人偏肺病毒A与B基因型对小鼠致病性的观察

目的 观察人偏肺病毒( human metapneumovirus,hMPV)A和B亚型感染BALB/c小鼠后,小鼠在体重、病毒载量、病理及气道反应性等方面的改变,探讨两亚型病毒致病性上的差异,为hMPV的进一步研究提供基础资料.方法 hMPV感染BALB/c动物模型后,通过使用real-time RT-PCR方法检测鼠肺内病毒载量的变化,肺功能检测仪监测小鼠气道反应性的变化及组织系统评分判定病理改变情况,来观测两亚型致病性的差异.结果 hMPV两亚型感染组,在体重的动态监测、病毒载量、肺组织病理改变及气道反应性上差异均无统计学意义.结论 hMPV两基因型感染BALB/c小鼠的致病性无差异.     

黄芪在树突状细胞水平对哮喘TH 1/TH 2平衡的调节作用

目的 探讨黄芪在树突状细胞(DC)水平对过敏性哮喘TH/TH2平衡的调节作用.方法 用rhGM-CSF和rhIL-4诱导培养外周血来源的DC并予鉴定,ELISA法检测其分泌的细胞因子IL-12、IL-10以及与自身T细胞反应后,RT-PCR检测T-bet和GATA-3 mRNA含量,流式细胞术检测T细胞分泌的胞内细胞因子IL-4和IFN-γ水平.结果 哮喘患儿外周血DC分泌IL-10高于对照组(P＜0.05);黄芪干预后DC分泌IL-10降低,与哮喘组比较差异有统计学意义(P＜0.05).哮喘患儿外周血DC分泌IL-12低于对照组(P＜0.05);黄芪干预后DC分泌IL-12增加,但与哮喘组比较差异无统计学意义.混合培养第7天哮喘组T细胞内IL-4水平显著高于正常对照组(P＜0.01);而IFN-γ水平则显著低于正常对照组(P＜0.05);哮喘组IL-4/IFN-γ比值高于正常对照组(P＜0.01).黄芪干预后T细胞内IL-4水平与哮喘组比较差异无统计学意义,而IFN-γ水平增加,与哮喘组比较差异有统计学意义(P＜0.05),IL-4/IFN-γ比值降低,与哮喘组比较差异有统计学意义(P＜0.01).哮喘组T-bet mRNA的表达强度明显低于正常对照组(P＜0.01);而哮喘组GATA-3 mRNA的表达强度则明显高于正常对照组(P＜0.05);哮喘组GATA-3/T-bet比值高于正常对照组(P＜0.05).黄芪干预后T细胞GATA-3 mRNA的表达强度与哮喘组比较差异无统计学意义,而T-bet mRNA水平增加,与哮喘组比较差异有统计学意义(P＜0.05),GATA-3/T-bet比值降低,与哮喘组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 哮喘患儿DC功能缺陷,产生IL-12减少、IL-10增加导致TH2优势分化,从而使TH1/TH2平衡向TH2倾斜,合成IFN-γ减少,进而造成气道慢性炎症、气道高反应性而致哮喘发作.黄芪对DC的调节主要通过降低IL-10的分泌水平,从而降低其抑制TH0细胞向TH 1分化的功能,即间接抑制了TH0细胞向TH2的分化.     

甘露聚糖结合凝集素基因多态性与血清蛋白表达水平的关系

目的了解汉族儿童甘露聚糖结合凝集素(MBL)第一外显子54密码子的基因多态性以及与血清MBL蛋白水平的关系。方法用ELISA方法检测71例儿童血清MBL水平,用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法对第一外显子54密码子基因多态性进行分析,比较不同基因型的血清蛋白质表达水平,并测定部分PCR产物的核苷酸序列。结果汉族人群MBL基因第1外显子54密码子3种基因型为GGC/GGC(77.5%)、GGC/GAC(18.3%)、GAC/GAC(4.2%),等位基因GGC(0.87)出现频率较GAC(0.13)高;低MBL水平基因型为GGC/GGC(12.5%)、GGC/GAC(75.0%)、GAC/GAC(12.5%),GGC/GAC基因型及等位基因GAC(0.50)频率较正常MBL组(0.03)高(P<0.005);GGC/GGC基因型的血清MBL的水平比GGC/GAC基因型明显增高[(3.67±2.10)μg/ml,(0.10±0.05)μg/ml,P<0.001],GGC/GGC基因型汉族人群血清水平较巴布亚新几内亚人[Papua NewGuinea,(2.45±0.82)μg/ml]明显增高(P<0.001);发现MBL第一外显子15、21、58、61密码子的突变。结论第一外显子第54密码子表现不同基因多态性分布,并对应不同的血清MBL水平。主要是GGC/GAC导致低血清MBL水平,但可能存在除52、54、57密码子外的第一外显子其他部位的基因多态性导致血清MBL蛋白质表达的种族差异。     

脐血单个核细胞表达IL-12、IFN-γ及其mRNA的观察

白细胞介素１２（ＩＬ－１２）的主要作用是促进ＴＨ１细胞和自然杀伤细胞（ＮＫ）产生γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）,介导细胞免疫。脐血单个核细胞（ＣＢＭＣ）产生ＩＬ－１２的能力鲜见报道。重组ＩＬ－１２（ｒＩＬ－１２）在体外能促进新生儿ＣＤ４＋Ｔ细胞产生ＩＦＮ－...     

脐血T细胞IL-4基因表达及其调控

目的探讨脐血T细胞中活化T细胞核因子(NF AT)的活性与IL 4基因表达调控的关系。方法采用ELISA和RT PCR法测定受抗CD3 PMA刺激后 ,18例脐血单个核细胞(CBMC)IL 4基因及其mRNA的表达 ;电泳迁移率转换试验(EMSA) ,测定10例CBMCNF AT的活性。22例成人外周血单个核细胞(PBMC)为对照。结果CBMC培养上清液中IL 4为(12.4±1.5)ng/L ,较PBMC明显低下〔(37.5±5.5)ng/L ,P∨0.01〕 ;CBMCIL 4mR NA的表达较PBMC明显减少 ;PBMC核蛋白内NF AT的活性较强 ,CBMC则几乎测不出NF AT的活性。结论在转录水平缺乏NF AT调控与脐血T细胞IL 4mRNA的转录水平低下有关 ;也是脐血T细胞表达IL 4水平低下的重要原因。     

IL-12~+重组卡介苗降低哮喘小鼠气道炎症的作用及其机制研究

目的探讨IL-12+重组卡介苗(recombinant balillus calmette-guerin secreting IL-12,rBCG)新生期接种对实验性哮喘小鼠气道炎症和气道高反应(airway hyperresponsiveness,AHR)的作用及其可能机制。方法新生Balb/c小鼠分4组:对照组(control组),卵白蛋白(OVA)组,rBCG干预(rBCG/OVA)组,rBCG/OVA/IFN-gamma中和抗体(rBCG/OVA/anti-IFN-gamma Ab)组。除对照组外,其余3组均给予OVA致敏和激发。最后一次激发后测24 h内AHR,观察支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavage fluid,BALF)中细胞总数及分类,评估肺部炎症变化程度,采用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)检测BALF中IFN-gamma、IL-10水平。结果 1)OVA组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞绝对计数和炎症病理评分均明显高于对照组,rBCG/OVA组上述内容均显著低于OVA组。2)新生期rBCG接种能显著降低哮喘小鼠模型的气道高反应性。3)rBCG/OVA组支气管肺泡灌洗液中IFN-gamma、IL-10水平明显高于OVA组。4)rBCG/OVA组与接种rBCG同时并使用anti-IFN-gamma Ab的哮喘小鼠相比气道炎症和AHR无显著差异。结论新生期rBCG接种能抑制哮喘小鼠气道炎症和AHR,促进IFN-gamma和IL-10的产生,其抗哮喘效应可能与其促进IL-10分泌有关。     

糖皮质激素诱导人气道上皮细胞9HTE0凋亡的研究

目的探讨不同浓度及不同时间的糖皮质激素诱导人气道上皮细胞9HTE0凋亡的机制。方法采用Annexin V/PI双染法检测低浓度组(0.3μmol/L)、中浓度组(3μmol/L)、高浓度组(10μmol/L)地塞米松(dexamethasone,Dex)作用6 h、12 h、24 h对人气道上皮细胞9HTE0早期凋亡的比例变化;RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达情况;细胞免疫荧光法检测Bcl-2、Bax蛋白的定位及表达情况。结果 Annexin V/PI双染法检测中、高浓度组Dex在作用12 h、24 h后,早期凋亡率较正常组有显著性差异(P<0.05);Bcl-2 mRNA于高浓度组Dex作用6 h后即出现变化,而在中、高浓度组Dex作用12 h及24 h后,Bcl-2 mRNA均显著下降(P<0.05),Bax mRNA均显著增高(P<0.05);Bcl-2、Bax蛋白定位于细胞核和细胞浆中,中、高浓度组Dex作用24 h后荧光有明显变化。结论糖皮质激素作为哮喘一线用药,诱导了人气道上皮细胞9HTE0凋亡同时使其具有浓度和时间依赖性,从而为气道上皮的损伤提供了理论依据。     

不同浓度地塞米松和甲泼尼龙对支气管哮喘患儿外周血单个核细胞免疫功能的影响

目的 观察不同浓度地塞米松(DEX)和甲泼尼龙(MP)对支气管哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+T淋巴细胞中2个功能性亚群(Th1/Th2)功能状态的影响.方法 选择2001年6月-2002年6月在重庆医科大学附属儿童医院就诊的15例哮喘患儿和14例健康体检儿童为研究对象.分为哮喘对照组、10-7mol·L-1DEX干预组、10-8mol·L-1DEX干预组、10-9mol·L-1DEX干预组、10-7mol·L-1MP干预组、10-8mol·L-1MP干预组、10-9mol·L-1MP干预组.清晨取其空腹静脉血5 mL,肝素抗凝,采用密度梯度离心法分离PBMC,加植物血凝素进行刺激培养,分别用10-7mol·L-1、10-8mol·L-1及10-9mol·L-1DEX或MP体外干预培养48 h.同期采集健康儿童空腹静脉血,同法分离培养.用ELISA法测定培养上清中γ干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-10及IL-12水平,并计算不同浓度DEX或MP对PBMC分泌细胞因子的抑制率.结果 1.哮喘对照组PBMC分泌IL-4水平显著高于健康对照组(P<0.05),IFN-γ/IL-4比值较健康对照组显著降低(P<0.05),2组间IFN-γ、IL-10及IL-12水平比较差异均无统计学意义(Pa>0.05).2.DEX和MP均可明显抑制哮喘患儿PBMC分泌IFN-γ、IL-4及IL-12,但对IL-10抑制作用差;与健康对照组比较,哮喘组DEX和MP抑制PBMC分泌IL-10的作用弱,差异有统计学意义(Pa<0.05).3.DEX和MP均以浓度依赖方式抑制哮喘患儿PBMC分泌IL-4,DEX在10-9mol·L-1时有促进IL-4分泌的效应,MP在10-9mol·L-1时可抑制IL-4的分泌,二组比较差异有统计学意义(P<0.05). 若以IFN-γ/IL-4表示Th1/Th2间的平衡,则MP可恢复Th1/Th2平衡(P<0.05).结论 DEX和MP均可抑制Th1/Th2类细胞因子分泌,但MP有助于恢复Th1/Th2平衡,提示临床选择MP治疗支气管哮喘更有利.     

儿童激素敏感性肾病综合征CD30~+细胞及TH2类细胞因子研究

目的　了解糖皮质激素敏感性肾病综合征 (SSNS)患儿CD30阳性细胞及分泌白细胞介素 4(IL 4) ,5 ,6的TH2细胞活化状态 ,进一步证实SSNS免疫异常模式。方法　流式细胞仪 (FACS)检测SSNS与健康儿童CD30阳性细胞百分率、ELISA检测外周血单个核细胞 (PBMC)培养上清中IL 4,5 ,6及血清IgE浓度 ;用SSNS患儿CD30细胞百分率与PBMC培养上清中IL 4,5 ,6及血清IgE作直线相关分析。 结果　SSNS患儿CD30阳性细胞率、IL 4及血IgE( 11.96 %lg 2 .11pg/ml,2 99IU/ml)显著高于健康儿童 ( 2 .81%lg 1.37pg/ml,110IU/ml) (P均 <0 .0 1) ,但IL 5 ,6水平与健康儿童比较则未见显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;SSNS患儿CD30阳性细胞百分率与IL 4及血IgE水平相关有显著性 (r =0 .94,P <0 .0 1,r=0 .74,P <0 .0 1) ;与IL 5、IL 6水平无显著性相关 (P <0 .0 5 )。结论　SSNS患儿CD30阳性细胞增加并不意味着存在TH2类细胞全面活化 ,SSNS患儿既有某些TH2类细胞因子 (IL 4)升高 ,又有一些TH2细胞因子的降低 (IL 5 )或无变化 (IL 6 ) ,本文资料不能证明SSNS发病与TH1/TH2失衡有直接关联