SOCS3与LIGHT在诱导DC分化成熟中的相互作用

目的 探讨SOCS3与LIGHT在刺激树突状细胞(DC)分化成熟过程中的相互作用.方法 用重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)体外诱导培养小鼠骨髓单核细胞产生骨髓来源树突状细胞(BMDC).RT-PCR、Western blot检测受LIGHT刺激后BMDC中SOCS3 mRNA及SOCS3蛋白表达的时间动力学;利用反义核苷酸技术抑制SOCS3的表达,通过流式细胞术测定BMDC 表面分子CD40、CD86的表达水平.结果 LIGHT刺激后,BMDC的SOCS3 mRNA水平有不同程度增高(P＜0.05),并呈双峰度变化(分别出现在LIGHT刺激后2 h和10 h,增高幅度分别为92%和83%,其蛋白表达亦有所增加(LIGHT刺激24 h后表达量增加80%,P＜0.05);反义寡核苷酸能阻断SOCS3的表达,其对mRNA和蛋白表达的抑制率分别为49%和45%;经反义寡核苷酸处理后的BMDC在LIGHT刺激下其CD40、CD86表达均升高(P＜0.05).结论 LIGHT在刺激BMDC分化成熟过程中同时上调了SOCS3的表达;阻断SOCS3能使BMDC 对LIGHT 的反应更敏感,从而促使BMDC 成熟度更高;SOCS3对LIGHT 诱导的BMDC 分化成熟有负反馈调节作用.     

Na+,K+-ATP1b1对肝癌细胞生长侵袭能力影响的研究

目的:探讨Na ,K -ATP1b1(ATP1b1)对肝癌细胞生长及侵袭能力的影响。方法:将ATP1b1表达质粒ATP1b1-CMV-FLAG转染肝癌细胞SMMC-7721,以空质粒转染作对照,通过RT-PCR测定ATP1b1的mR-NA表达,在光镜下观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞生长增殖,Transwell细胞侵袭实验分析肝癌细胞的侵袭能力。结果:ATP1b1-CMV-FLAG转染后,SMMC-7721的ATP1b1mRNA表达水平明显增高(P<0.05),转染ATP1b1-CMV-FLAG组、pFLAG-CMV-1组和脂质体组的ATP1b1mRNA表达水平分别为1.159、0.182和0.093;转染ATP1b1-CMV-FLAG的SMMC-7721细胞呈变性改变,其生长受到抑制,转染相同DNA浓度的ATP1b1-CMV-FLAG组与pFLAG-CMV-1组对细胞生长的抑制效应有显著性差异(P<0.05);Transwell细胞侵袭实验显示转染ATP1b1-CMV-FLAG组的SMMC-7721细胞的体外侵袭力明显受抑制(P<0.01)。结论:实验结果说明了促进ATP1b1表达能抑制肝癌细胞的生长及侵袭行为。     

体外培养人成纤维细胞转化生长因子-β1自分泌规律的研究

目的　探讨体外培养人成纤维细胞转化生长因子 -β1 (TGF-β1 )的自分泌规律。方法　应用健康人包皮环切术所得包皮 ,通过体外成纤维细胞传代培养共 12代 ,运用 EL ISA法 ,分别检测不同代次成纤维细胞 TGF-β1 浓度 ,并测定第 6代成纤维细胞在不同时间培养上清液中 TGF-β1 的浓度。结果　自第 3代开始 ,成纤维细胞培养上清液可检测到 TGF-β1 ,并逐渐升高 ,至第 6代达分泌高峰 (45 0 ng/ L ) ,第 11、12代不能测到 ;而第 6代成纤维细胞 ,培养上清液中 TGF-β1 含量以第 5天的检测值最高 (6 80 ng/ L ) ,是第 1天检测值 (2 80 ng/ L )的 2 .5倍。结论　成纤维细胞 TGF-β1 自分泌能力 ,是由弱到强再逐渐减弱的过程 ,有自我调节能力     

HSP70反义寡脱氧核苷酸促进MRC-5细胞衰老的研究

目的 采用反义寡核苷酸技术了解HSP70与细胞衰老之间的关系.方法 设正义组、反义组,在转染后12,24 h,3,5 d,分别用流式细胞技术和免疫荧光技术检测HSP70蛋白水平、凋亡细胞比例和细胞周期.在转染后第2、4、6天,分别收集正义组、反义组和空白对照组细胞爬片进行SA-β-Gal染色.结果 各时间点反义组蛋白表达均低于正义组（P＜0.05）,凋亡细胞比例均高于正义组（P＜0.05）.随观察期延长,处于G1期的细胞数逐渐增多,但反义组均高于正义组（P＜0.05）.相同时间点反义组SA-β-Gal染色阳性细胞（蓝染细胞）数均较正义组和空白对照组多,随观察期延长,各组蓝染细胞均增多.结论 HSP70反义寡脱氧核苷酸下调MRC-5细胞HSP70的表达,使细胞出现G1期阻滞,促进细胞衰老.     

肿瘤树突状细胞疫苗治疗的临床研究进展

树突状细胞(Dendritic cell,DC)作为功能最强的抗原递呈细胞,具有摄取、加工抗原、以MGC-Ⅰ、Ⅱ类肽结合物的形式递呈抗原的能力,在天然免疫和获得性免疫中都发挥着极其重要的作用.     

小鼠肺癌B_7融合细胞的制备及生物学性质

目的　改善肿瘤细胞共刺激分子B7的表达。方法　将ALA970 2 肺癌细胞与活化的B淋巴细胞用聚乙二醇进行细胞融合 ,经ELISA及免疫细胞化学筛选后 ,用S P免疫细胞化学染色观察融合细胞的肺癌抗原及B7分子的表达 ,并观察融合细胞的体内外生长情况。结果　经筛选获得一株融合细胞FLB2C。融合细胞既表达肺癌抗原 ,又表达B7分子。体外培养显示其贴壁性较ALA970 2 肺癌细胞减弱 ,生长明显变缓 ,细胞倍增时间延长 ,不能在软琼脂中形成集落。接种融合细胞亦不能在小鼠体内成瘤 ,而接种ALA970 2 细胞的 10只小鼠中 6例腋下出现肿瘤生长 ,3例还发生肺转移。结论　通过细胞融合方法可以有效改善肿瘤细胞的B7分子表达 ,从而提高肿瘤细胞的抗原性。融合细胞FLB2C的致瘤性明显减弱 ,为制备更有效的肺癌疫苗奠定了基础。     

癌胚抗原单克隆抗体-酶免疫法测定癌患者血清中癌胚抗原水平的研究

应用单克隆抗体(McAb)-癌胚抗原(CEA)-酶免疫法(EIA)测定388例癌患者、46例非癌疾患和57例正常人血清中 CEA的水平。结果表明,218例治疗前癌患者的血清CEA值明显升高,其中又以结肠癌、直肠癌、肝癌及肺癌的阳性率较高,分别为65.00％、70.00％、81.81％及72.22％。发现前二种癌患者中有25例手术后(内有4例未能切除癌肿)和170例术后病情缓解时,其血清CEA值降低;而在癌肿发展或复发转移时,CEA值又有升高。     

三项紧张性刺激对59名运动员的心率、血压、指容和皮电的作用

植物性神经是神经系统的组成部分,支配着内脏器官的生理活动。早在1952年Lacey等就以个体的心率、心率的变化率和皮肤电反射为指标,观察口算、联想、过度通气(快深呼吸)和4℃冷水加压刺激的反应,用以研究内脏神经的活动型。到1957年Alexander进一步指出有二种活动类型,即“个体一反应”特异型和“刺激—反应”特异型,许指出它们各自在身心疾病中的作用[1]。1975年Metoba应用噪音刺激观察个体对手指容积脉搏波(指容)的反应,     

Na+,K+-ATP酶β1亚基与肿瘤细胞生长相关性

[目的]探讨Na^＋，K^＋-ATP酶β1亚基（ATP1B1）与肿瘤细胞增殖分化的关系，以及外源性ATP1B1对肿瘤细胞的影响。[方法]采用RT-PCR检测肿瘤细胞株、正常外周血单核细胞中ATP1B1的mRNA水平，以及经脂多糖（LPS）促进细胞增殖、二甲亚砜（DMSO）诱导肿瘤细胞分化后ATP1B1的mRNA水平变化，并观察通过转染技术增加肿瘤细胞中ATP1B1表达后细胞的生长情况。[结果]肿瘤细胞株中ATP1B1的mRNA水平明显高于正常单核细胞（P〈0.05），促进细胞增殖后细胞中ATP1B1的mRNA水平增高（P〈0.05），诱导分化后降低（P〈0.05），导入外源性ATP1B1使肿瘤细胞增殖明显受抑（P〈0.05）。[结论]Na^＋，K^＋-ATP酶β1亚基可以成为反映细胞功能状态特别是肿瘤细胞增殖代谢的重要指标，为肿瘤生物治疗的新策略提供重要的实验依据。     

抗人肝癌单克隆抗体HL_2在肿瘤免疫组化中的应用

本文采用免疫印迹法测定了抗人肝癌单克隆抗体HL2所针对的肝癌相关抗原—HL2抗原分子量为50kD。ABC免疫组织化学染色51例肝细胞癌、64例其他肿瘤及12