874(T/C)单核苷酸多态性与中国汉族儿童过敏性哮喘发病相关性,同时对3个基因位点之间交互作用进行分析。方法采用病例对照研究,MALDI-TOF技术进行IL-4和Mina位点基因分型。观察不同基因型和等位基因频率在哮喘和对照组中的分布差异,用MDR软件分析各位点之间交互作用。结果共纳入哮喘患儿202例年龄在6.97±2.85岁之间,对照组191例年龄在8.14±3.13岁之间。Mina的rs4857304位点,在哮喘组和对照组等位基因频率比较差异具有统计学意义(P=0.0199,OR=1.477,95%CI=1.062~2.052),哮喘组rs4857304位点等位基因T频率高于对照组,而两组之间该位点基因型分布比较差异无统计学意义(P<0.05)。IL-4基因位点rs2243248和rs2070874基因型和等位基因频率在两组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。MDR交互作用分析显示,IL-4基因位点rs2243248和Mina基因位点rs4857304构成的2个位点最佳模型;IL-4基因位点rs2243248、rs2070874和Mina位点rs4857304构成的3个位点最佳模型两组比较均有统计学差异(P<0.05)。结论 Mina基因位点rs4857304与过敏性哮喘具有相关性,同时IL-4位点rs2243248,rs2070874与Mina rs4857304均具有明显交互作用。     

支气管哮喘患儿诱导痰IL-17水平分析

目的:分析儿童支气管哮喘急性发作期、慢性持续期及临床缓解期诱导痰上清液白细胞介素-17 (Interleukin 17,IL-17)、白细胞介素-6(Interleukin 6,IL-6)、转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)水平,探讨其在哮喘发病过程中的作用.方法:...     

匹多莫德影响小儿辅助T细胞亚群功能的体外研究

目的探讨匹多莫德对小儿辅助T细胞亚群功能的影响。方法常规分离新生儿脐血单个核细胞(CBMC)和毛细支气管炎患儿外周血单个核细胞(PBMC),加入匹多莫德,ELISA检测培养上清中的IL鄄4、IFN鄄γ、IL鄄10和IL鄄12水平。结果匹多莫德可显著下调PHA诱导的CBMCIL鄄4分泌,上调LPS诱导的IL鄄12p40和IL鄄12p70的分泌;匹多莫德诱导毛细支气管炎患儿PBMC产生IFN鄄γ,恢复患儿体内相对亢进的Th2细胞功能,单独匹多莫德诱导毛细支气管炎患儿PBMC产生较高水平的IL鄄12p70(135±44pg/ml,n=9),较低水平的IL鄄10(52±16pg/ml,n=9)。结论匹多莫德具备调节Th1/Th2细胞功能平衡的能力,其机制可能与匹多莫德作用于抗原提呈细胞,刺激IL鄄12产生有关。     

抗生素诱导肠道菌群失调在RSV感染小鼠模型上对肺部Th1/Th2的影响

[目的]探讨抗生素诱导肠道菌群失调在RSV感染小鼠模型上对肺部Th1/Th2的影响。[方法]RSV组小鼠鼻腔接种RSV,抗生素加RSV组小鼠鼻腔接种RSV后连续口服抗生素头孢哌酮7d,接种后d9和d16进行变应原气道激发,d19检测BALF中细胞总数和分类计数,ELISA检测细胞因子水平、肺组织病理评分以及流式细胞仪检测肺部DC亚型和成熟度。[结果](1)小鼠感染RSV后,BALF接种到Hep-2细胞可以引起典型CPE,直接免疫荧光证实肺部有RSV抗原,BALF中细胞总数升高,以淋巴细胞增加为主,肺部可见明显炎症,说明RSV感染小鼠模型建立成功;(2)与对照组比较,RSV感染组和抗生素加RSV组小鼠肺部以Th1优势应答为主;(3)与RSV组比较,抗生素加RSV组小鼠BALF中细胞总数和分类计数、IL-4、IL-10和IFN-γ水平、肺部病理评分以及肺部DC亚型和成熟度无统计学差异。[结论]RSV感染可以掩盖或者逆转抗生素诱导肠道菌群失调小鼠易被诱导的肺部Th2样反应。     

小鼠STAT4和STAT6基因酵母双杂交表达载体的构建与鉴定

目的:分别克隆小鼠信号传导和转录活化因子-4(STAT4)、信号传导和转录活化因子-6(STAT6)基因编码序列(CDS序列),构建并鉴定其酵母表达质粒pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6。方法:PCR扩增STAT4和STAT6基因CDS序列,T-A亚克隆到pMD19-T simple载体中,酶切获取目的基因STAT4和STAT6,克隆入已经过双酶切和CIAP脱磷酸处理的酵母表达载体pGADT7,酶切鉴定并测序;转化pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6到酵母AH109细胞中,Western blot分析STAT4和STAT6的蛋白表达情况,同时检测其毒性和自激活作用。结果:成功扩增了STAT4和STAT6基因CDS序列,并分别成功克隆到pMD19-T simple载体和pGADT7中,测序结果符合要求。酵母表达质粒pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Western blot结果证实酵母细胞高表达融合蛋白STAT4和STAT6。结论:成功构建了酵母表达质粒pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6,为进一步研究STAT4和STAT6蛋白与其他蛋白质的相互作用奠定了基础。     

卡介苗多糖核酸对婴幼儿哮喘的免疫干预作用及肺功能影响研究

目的探讨卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)与哮喘患儿Th1/Th2的相关性及对肺功能影响.方法 33例婴幼儿哮喘随机分为A组20例(加用BCG-PSN),B组13例(对照组).在治疗前和治疗后6个月检测: PPD试验、血清IL-4和IFN-γ水平、血浆总IgE水平及肺功能并进行疗效判断.用药期间随访,每月1～2次. 结果治疗后(1)A组PPD阴性转阳性8例,B组PPD无阴性转阳性;(2)A组IL-4、总IgE水平明显下降,IFN-γ及IFN-γ/ IL-4比值明显升高;(3)两组肺功能均明显改善;(4)临床疗效比较,A组有效率 95 %,B组为76.92%.全部病例未见不良反应.结论 BCG-PSN具有调节Th1/Th2平衡,Th1细胞优势增强;减轻气道炎症,明显改善肺通气功能;降低IL-4、IgE水平,增加IFN-γ水平;提高免疫力,增强抗感染,对哮喘患者是良好的免疫调节剂.     

大鼠发育早期接触变应原对Th1/Th2亚群功能及哮喘发生的影响

目的 探讨妊娠期母鼠及其子代接触尘螨点刺液（Der p）对发育后期个体Th1/Th2平衡及哮喘发生的影响。方法 Wistar大鼠根据母体妊娠期及新生早期是否接触Der p随机分为对照组、母Der p-仔Der p-组（母鼠和其子代均未接触Der p）、母Der p+仔Der p+组（母鼠和其子代均接触Der p）和母Der p+仔Der p-组（母鼠接触Der p,其子代未接触Der p）,分别皮下注射Der p或生理盐水,30 d龄时除对照组外,其余3组以卵白蛋白（OVA）为变应原致敏并雾化吸入,诱发哮喘发生。取血浆检测OVA特异性IgE抗体、收集外周血单个核细胞（PBMC）用ELISA法检测培养上清中细胞因子IL-4和IFN-γ水平,行支气管肺泡灌洗记录支气管肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸性粒细胞的计数,留取肺组织行病理学检查。结果 母Der p+仔Der p+组在哮喘建模后PBMC培养上清中IFN γ水平显著低于母Der p-仔Der p-组,IL-4水平显著升高,IL-4/IFN-γ比值升高,OVA特异性IgE、BALF中嗜酸性粒细胞计数显著高于母Der p-仔Der p-组;母Der p+仔Der p-组与母Der p-仔Der p-组IL-4和IFN-γ水平差异均无统计学意义,OVA特异性IgE水平虽有增高,但差异不具统计学意义,BALF中嗜酸性粒细胞计数差异无统计学意义。母Der p+仔Der p+组Th2优势显著高于母Der p+仔Der p-组。 结论 胎鼠对于Der p跨胎盘的致敏作用可通过母体妊娠期间的免疫来完成,这一过程会根本上导致Th2优势免疫的发生,增加了变态反应性疾病的危险性。     

白藜芦醇对呼吸道合胞病毒感染小鼠肺部病毒滴度及其气道炎症的影响

目的 研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）感染小鼠肺部病毒滴度及其所致气道炎症的影响。方法6～8周龄雌性BALB/c小鼠,环磷酰胺100 mg/kg腹腔注射后,随机分为对照组、RSV感染组、白藜芦醇腹腔注射组、白藜芦醇雾化组,每...     

幼年大鼠阿霉素肾病模型的复制

目的：复制幼年大鼠阿霉素肾病模型,以期有助于研究儿童微小病变型肾病综合征的发病机制,预防肾小球硬化的发生。方法：给予4～5周龄SD雄性大鼠一次性尾静脉注射阿霉素6．5mg／kg体重,复制阿霉素肾病模型。动态观察24h尿蛋白定量、血清生化指标和病理形态学的变化。结果：与对照组比较,模型组大鼠从第2周开始出现大量蛋白尿、低白蛋白血症和高脂血症（均P〈0．01）,从第4周开始出现水肿,一直持续到第12周试验结束。第4周前,模型组大鼠光镜下肾小球形态正常,透射电镜显示模型组大鼠第2周时足突轻度融合,第4周时足突弥漫性融合、消失,第8周光镜下可见肾小球局灶节段性硬化,电镜下肾小球基底膜局部增厚,第12周时肾小球硬化的表现进一步加重。结论：本模型早期呈现微小病变型肾病综合征的表现,后期出现肾小球局灶节段性硬化,提示幼年大鼠阿霉素肾病模型复制成功。