柯萨奇B3病毒感染致小鼠气道上皮细胞粘附分子和MHCⅡ类分子高表达

目的：观察小鼠雾化吸入柯萨奇B3病毒（CVB3）后气道上皮细胞粘附分子ICAM-1、VCAM-1及MHCⅡ类分子表达的变化,初步探讨CVB3感染对机体免疫系统的影响及其在气道慢性炎症和哮喘发病机制中的作用。方法：将C57BL/6N小鼠随机分为4组：生理盐水组（NS）、生理盐水＋卵蛋白组（NS＋O）、病毒感染组（V）、病毒感染＋卵蛋白组（V＋O）。采用ELISA法测定血清CVB3抗体;取肺组织作常规病理制片,HE染色;甲苯胺蓝改良染色法镜下显示肥大细胞。提取气道上皮细胞采用流式细胞仪分析ICAM-1、VCAM-1及MHCⅡ类分子的表达。结果：病毒组小鼠血清中CVB3-IgM的OD值明显高于非病毒组（P〈0.01）。病理检查肺组织可见：病毒组肺间质有较多炎细胞浸润,尤其肥大细胞浸润明显。V组、V＋O组气道上皮细胞ICAM-1、VCAM-1和MHCⅡ类分子的表达明显增高,与NS组、NS＋O组相比差异非常显著（P〈0.01）;V＋O组增高更加显著,与V组比较也有显著差异（P〈0.01）;并可持续至少1个月。结论：小鼠雾化吸入CVB3后可致气道慢性炎症及粘附分子ICAM-1、VCAM-1和MHCⅡ类分子显著的高表达;在CVB3所致的气道炎症期间再接触过敏原两者对炎症免疫反应有协同作用。CVB感染后的炎症免疫反应在哮喘发病机制中起着非常关键的作用。     

类风湿性关节炎患者淋巴细胞CD45RO、CD45RA的表达及临床意义

目的检测类风湿性关节炎(RA)患者CD4 、CD8 细胞表达CD45RO和CD45RA亚群的变化并探讨其临床意义。方法采用双色流式细胞术(FCM)检测28名正常人外周血、43例RA患者外周血和15例关节液的CD4 、CD8 细胞CD45RO、CD45RA的表达。结果RA患者关节液CD4 、CD8 细胞表达CD45RO的百分比显著高于RA患者外周血和正常人外周血(P<0.01);RA患者外周血CD4 、CD8 细胞表达CD45RO的百分比显著高于正常人外周血(P<0.01)。活动期RA患者血液CD4 、CD8 细胞表达CD45RO的百分比显著高于非活动期RA患者(P<0.05,P<0.01)。结论CD45RO 淋巴细胞是参与RA病理过程的主要淋巴细胞。     

遗传性球形红细胞增多症并存β地中海贫血双重溶血性贫血的鉴别诊断

目的:对3例溶血性贫血疑难病例进行鉴别诊断。方法:柱层析法定量测定血红蛋白A2(HbA2),国际血液学标准化委员会(ISCH)推荐速率法测定红细胞葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)和丙酮酸激酶(PK),梯度凝胶电泳分析红细胞膜血影蛋白,其他溶血试验按常规方法操作。同期进行家系调查。结果:3例患者外周血并存浅染靶形红细胞和浓染球形红细胞,红细胞渗透脆性试验(OFT)初始溶血Nacl浓度和酸化甘油溶血试验(AGLT50)均为阴性,3例患者的HbA2和2例患者的抗碱血红蛋白(HbF)增高。3例患者的双亲一方为遗传性球形红细胞增多症(HS)指标异常,另一方为β地中海贫血(βTh)。结论:3例患者均并存HS和βTh。HS和βTh并存时会明显干扰溶血试验特别是红细胞膜病的实验指标,这种情况必须特别注意血象提示和形态学提示,并进行溶血系统分析和家系调查。     

尖锐湿疣患者病损部位高危型人乳头瘤病毒的检测及其临床意义

目的了解尖锐湿疣(CA)患者高危型(16、18型)人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况及其临床意义。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对41例CA患者(扁平形16例,乳头形/菜花状25例)病损部位进行HPV16、18型DNA检测,又根据其发病次数分为初发和复发2组,分别有29例和12例,观察高危型HPV的感染率、病毒DNA含量及各组间的差异。结果CA患者高危型HPV的感染率为43.90%,与对照组(3.85%)比较差异有显著性(P<0.01)。扁平形和乳头形/菜花状CA患者高危型HPV的阳性率分别为18.75%和60.00%,2组比较也有明显差异(P<0.01);2组间病毒DNA含量比较差异无显著性(P>0.05)。初发和复发者HPV16、18型感染率及其DNA含量检测结果差异均无显著性(P>0.05)。25例乳头形/菜花状CA患者的疣体组织阳性率为36%,其表面分泌物的阳性率为52%。结论CA患者高危型HPV的感染率显著高于普通人群。乳头形/菜花状CA中高危型HPV感染率较扁平形明显升高。CA的复发与否可能与高危型HPV的感染无必然联系。同时检测疣体组织和分泌物的高危型HPV可提高检出率。     

表达EGFP的质粒和目的基因共转染用于检测目的基因对细胞周期的影响

在基因功能研究过程中，常常使用的一种方法就是将目的基因转到靶细胞内进行瞬时表达(transient expression)，以流式细胞仪检测细胞周期的变化，观察转基因对细胞增殖的影响。由于各种转基因方法的不同，转基因的效率也不同，往往是仅有一部分细胞可以表达目的基因，没有转基因的细胞将影响检测的     

儿童呼吸道柯萨奇B组病毒感染94例

对161例住院的呼吸道感染患儿同时检测CVB－Ag和CVB－IgM，结果发现阳性者94例，其中CVB－Ag阳性率30.43％（49/161），CVB-IgM阳性率45．96％（74/161），29例两者均阳性。3组平均发病天数分别为4．2±2.5、15.7±8．2和8.1±3．2，前组分别与后2组相比有显著差异（P＜0.01和P＜0．05）。结果表明，CVB是儿童呼吸道感染的常见病原体；将CVB－Ag和CVB－IgM联合检测，可提高CVB感染的检出率。     

新生鼠呼吸道感染CVB3致气道炎症的病理学观察

目的：观察病毒感染对气道炎症、肺炎形态学的影响以及持续的气道反应性增高,探讨病毒感染与呼喘的关系。方法：建立新生儿大鼠病毒感染模型,出生5d新生鼠超声雾化吸入柯萨奇病毒B3（CVB3）,接种后10d取血查CVB3－IgM;接种后10d,30d分别观察湿肺质量与鼠体质量比值（LW／BW）、气道肺病理学改变。结果：病毒组新生鼠血清中CVB3－IgM的D值均在对照组-/x 2s以上接种后10dLW/BW比值病毒组明显高于对照组（P＜0．01）。病理学检查：急性期炎症改变显;接种后30d仍有持续的形态学及细胞学改变。结论：新生鼠吸入CVB3模型成立,并有持续的气道炎症及肺形态学改变。     

尖锐湿疣患者病损部位高危型人乳头瘤病毒的检测及其临床意义

目的 了解尖锐湿疣（CA）患者高危型（16、18型）人乳头瘤病毒（HPV）的感染情况及其临床意义。方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）对41例CA患者（扁平形16例，乳头形／菜花状25例）病损部位进行HPV16、18型DNA检测，又根据其发病次数分为初发和复发2组，分别有29例和12例，观察高危型HPV的感染率、病毒DNA含量及各组间的差异。结果 CA患者高危型HPV的感染率为43．90％，与对照组（3．85％）比较差异有显著性（P〈0．01）。扁平形和乳头形／菜花状CA患者高危型HPV的阳性率分别为18．75％和60．00％，2组比较也有明显差异（P〈0．01）；2组间病毒DNA含量比较差异无显著性（P〉0．05）。初发和复发者HPV16、18型感染率及其DNA含量检测结果差异均无显著性（P〉0．05）。25例乳头形／菜花状CA患者的疣体组织阳性率为36％，其表面分泌物的阳性率为52％。结论 CA患者高危型HPV的感染率显著高于普通人群。乳头形／菜花状CA中高危型HPV感染率较扁平形明显升高。CA的复发与否可能与高危型HPV的感染无必然联系。同时检测疣体组织和分泌物的高危型HPV可提高检出率。     

FQ-PCR检测造血干细胞移植受者HCMV感染及与淋巴细胞免疫表型变化的关系

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测人巨细胞病毒（HCMV）DNA含量在异基因外周血造血干细胞移植（allo-PBSCT）受者HCMV激活感染中的诊断价值和淋巴细胞免疫表型变化与HCMV激活感染的关系。方法应用FQ-PCR和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测allo-PBSCT后受者HCMV DNA和抗HC-MV lgM抗体;用流式细胞仪测定淋巴细胞亚群。结果39例allo-PBSCT受者中19例检出HCMV DNA（〈30 d的有5例,2-3个月的13例,〉100 d的1例）。HCMV感染后血清HCMV、IgM阳性检出率非常低（4/19）,且出现时间较晚。移植后早期HCMV DNA阳性组与阴性组及健康组比较CD4^＋细胞、CD19^＋细胞及CD4/CD8比值显著下降,CD8^＋细胞和CD16＋56^＋细胞升高。HCMV阳性患者CD4/CD8比值在感染前后比较差异也有统计学意义。结论allo-PBSCT后HCMV活动性感染易发生于allo-PBSCT后早、中期,高峰期在移植后30-60 d;HC-MV活动性感染与细胞免疫功能紊乱互为因果,加重病情。     

双拷贝和x基因缺失HBV DNA质粒的构建及其细胞转染

目的:构建双拷贝和x基因缺失的HBV真核细胞复制表达质粒,并研究其在Hep3B肝癌细胞株中对HBV的复制表达效果.方法:利用含HBV DNA(adrⅠ)的质粒,酶切出HBV DNA片段,克隆入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3,构建双拷贝HBV DNA的真核表达质粒pcDNA3-ES-HBV2;将原始质粒通过插入人工合成DNA片段和基因重组破坏乙肝病毒x基因区,再克隆入pcDNA3,构建成pcDNA3-KN-F1F2真核表达质粒;用两质粒分别转染Hep3B肝癌细胞株,进行G418筛选的同时用荧光定量PCR法检测细胞培养上清液HBV DNA.结果:(1)成功构建了x基因缺失的HBV真核表达质粒pcDNA3-KN-F1F2及含双拷贝HBV DNA的真核表达质粒pcDNA3-ES-HBV2;(2)对两质粒成功进行细胞转染后,测得第3、6、14天细胞培养上清液中HBV DNA均高表达,两质粒之间差别不明显.结论:构建的质粒可在Hep3B细胞株中表达并引起HBV的复制及分泌;x基因的缺失不影响HBV在Hep3B细胞株中的表达复制.