小鼠心肌蛋白质组双向电泳技术的建立及其优化

背景：双向电泳对蛋白质混合物的分离和分析精确而有效，已成为研究蛋白质组最有价值的核心技术之一；以小鼠模型为研究对象，模拟人体疾病状态，是研究心血管疾病的重要手段之一。建立并优化小鼠心肌蛋白质组双向电泳技术将为以后的心脏疾病研究奠定基础。 目的：建立并优化小鼠心肌蛋白质组双向电泳技术。 设计：以小鼠为研究对象，观察对比研究。 单位：南方医科大学附属南方医院病理科。 材料：实验于2004—02／09在南方医科大学附属南方医院病理科完成。选取和5周龄雄性无特殊病原体级BABL／c小鼠12只，体质量12～15g，由南方医科大学动物中心提供。 方法：在麻醉状态下脱臼处死小鼠，取心脏，对不同的蛋白提取方法、上样缓冲液、范围的固相pH胶条、蛋白上样量、染色方法等进行对比分析，扫描并数字化，再进行图像分析。建立并优化实验中的各个环节。 主要观察指标：蛋白分离的效果和实验的可重复性。 结果：心肌特异的裂解方案能在pH4-7胶条上分离约910个蛋白点；银染上样量200μg，考染1000μg较为适宜；正常小鼠心肌组织在17cmpH3-10L的胶上可分离约（920&;#177;30）个蛋白点，pH4～7L的胶条上，可分离（880&;#177;30）个左右蛋白点；蛋白点平均匹配率为86．9％。 结论：实验结果显示，对小鼠心肌组织蛋白质双向电泳各方面条件进行调整和优化，建立了相对稳定的心肌蛋白分离方法。     

不同来源的造血干/祖细胞表面归巢相关分子表达谱的比较研究

目的　比较不同来源的造血干 /祖细胞表面归巢相关分子 (HRM)表达谱的差异性。方法　采用高度灵敏的四色流式细胞术检测脐血 (UCB)、动员后的外周血 (mPB)及骨髓 (BM)来源的造血干 /祖细胞表面系列HRM表达水平。结果　UCB、mPB及BM来源的CD34bright细胞均高度表达黏附分子CD4 4、CD11a、CD18、CD6 2L、CD31及CD4 9d ;但UCB来源的CD34bright细胞及CD34brightCD38-细胞黏附分子CD4 9e、CD4 9f、CD5 4及趋化因子受体CXCR 4的表达水平显著低于mPB及BM来源者 ;上述不同来源的造血干 /祖细胞均不表达其他趋化因子受体 ,包括CCR 1、CCR 2、CCR 3、CCR 5、CXCR 1、CX CR 2、CXCR 3及CXCR 5 ;更为有意义的是 ,只有mPB来源的CD34bright细胞表达基质金属蛋白酶MMP 2及MMP 9。CD34brightMMP 2 及CD34brightMMP 9 细胞百分率分别为 (11.4± 4 .9) %及 (2 7.6± 7.8) %。结论　UCB来源的造血干 /祖细胞低表达或不表达某些HRM ,这可能是UCB移植后造血重建延迟的原因之一。     

小鼠心肌蛋白质组双向电泳技术的建立及其优化

背景:双向电泳对蛋白质混合物的分离和分析精确而有效,已成为研究蛋白质组最有价值的核心技术之一;以小鼠模型为研究对象,模拟人体疾病状态,是研究心血管疾病的重要手段之一。建立并优化小鼠心肌蛋白质组双向电泳技术将为以后的心脏疾病研究奠定基础。目的:建立并优化小鼠心肌蛋白质组双向电泳技术。设计:以小鼠为研究对象,观察对比研究。单位:南方医科大学附属南方医院病理科。材料:实验于2004-02/09在南方医科大学附属南方医院病理科完成。选取4～5周龄雄性无特殊病原体级BABL/c小鼠12只,体质量12～15g,由南方医科大学动物中心提供。方法:在麻醉状态下脱臼处死小鼠,取心脏,对不同的蛋白提取方法、上样缓冲液、范围的固相pH胶条、蛋白上样量、染色方法等进行对比分析,扫描并数字化,再进行图像分析。建立并优化实验中的各个环节。主要观察指标:蛋白分离的效果和实验的可重复性。结果:心肌特异的裂解方案能在pH4～7胶条上分离约910个蛋白点;银染上样量200μg,考染1000μg较为适宜;正常小鼠心肌组织在17cmpH3～10L的胶上可分离约(920±30)个蛋白点,pH4～7L的胶条上,可分离(880±30)个左右蛋白点;蛋白点平均匹配率为86.9%。结论:实验结果显示,对小鼠心肌组织蛋白质双向电泳各方面条件进行调整和优化,建立了相对稳定的心肌蛋白分离方法。     

甲基苯丙胺致PC12细胞的差异蛋白表达

目的探讨甲基苯丙胺(METH)作用于PC12细胞后的蛋白质表达变化。方法 METH2.5 mmol·L-1作用PC12细胞24 h后,提取细胞总蛋白质,丙酮沉淀法纯化蛋白,Braford法对蛋白质进行定量,并对蛋白质进行双向凝胶电泳,Image scannerⅢ透射扫描仪获取凝胶电泳图谱。应用Image Master 7.0软件对获得的双向凝胶电泳图谱进行差异性蛋白质点分析,并对相应差异蛋白点用高端基质辅助激光解析-飞行时间(MALDI-TOF)串联质谱仪进行差异蛋白质鉴定。结果应用双向凝胶电泳结合质谱分析技术,METH作用PC12细胞24 h后,共鉴定出18个差异表达蛋白质点,其中8个差异蛋白点在METH作用后表达增强,10个蛋白点表达减弱。这些蛋白质主要包括细胞骨架相关蛋白、分子伴侣、氧化应激和凋亡相关的蛋白以及与能量代谢相关的酶类。结论 METH诱导PC12细胞18个蛋白差异表达。     

血清脂联素水平与2型糖尿病、胰岛素抵抗的关系

目的:探讨血清脂联素与胰岛素抵抗、2型糖尿病的相关性.方法:以我院诊治的89例2型糖尿病患者(观察组)和90例年龄、性别与体质量指数(BMI)相匹配的体检健康者(对照组),测定血清脂联素(APN)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及三酰甘油(TG)的水平,并计算所得胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),比较上述指标在两组中的检测水平.分析血清脂联素与胰岛素抵抗、空腹血糖、空腹胰岛素的相关性.结果:观察组血清脂联素水平(3.98±1.34) mg/L,显著低于对照组(6.19±1.06) mg/L(P＜0.01),观察组的FPG、FINS、HOMA-R、TC、TG水平均高于对照组(P＜0.05),差异有统计学意义;Pearson相关分析显示,观察组患者血清脂联素水平与BMI、FPG、FINS、HOMA-R、HDL-C、TC、TG(均P＜0.05)呈负相关.Partial相关分析消除BMI因素影响显示,观察组的脂联素水平只与FPG、FINS、HOMA-R(均P＜0.05)呈负相关;对照组的脂联素水平与FPG、FINS、HOMA-R(均P＞0.05)无相关性.结论:低水平的脂联素参与胰岛素抵抗及2型糖尿病的发生.     

男性2型糖尿病患者血尿酸和颈动脉粥样硬化的关系

目的研究男性2型糖尿病患者血尿酸（SUA）水平和颈动脉粥样硬化的关系。方法收集男性2型糖尿病患者579例,按照SUA水平四分位数分为：95～250、251-302、303～363和364～658μmol／L4个组。检测体重指数、血压、血脂、尿素氮、肌酐、HbA1c等相关指标,高分辨血管外超声检测颈动脉血管斑块厚度和颈动脉内膜中层厚度,统计学分析SUA和上述指标的关系。结果男性2型糖尿病患者随着SUA水平升高颈动脉粥样硬化的检出率逐渐增高（P〈0．05）,且斑块厚度也随之逐渐增高（P〈0．05）,但和颈动脉内膜中层的厚度无关（P〉0．05）。男性2型糖尿病患者的年龄、SUA和HbA1c均为颈动脉粥样硬化的危险因素。结论SUA和颈动脉粥样硬化的发生发展可能有关。     

亚低温治疗新生儿缺氧缺血性脑病临床效果的Meta分析

目的总结国内外亚低温治疗新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）的研究结果,采用Meta分析方法评价亚低温治疗HIE的临床疗效,探讨亚低温治疗HIE的可行性。方法制定原始文献的纳入标准、排除标准及检索策略,检索PubMed、EMBASE、Ovid、Springer、中国期刊全文数据库、万方数据库及维普中文科技期刊数据库等,获得亚低温治疗HIE的相关文献。使用Cochrane中心推荐的方法进行文献质量评价,采用RevMan4.22软件对满足纳入标准的有关亚低温治疗HIE的RCT文献进行Meta分析。以病死率、严重神经系统发育障碍（脑瘫、发育迟缓、失明和听力损害）发生率和不良反应发生率作为观察指标,进行定性和定量综合评估。结果共检索到846篇文献,符合纳入标准的9项RCT研究（16篇文献）进入Meta分析,纳入研究均未采用盲法,文献质量评价7项RCT研究为A级,2项为C级,漏斗图检验提示无发表偏倚。Meta分析结果显示,亚低温组和对照组比较：病死率显著降低（RR=0.73,95%CI：0.58～0.91）;随访至18月龄时严重神经系统发育障碍发生率显著降低（RR=0.70,95%CI：0.53～0.92）;脑瘫发生率显著降低（RR=0.72,95%CI：0.53～0.98）;发育迟缓（RR=0.73,95%CI：0.53～0.99）、失明（RR=0.57,95%CI：0.30～1.08）和听力损害（RR=1.52,95%CI：0.71～3.25）发生率差异无统计学意义;不良反应发生率：窦性心动过缓（RR=6.35,95%CI：2.16～18.68）和PLT减少（RR=1.55,95%CI：1.14～2.11）发生率升高,需要治疗的心律失常、凝血功能异常导致的血栓或出血、脓毒症和惊厥发生率差异无统计学意义。结论亚低温治疗可降低HIE患儿的病死率,改善神经系统发育障碍,且具有较好的安全性。     

采用全基因组测序技术快速诊断危重症新生儿的临床实践

目的 探索全基因组测序在危重症新生儿临床快速诊断中的应用。方法 前瞻性纳入2019年8—9月复旦大学附属儿科医院新生儿重症监护病房中进行核心家系全基因组测序的危重症患儿。结合测序数据和患儿的临床特征,分析患儿基因检测结果、临床转归。结果 共检测15例患儿,男9例,女6例。主要入院原因为呼吸异常7例,反应差、喂养困难各2例,发热、低体温、早产、抽搐各1例。全基因组测序平均检测周期为4.5 d。最终,3例患儿获得基因诊断,诊断阳性率为20%(3/15)。其中,2例患儿因病情较重,父母放弃治疗;1例患儿于送检样本当日死亡,基因检测结果可解释病因。结论 全基因组测序技术可为临床怀疑遗传性疾病的危重症新生儿提供及时有效的诊断,为临床处置危重症病例提供遗传学依据。[中国当代儿科杂志,2023,25 (2):135-139]     

我国7城市中小学生食物购买行为调查

目的分析城市中小学生食物购买行为,为开展中小学生营养健康教育提供依据。方法采用多阶段随机整群抽样的方法,从北京等7个城市选取7427名中小学生作为研究对象,使用问卷调查收集中小学生食物购买相关行为及影响因素等信息。结果城市中小学生家庭中,母亲是食物的主要购买者,总是或经常购买的比例为72．2％。总是或经常参与食物购买的比例以小学生最高,为39．0％,初中生和高中生分别为28．9％和21．0％。总是或经常要求购买食物的比例以高中生最高,为27．5％,小学生和初中生分别为14．9％和25．5％。总是或经常被征求购买意见的比例以高中生最高,为50．8％,小学生和初中生分别为35．5％和41．9％。中小学生购买食物优先考虑的因素为口味、自己喜好和卫生等。结论城市中小学生家庭主要由母亲负责食物购买,中小学生对家庭食物购买有一定的影响力,应加强对中小学生及其家长的食物和营养知识的教育,提高他们合理选择和搭配食物的能力。     

新型冠状病毒奥密克戎变异株感染患儿呼吸道病毒核酸载量的循环阈值变化及其影响因素

目的探究新型冠状病毒奥密克戎变异株感染儿童病例的特点及影响病毒核酸循环阈值(Ct值)达≥35所需时间的因素。方法纳入2022年4月7日至6月2日上海市新型冠状病毒感染者定点收治医院(上海交通大学医学院附属仁济医院南部院区)收治的0～14岁奥密克戎变异株感染且有临床症状的患儿。通过聚合酶链反应, 每日检测鼻咽拭子新型冠状病毒核酸, 结果以Ct值表示。将症状起始或核酸检测首次阳性(以较早时间为准)至开放阅读框1ab基因Ct值≥特定数值(x)定义为"Ct值达x所需时间", 即TCt≥x。收集患儿年龄、性别、疫苗接种情况、基础疾病等资料。采用Cox模型分析TCt≥35的相关影响因素。结果共收治儿童病例871例, 中位年龄为2岁, 范围为1月龄至14岁, 其中474例(54.4%)为男童, 89例(10.2%)合并基础疾病, 主要包括先天性心脏病、实体肿瘤和癫痫等。轻型病例572例(65.7%), 普通型298例(34.2%), 重型1例(0.1%), 无危重型病例和死亡病例。TCt≥35为12(10, 14) d。Cox模型分析示, 与1～12月龄组患儿相比, 37～84月龄和85～168月龄...