腺病毒介导hHO-1基因体外转染骨髓间充质干细胞

目的 以腺病毒（adenovirus,Adv）为载体将人血红素加氧酶(human hemo-oxygenase,hHO)-1基因转染至骨髓间充质干细胞（MSC）中,为干细胞移植联合hHO-1基因治疗心血管疾病奠定实验基础。方法 以密度梯度离心结合贴壁筛选法分离培养骨髓MSC。将携带有hHO-1基因与绿色荧光蛋白（GFP）报告基因的腺病毒体外扩增与鉴定后,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)转染MSC。在荧光显微镜下观察转染后GFP的表达,以反转录(RT)-聚合酶链式反应(PCR)法检测目的基因hHO-1 mRNA在MSC中的表达,4’6’-二乙酰基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察hHO-1基因转染对MSC的影响。结果 将Adv-hHO-1体外扩增、纯化后,经PCR鉴定可得到555 bp的目的条带。转染后24 h,MSC中即可见GFP的表达,荧光强度随MOI的增加而增强。RT-PCR法检测显示,不同MOI的转染组均有hHO-1 mRNA表达,随MOI的增加其表达强度也逐渐增强（P<0.05）。DAPI染色显示,hHO-1基因转染后,细胞的生长及形态无明显变化。结论 以Adv为载体可成功地将hHO-1基因转染至骨髓MSC中,转染效率随转染滴度的增加而增加,转染后对细胞的生物学活性无明显影响。     

血红素氧合酶1提高骨髓间充质干细胞在梗死后心脏的存活

背景：移植骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）修复梗死后心功能受到围移植期移植细胞大量死亡的限制。因此寻找一种保护因子对移植细胞提供保护至关重要。目的：观察血红素氧合酶1（heme oxygenase,HO-1）对BMSCs在梗死后心脏生存的影响。方法：体外分离扩增培养大鼠BMSCs,Adv-hHO-1、Adv-GFP分别转染,移植前DAPI标记。结扎左前降支1h后,分别将DAPI-hHO-1-BMSCs、DAPI-GFP-BMSCs多点注射到大鼠心脏梗死区周边,对照组注射等量PBS。结果与结论：Adv-hHO-1转染BMSCs后获稳定表达。仅hHO-1-BMSCs组稳定表达hHO-1 mRNA;hHO-1-BMSCs组血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子表达均高于其他两组（P〈0.01）;存活BMSCs数量在第3,7天均明显高于GFP-BMSCs组（P〈0.05）;大鼠心功能各项参数明显优于其他两组（P〈0.01）。移植4周后,HO-1-BMSCs组梗死区周边毛细血管密度明显高于GFP-BMSCs组和对照组（P〈0.01）,且胶原蛋白沉积减少,心室壁变厚,梗死面积较其他两组明显缩小（P〈0.01）。提示HO-1提高移植到梗死心脏BMSCs的存活,HO-1协同BMSCs抑制心室重构,改善心功能。     

儿童糖尿病的护理

儿童糖尿病是指在15岁之前发生的糖尿病,又称少年糖尿病,一般为1型糖尿病.它是在遗传易感基因的基础上,在外界环境因素的作用下,引起自身免疫过程,导致B细胞的损伤和破坏,最终致胰岛B细胞功能衰竭而起病.据不完全调查,发病率约为1/2[1].儿童糖尿病有两个高峰年龄组,5～6岁组和11～13岁组.因年龄太小,认知性差,饮食控制较困难,活动量较大等特点,必须使用胰岛素治疗.如能及早防治,严格和持久的控制高血糖,加强护理就可取得较为满意的效果.     

葡萄糖氧化酶电极的研制及其应用的初步试验

本文介绍了以胶原为载体用包埋交联法制备葡萄糖氧化酶膜的方法和条件。在选用的酶量范围内,每10g胶原与100mg葡萄糖氧化酶包埋制得的酶膜响应值最大,用0.1％戊二醛交联30秒制备的酶膜稳定性较好,响应值较大。与溶氧电极组装成的电极其测定的最适温度为37℃,最适pH为5～7。80mg/10g胶原的酶膜响应时间为10～30秒,平衡时间为3～7分。每更换一次缓冲液,进量为0.1ml时,可连续进样十余次,重演性好,宜用于连续测定。测定红霉素种子罐培养液和60小时前的发酵液糖含量均比用Fehling法的略低,但规律性及波动情况大致相同。我们初步认为这种电极有可能被用于测定红霉素发酵液的糖含量。这种用胶原酶膜与溶氧电极组装的葡萄糖电极以测定氧消耗的电流型电极尚未见报道。     

体外诱导鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的实验研究

目的:探讨小鼠胚胎干细胞(ESCs)在转化生长因子β1(TGFβ1)联合内脏内胚层END2细胞共培养诱导条件下分化为心肌细胞的特征。方法:小鼠胚胎干细胞在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层上增殖培养,先将ESCs悬浮培养形成23d的拟胚体(EBs),再将23dEBs种植到含有TGFβ1的24孔板中进行诱导,以及种植到铺有END2细胞饲养层的24孔板中进行诱导,培养液中同时加入TGFβ1。免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌动蛋白(αActin)及肌钙蛋白T(TnT)的表达,透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构。流式细胞仪检测EBs集落心肌细胞的平均分化率。结果:TGFβ1诱导组和TGFβ1联合内脏内胚层END2细胞共培养诱导组分别有43%,91%(P<0.05)的拟胚体出现自发节律性收缩,均表达心肌细胞特异性蛋白αActin和TnT,以及观察到心肌样超微结构,但在共培养的条件下,自发节律性收缩区域较大,且细胞形态较单一。两诱导组EBs集落心肌细胞平均分化率分别是35%,74%(P<0.05)。结论:TGFβ1联合内脏内胚层END2细胞共培养对小鼠ESCs向心肌细胞定向分化有协同作用,具有较高的诱导分化率。     

肿瘤通过抑制树突状细胞功能逃避免疫监视的研究进展

树突状细胞(DC)在T细胞介导的免疫反应中起核心作用,可在体内外诱导强烈的抗肿瘤免疫反应.DC作为恶性肿瘤免疫治疗因子被广泛的研究.如今,开发了多种基于DC的抗肿瘤免疫治疗.然而肿瘤也会影响宿主的造血功能以及导致大量未成熟和免疫耐受的DC产生,这些直接抑制免疫反应.了解肿瘤相关DC的免疫抑制作用机制,可提高对肿瘤免疫逃逸的认识.     

肺部感染程度对无创通气治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期并呼吸衰竭的疗效影响

目的探讨分析慢性阻塞性肺疾病急性加重期呼吸衰竭患者肺部感染程度对无创通气治疗的影响。方法选取我院2012年1月-2014年12月期间接收治疗的20例慢性阻塞性肺疾病急性加重期呼吸衰竭患者作为研究对象,收集初次使用无创通气进行治疗有效,且短期内再次治疗失败患者上机前的白细胞计数、体温、气管分泌物、气管吸取物、血气分析等数据,计算出上机前患者肺部感染评分,将治疗前后的评分进行对比,同时将肺部感染评分和上机后Pa CO2、p H改善程度进行分析。将上机后患者无效和有效时的耐受性和无创通气并发症发生状况进行比较。结果比较两组患者无创通气无效和有效的肺部评分,无效时明显大于有效时。肺部评分7分时,无创通气良好;肺部评分7分时,无创通气无效。肺部评分=7分时,有效10例,无效1例。比较患者无效和有效在上机前的PO2、PCO2、PH无明显差异(P0.05)。上机后,无效和有效的中断次数及不适比例均有所差异(P0.05),但并发症比较差异无统计学意义(P0.05)。结论肺部感染程度采用肺部评分进行评定,对预测无创通气的疗效具有很大疗效,肺部评分=7分时,无创通气可取得一定疗效。     

转化生长因子β在心肌纤维化中的表达及作用

心肌纤维化伴随在多种心脏疾病的生理病理过程中,并伴有心肌重构、心律失常、心力衰竭等不良结局。哺乳动物心肌细胞在出生后停止分裂分化,由急、慢性缺血引起的心肌细胞的大量死亡会引起修复性纤维化。另外,许多生理性刺激也会引起心肌间质和血管周围发生纤维化改变。转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)是特征性最强的纤维化生长因子,在激活纤维化反应的过程中起着独特作用,可调控细胞内信号级联反应、细胞外基质稳态以促进心肌纤维化。本文主要综述了TGF-β在心肌纤维化发生、发展过程中的表达及其对纤维化心脏的影响机制。     

青年急性心肌梗死患者临床特点及冠状动脉病变特征分析

目的 分析青年急性心肌梗死（AMI）患者的临床特点及冠状动脉病变特征.方法 从2010年1月至2014年7月在武汉大学人民医院心内科住院诊断为AMI的患者中,选取年龄＜40岁且有完整冠状动脉造影资料的AMI患者64例作为青年组,选取同期年龄＞60岁且有完整冠状动脉造影资料的AMI患者236例作为老年组.统计患者基本临床资料及入院24 h内实验室检查结果、超声心动图及心电图检查,并记录患者住院期间心律失常、心力衰竭、心源性休克及心源性猝死等主要不良反应发生率.分析2组患者临床资料、危险因素（吸烟史、饮酒史、高胆固醇血症、高血压、糖尿病、家族史）以及冠状动脉造影结果.结果 ①青年组中男性、吸烟史、饮酒史及冠心病家族史患者比例高于老年组[87.5％ （56/64）比71.2％ （168/236）、65.6％ （42/64）比36.0％（85/236）、39.1％ （25/64）比25.8％（61/236）、35.9％（23/64）比11.0％（26/236）];高血压病史、糖尿病病史及肥胖比例低于老年组[17.2％ （11/64）比34.8％ （82/236）、12.5％（8/64）比27.1％（64/236）、14.1％ （9/64）比35.2％（83/236）]（P＜0.05）;②青年组总胆固醇和三酰甘油水平高于老年组[（5.4 ± 1.8） mmol/L比（4.4 ±2.7） mmol/L、（2.6±1.7） mmol/L比（1.4±1.3） mmol/L];青年组中1种危险因素者比例高于老年组[32.8％ （21/64）比19.5％（46/236）];无危险因素者和4种及以上危险因素者低于老年组[6.2％（4/64）比11.9％（28/236）、4.7％ （3/64）比9.3％（22/236）]（P＜0.05）;④青年组冠状动脉造影正常和单支血管病变所占比例高于老年组[9.4％ （6/64）比4.2％（10/236）、70.3％ （45/64）比40.7％（96/236）];罪犯血管位于左回旋支和右冠状动脉所占比例低于老年组[15.6％ （10/64）比29.7％（70/236）、31.2％（20/64）比40.2％（95/236）];冠状动脉狭窄程度积分低于老年组[（9±5     

恶性肿瘤女性患者生育力保存的伦理思考*

生育力保存技术为年轻的恶性肿瘤患者提供了有效的生育资源保护方法,让患者能够在生育力受损后生育后代。但这项技术的发展引发了诸多社会和伦理争议。从伦理学角度出发,探讨年轻女性患者生育力保存实施中所面临的伦理问题,包括是否有必要进行生育力保存,所保存的生育力资源归属权的问题以及其实施过程中涉及的卫生资源公平公正分配的问题,并从伦理学角度对这些问题和争议进行辨析。同时讨论在提供生育力保存服务的过程中,应当如何遵循有利不伤害、知情同意、谨慎应用以及伦理监管等各项伦理原则,以期消除社会大众对生育力保存技术的疑虑和误解,促进生育力保存技术在临床上进一步开展和应用。