产质粒介导AmpC酶和ESBLs细菌的耐药性及β-内酰胺酶基因型研究

目的　了解我院同时产质粒介导AmpC酶和超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌的耐药性及其 β 内酰胺酶的基因型特征。方法　 110株临床分离无重复肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌耐药株 ,采用酶提取物三维实验检测AmpC酶 ,美国临床实验室标准委员会 (NCCLS)表型筛选和确认实验检测ESBLs ;琼脂二倍稀释法测定抗生素对同时产AmpC酶和ESBLs菌株的最低抑菌浓度 (MICs) ;等电聚焦实验测定 β 内酰胺酶等电点 (pIs) ;质粒接合实验定位耐药基因 ;PCR通用引物扩增AmpC酶与ESBLs基因及其序列测定以确定其基因亚型。结果　同时产AmpC酶和ESBLs菌株在肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌中的检出率分别为 7.7% (5 6 5 )、8.9% (4 4 5 )。该类产酶菌株产 2～ 3种pI5 .4～ 9.0 β 内酰胺酶 ,对第三代头孢菌素、氨曲南、头孢美唑和含酶抑制剂复合制剂的敏感性极低 ,但对亚胺培南均敏感。 9株质粒中均检出AmpC酶基因DHA 1亚型 ,其中 1株同时检出ACT 1亚型 ;ESBLs基因亚型分别为CTX M 14、CTX M 3、CTX M 9,各有 4、3、2株 ;有 3株还携带广谱酶TEM 1基因。结论　我院存在同时产质粒介导DHA 1、ACT 1型AmpC酶和CTX M型ESBLs肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌流行株 ,药敏检测结果显示对大多数新型广谱 β 内酰胺类抗生     

江西省结核分枝杆菌耐二线抗结核药的分子学特征

目的 初步明确江西省耐二线抗结核药相关基因突变的特征,评价等位基因特异性多重PCR（multiplex allele-specific polymerase chain reaction,MAS-PCR）检测二线抗结核药耐药性的可行性。 方法 采用DNA测序方法和MAS-PCR技术,对江西省52株耐二线抗结核药的结核分枝杆菌进行耐药相关基因突变位点检测。 结果DNA测序分析：39株耐氧氟沙星（Ofx）菌株中,32株存在gyrA基因错义突变,2株发生gyrB基因错义突变。29株耐卡那霉素（Km）或卷曲霉素（Cm）菌株中,22株为rrs1401位点A→G突变。52株耐二线抗结核药的结核分枝杆菌,40株为北京基因型（76.92%,40/52）,其中17株北京基因型菌株发生gyrA-GAC94GGC突变（42.50%,17/40）,19株北京基因型菌株发生rrs-A1401G突变（47.50%,19/40）。北京基因型与基因突变类型gyrA-GAC94GGC和rrs-A1401G无明显相关性（χ²=1.16、1.92,P值均＞0.05）。MAS-PCR检测Ofx耐药株的敏感度为61.54%（24/39）,检测Km或Cm耐药株的敏感度为79.31%（23/29）。 结论 gyrA基因94位密码子突变是江西省结核分枝杆菌Ofx耐药的主要机制; rrs-A1401G突变则是Km或Cm耐药的主要原因。MAS-PCR方法对于快速检测二线抗结核药的耐药性有一定的临床应用价值。     

白念珠菌基因多态性与耐药性关系

 【目的】探讨耐氟康唑白念珠菌基因多态性与其耐药性是否相关。【方法】收集48株敏感白念珠菌和10株耐氟康唑白念珠菌,其中包括2株体外诱导的耐氟康唑白念珠菌。选择1个随机引物(引物1251),采用任意引物PCR方法基因分型,将电泳图谱扫描入计算机后采用Labwork4.0软件转化为数值图表,利用SPSS11.5进行聚类分析。【结果】引物1251的PCR指纹图带型稳定,多态性丰富,可以作为分型引物。聚类分析结果提示8株临床耐药菌的PCR指纹图相似系数为71.7%,而其中7株的耐药菌相似系数高达86.7%,远高于58株菌的平均相似系数(47.3%)。2株体外诱导的耐药菌诱导前后基因型未发生变化。【结论】基因分型的结果未提示耐氟康唑白念珠菌存在一定的特殊电泳条带,但提示了特定的PCR指纹图可能与耐药性有一定相关性。     

噬菌体生物扩增法与涂片法在快速检测结核分支杆菌的应用比较

目的研究噬菌体生物扩增法与涂片法对结核诊断价值的比较。方法对52份临床诊断为结核(包括肺结核、结核性胸膜炎、结核性腹膜炎、结核性脑膜炎)的患者的痰标本、胸腔积液、支气管肺泡灌洗液、腹水、脑脊液等标本以及COPD急性发作、肺癌、急性支气管炎患者的痰液16例同时进行噬菌体生物扩增法与涂片法检测。结果52份结核标本,有29份标本通过噬菌体生物扩增法检测结果为阳性,阳性率56%(29/52),显著高于涂片法染色的阳性率23%(12/52),(P<0.05),其中12例涂片法阳性的标本均为痰标本,而胸腔积液、支气管肺泡灌洗液、腹水、脑脊液等标本涂片法检测则均为阴性。噬菌体生物扩增法法对涂片阴性的标本的检出率高达48%(19/40)。16例非结核患者的痰液无一例为阳性。结论噬菌体生物扩增法与传统的涂片法相比,具有较高的特异性和敏感性,是一种值得推广和很有前景的结核分支杆菌快速快速检测方法。     

绿脓杆菌外膜蛋白D2(OprD2)与耐药关系的研究

该文采用外膜蛋白SDS-PAGE、凝胶分光光度扫描分析方法,研究该室临床分离的绿脓杆菌OprD2与耐药的关系.结果表明绿脓杆菌泰能耐药株均有不同程度OprD2的减少,耐药组OprD2的相对含量明显低于敏感组,提示OprD2的减少甚至缺失是绿脓杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因.     

一种国产嗜肺军团菌抗原检测试剂盒的初步评价

目的:初步评价一种国产嗜肺军团茵抗原检测试剂盒.方法:采用细菌模拟标本,检测试剂盒的理论敏感性及特异性.结果:应用嗜肺军团茵抗原检测试剂可特异性地检测出嗜肺军团茵抗原,最低检出量为3×108 cfu/mL,与其他细茵抗原不发生交叉反应.结论:嗜肺军团茵抗原检测试剂具有简便快速的特点,有一定的特异性和敏感性.     

产质粒介导AmpC酶细菌的耐药性及分子流行病学研究

目的：了解产质粒介导AmpCβ内酰胺酶革兰阴性菌耐药性及分子流行病学情况。方法：收集40株产质粒介导AmpC酶革兰阴性菌，Kirby-Bauer纸片扩散法检测耐药性；肠杆菌科基因组内重复-致序列-聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行克隆株的DNA分型，确定同源性。结果：40株产质粒AmpC酶菌株对第一代头孢菌素类、头霉素类明显耐药，对第三代头孢菌素、单环菌素、氟喹诺酮类和氨基糖苷类均有不同程度的耐药，对第四代头孢菌素及碳青霉烯类均较敏感。大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌各17株，ERIC-PCR图谱可以分为28个不同克隆。结论：40株产质粒介导AmpC酶的革兰阴性菌呈多克隆模式，第四代头孢菌素和碳青霉烯类药物可作为治疗产质粒介导的AmpC酶细菌感染的有效药物。     

白细胞介素2及12对小鼠肺部曲霉菌感染治疗作用的实验研究

目的　白细胞介素 2 (IL 2 )、白细胞介素 12 (IL 12 )和二性霉素B对小鼠肺组织曲霉菌感染治疗作用的研究。方法　 ( 1)建立小鼠肺部曲霉菌感染模型 ;( 2 )使用IL 2、IL 12和二性霉素B对上述模型小鼠随机分组治疗 ;( 3)观察各组小鼠的存活数及肺组织菌落计数。结果　IL 2、IL 12和二性霉素B三者联用组较IL 2 IL 12组和单用二性霉素B组能明显减少小鼠肺组织菌落数 ,明显提高小鼠的存活率。结论　抗真菌感染的治疗必须是免疫调节治疗与化学药物治疗相结合。     

用浓度梯度法比较六种β—内酰胺类药物抗菌活性

用浓度梯度法检测六种β内酰胺类抗菌药物对１０种１００株临床分离菌株的最低抑菌浓度。比较头孢吡肟,头孢他啶,头孢曲松,亚胺硫霉素,头孢哌酮／舒巴坦,哌位西林对主要致病菌的体外抗菌活性。结果显示亚胺硫霉素具有最强的抗菌活性,头孢吡肟与头孢哌酮／舒巴坦也有很强抗菌活性。