钙敏感受体对人单核巨噬细胞株THP-1细胞因子分泌功能的影响

目的 探讨钙敏感受体(Calcium sensing receptor,CaSR)对THP-1源性巨噬细胞分泌细胞因子能力的影响。方法 首先将人单核细胞株THP-1用佛波脂(PMA,100 nmol/L)诱导,使之转化为具有贴壁能力的巨噬细胞株THP-1(以下简称THP-1)。用CaSR特异激动剂氯化钆(GdCl₃,1 mmol/L)处理细胞后,用ELISA法检测CaSR的激活对THP-1分泌细胞因子IL-1β、TNFα的影响,并利用Western Blotting方法检测NF-κB信号通路中p65、p50和IκBα蛋白的表达变化。结果 (1)用GdCl₃处理后,THP-1细胞上清液中IL-1β、TNF-α的含量明显升高,但该作用可被CaSR特异抑制剂NPS2390(10 μmol/L)抑制;(2)在Gd³⁺作用组,THP-1细胞中NF-κB-p65表达明显上调,同时伴有IκBα的减少;在NPS2390预处理组,Gd³⁺所引起的NF-κB-p65和IκBα变化被抑制;各组NF-κB-p50变化不明显。结论 CaSR的激活可能通过激活NF-κB信号通路促进THP-1源性巨噬细胞株分泌细胞因子IL-1β、TNF-α,提示CaSR可能参与涉及单核巨噬细胞激活的各种疾病。     

精胺抑制模拟缺血-再灌注心肌细胞Fas/FasL的表达

目的:观察外源性精胺对缺血-再灌注损伤诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响并探讨其可能机制。方法:原代培养的乳鼠心肌细胞缺氧、无血清孵育2h,再复氧和复血清培养24h以模拟心肌缺血-再灌注损伤,并于再灌注期给予10μmol/L的外源性精胺。利用流式细胞仪检测心肌细胞的凋亡率;电镜观察细胞超微结构变化;应用RT-PCR、Western blotting方法和免疫荧光的方法观察Fas、FasL mRNA的转录和蛋白的表达。结果:模拟缺血-再灌注后心肌细胞凋亡率为27.4%±1.8%,明显高于对照组(5.7%±0.3%),细胞超微结构出现凋亡、坏死等改变,Fas、FasL的转录和蛋白表达均明显上调,与对照组比,Fas mRNA和FasL mRNA转录分别增加了2.2倍和2.4倍(P0.01);Fas和FasL的蛋白表达分别增加了1.7倍和1.9倍(P0.01);10μmol/L的外源性精胺干预后心肌细胞凋亡率降低为21.7%±1.3%,Fas、FasL的转录和蛋白表达也明显被抑制(与单纯模拟缺血-再灌注组比,P0.05或P0.01)。结论:外源性精胺可通过抑制Fas死亡受体途径而减轻模拟缺血-再灌注诱导的心肌细胞凋亡。     

钙敏感受体参与乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制研究

目的 观察钙敏感受体(CaSR)对缺氧/复氧(A/R)乳鼠心肌细胞内钙的影响,探讨CaSR参与缺氧/复氧乳鼠心肌细胞损伤的机制及信号传导途径.方法 原代培养乳鼠的心肌细胞,建立A/R乳鼠心肌细胞模型(采用95%N2+5%CO2饱和2 h的低糖、无血清DMEM液孵育60 min,再更换成正常氧合细胞培养液孵育30 min的方法).心肌细胞随机分为6组:(1)正常对照组;(2)A/R组;(3)A/R+GdCl3组:在复氧开始时给予GdCl3(CaSR激动剂)300 μmol/L;(4)A/R+NiCl2+CdCl2+GdCl3组:在复氧时细胞培养液内加入10 mmol/L NiCl2(Na+-Ca2+交换阻断剂)和200 μmol/L CaCl2(L-Ca2+阻断剂)孵育10min,再加入300/μmol/L GdCl3;(5)A/R+U73122+GdCl3组:在复氧时细胞培养液内加入10μmol/L磷脂酶C(PLC)阻断剂U73122孵育10 min,再加入300μmol/L GdCl3;(6)A/R+thapsigargin+GdCl3组:在复氧时细胞培养液内加入10μmol/L肌浆网三磷酸肌醇(IP3)敏感Ca2+泵阻断剂thapsigargin孵育10 min,再加入300μmol/L GdCl3.应用Fluo-3/AM荧光指示剂负载心肌细胞,激光共聚焦显微镜连续观察细胞内钙荧光强度的动态变化.结果 A/R使心肌细胞内钙离子浓度([Ca2+];)增加,GdCl3使A/R乳鼠心肌细胞[Ca2+]?I进一步增加;NiCl2和CdCl2对GdCl3引起的心肌细胞[Cd2+]I增加无影响;而U73122和thapsigargin则抑制了GdCl3引起的心肌细胞[Ca2+]I增加.结论 CaSR通过磷脂酶C-三磷酸肌醇途径参与了A/R所致心肌细胞钙超载.     

青蒿素对大鼠血管平滑肌肌张力的影响

青蒿素(artem isin in)是从菊科植物黄花蒿中提取分离到的一种具有过氧桥的倍半萜内酯类化合物。实验表明,该药具有抗疟、抗孕、抗纤维化、抗血吸虫、抗弓形虫、抗心律失常和肿瘤毒性等作用[1,2]。高血压病是指未查出明确病因而以非特异性循环动脉压持续升高为特点的病理过程,常伴有不同程度心、脑、肾的损害。传统的抗高血压药物主要有4个类型,即利尿剂、β-受体阻断药、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂和钙拮抗剂。研制高效、长效、多器官保护和低副作用的抗高血压药已成为人们关注的热点[3]。青蒿素是否有抗高血压作用,目前尚不清楚。本实…     

钙敏感受体在大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用

目的观察钙敏感受体在大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用及其机制。方法30只Wistar大鼠随机分为3组(每组10只):假手术组(sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)和钙敏感受体激动剂组(Gdcl3组),采用冠状动脉结扎和松结的方法,制备大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤模型。分别测定血清一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,光镜及透射电镜下观察心肌结构病理变化。结果I/R组血清LDH、MDA水平明显高于sham组(P<0.01),NO、SOD低于sham组(P<0..01);Gdcl3组血清LDH、MDA水平明显高于I/R组(P<0.01),而NO、SOD低于I/R组(P<0.01)。光镜及透射电镜下可观察到Gdcl3组心肌结构破坏,心肌细胞呈灶状或片状坏死;线粒体损伤,核皱缩,核染色质边集,其病理学改变程度较I/R组严重。结论钙敏感受体激活可使氧自由基产生增加,减少NO含量,降低SOD活性,加重心肌缺血/再灌注损伤。     

丹参对ox-LDL孵育的乳鼠心肌细胞缺氧-复氧所致细胞凋亡的保护作用

目的:观察丹参对ox-LDL孵育的乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的保护作用,并探讨其可能机制。方法:采用原代培养乳鼠的心肌细胞,ox-LDL孵育24小时,再采用95%N2+5%CO2模拟缺氧培养3小时后,更换为正常DMEM培养液培养9小时的方法建立心肌细胞缺氧/复氧模型。乳鼠心肌细胞随机分为6组:正常对照组(Control group);ox-LDL组(ox-LDL group);ox-LDL缺氧-复氧组(ox-LDL+A/R group);丹参保护组,加丹参低剂量(SM L/ox-LDL+A/R group)、中剂量(SM M/ox-LDL+A/Rgroup)、高剂量(SM H/ox-LDL+A/R group)组。利用MTT比色法检测心肌细胞存活率,Hoechst33342染色检测凋亡率,采用Western blot分别观察Cytc、Bax、bcl-2、caspase-3的蛋白表达。结果:通过MTT比色法检测,加入丹参高剂量组对细胞保护最有效。与Control组比较,ox-LDL组:细胞核有固缩和断裂,Cytc、Bax和caspase-3的表达升高,细胞存活率和bcl-2表达降低;与ox-LDL组比较,ox-...     

白藜芦醇抗心律失常和抗心肌缺血作用研究

白藜芦醇（Resveratrol，RVL）为多酚类物质，是广泛存在于水果、中药和葡萄酒中的一种植物抗毒素。随着对RVL研究的深入，人们发现它具有多种药理学活性，其中RVL的心血管保护作用逐渐成为研究热点，但其有关抗心律失常及抗心肌缺血作用鲜见报道。本文就RVL对实验性心律失常和急性心肌缺血的保护作用进行研究。     

多胺在异丙肾上腺素所致大鼠心肌肥厚中的作用及意义

目的： 研究多胺、鸟氨酸脱羧酶(ODC)及精脒/精胺乙酰基转移酶（SSAT）在异丙肾上腺素所致大鼠心肌肥厚中的作用及机制。方法: 异丙肾上腺素（ISO）皮下注射复制大鼠心肌肥厚模型,应用反向高效液相色谱（RP-HPLC）、RT-PCR和Western blotting结合图像分析系统,分别检测ISO作用不同时点大鼠心肌组织多胺含量、ODC和SSAT mRNA和蛋白的表达。结果: 与对照组比较,心脏重量参数在ISO注射后7 d时显著增加,ISO注射后1 d时腐胺含量增加（P<0.05）,5 d、7 d时显著增加（P<0.01）;精脒含量在ISO注射后3 d时开始增加,ISO注射后7 d时增加显著（P<0.01）,精胺含量略有增多（P<0.05）,总多胺池显著增加。心肌组织ODC和SSAT的 mRNA表达在ISO注射后1 d时升高(P<0.05或P<0.01）,并持续在较高水平。心肌组织ODC和SSAT的蛋白表达分别在ISO注射后1 d和ISO注射后5 d时升高,ISO注射后7 d时显著升高（P<0.01）。结论: 大鼠心肌组织多胺含量增加和ODC、SSAT的表达增强可能参与ISO所致心肌肥厚的病理过程。     

疏血通联合低分子肝素钙治疗频发短暂性脑缺血发作的临床观察

目的 观察疏血通注射液联合低分子肝素钙治疗频发短暂性脑缺血发作(TIA)的临床疗效,并初步探讨其血液流变学基础.方法 将120例TIA患者随机分成4组(每组30例,10～14天为1疗程):①对照组(常规阿斯匹林治疗);②舒血宁组(每日静脉滴注舒血宁注射液20mL);③疏血通组(每日静脉滴注疏血通注射液6 mL);④联合治疗组(疏血通注射液6mL静脉滴注,同时低分子肝素钙5000单位皮下注射).结果 联合治疗组TIA症状快控率(24h内)优于其它3组,且血液流变学及纤维蛋白原指标有明显改善,而对照组则无明显变化.结论 低分子肝素与疏血通联合治疗频发短暂性脑缺血发作是安全有效的,其机制与改善血液流变学指标有关.     

脂微球前列腺素E1对大鼠离体心肌缺血／再灌注损伤的保护作用和机制

目的观察脂微球前列腺素E1（凯时）对大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法Wistar大鼠24只,随机分成正常对照组、缺血/再灌注损伤组和凯时保护组。利用Langendorff灌流装置复制大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型。观察指标：冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH）活性,心肌匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量,心肌超微结构,HE染色,TUNEL染色及免疫组化等。结果凯时（10μg/L）可使心肌缺血/再灌注损伤所致的LDH释放显著降低,心肌超微结构损伤减轻,SOD活性升高,MDA含量降低;同时使细胞凋亡减少,Bcl-2表达增加,Bax和Caspase-3表达减少。结论凯时能显著减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤,其机制可能与凯时具有抗氧化、清除自由基和抗细胞凋亡的作用有关。