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目的获得人FLcDNA膜外序列 ,构建表达人FL蛋白的重组体并实现其有效表达 ,更深入地探讨FL的生物学功能。方法提取胎肝细胞总RNA经RT PCR扩增目的cDNA片段 ,并将其克隆至pUC 18T载体中 ,测定其DNA序列 ,将该基因重组于GST融合蛋白表达载体pEGX 4T 1并进行表达。结果从胎肝细胞总RNA中扩增得到 5 46bp片段 ,序列测定结果与文献报道一致 ,表达的FL蛋白占菌体总蛋白的 10 %左右。结论人FL基因在大肠杆菌DH5α中获得了有效表达 ,为进一步的基础研究和临床应用奠定基础。 相似文献
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脐血造血干/祖细胞体外扩增实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨人脐血造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HSC/HPC)在适合临床移植条件下体外扩增以获得理想的造血干/祖细胞数量的最佳细胞因子组合及扩增时间,为脐血经体外扩增后成为高体重受者克服脐血移植细胞数量不足及缩短植入时间提供客观指标。方法:采集脐血4份,分离单个核细胞(mononuclear,MNC),免疫磁珠分选(MiniMACS)CD+34细胞,分别在细胞因子组合为A:SCF+FL+TPO、B:SCF+FL+TPO+IL蛳3及C:SCF+FL+TPO+G蛳CSF支持的无血清、无基质的液体培养基中扩增培养14 d,收集扩增前、扩增后7 d及14 d的细胞进行细胞表型分析、半固体集落培养及端粒酶活性分析。结果:在含细胞因子IL蛳3组扩增培养7 d及14 d,均获得了总有核细胞数(total nucleated cells,TNC)及集落形成细胞(colony蛳forming cell,CFC)最大的扩增倍数。扩增7 d,IL蛳3组的CD+34细胞扩增倍数为(10.11±7.21 )倍,较其他两组稍低,但无统计学意义;三组CD+33细胞、CD+41细胞、CD+71细胞也得到了较大程度的扩增,IL蛳3组高于其他两组;3组扩增后的细胞端粒酶活性均上调,7 d时A值达最高,IL蛳3组低于G蛳CSF组(P =0.008)。随着扩增时间的延长,扩增后的细胞端粒酶活性下降;CD+34细胞占TNC的比例也明显下降,部分定向祖细胞的比例也出现先升高后 相似文献
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腹水DNA含量测定对良、恶性腹水的鉴别诊断价值 总被引:8,自引:0,他引:8
目的 研究腹水DNA倍体对良、恶性腹水的鉴别诊断价值。方法 运用流式细胞术(FCM)检测腹水的DNA指数(DI),S期细胞百分比(SPF),细胞增殖指数(PI);采用化学发光分析法,检测腹水的CEA、CA19-9;腹水离心沉淀作细胞学检查。结果 恶性腹水组的DI、SPF、PI均高于良性腹水组(P<0.05);FCM法诊断恶性腹水的敏感性和特异性分别为91.7%和92.3%。细胞学、CEA、CA19-9诊断恶性腹水的敏感性分别为41.7%、41.7%、50%,特异性为100%、76.9%、84.6%,FCM联合CEA或CA19-9检测,敏感性为95.2%及95.8%,特异性为71%及78.1%。结论 腹水DNA含量测定诊断恶性腹水是一有效而敏感的方法,但存在一定的局限性;FCM联合CEA或CA19-9检测可提高诊断恶性腹水的敏感性。 相似文献
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目的 探讨脐血造血干/祖细胞的质和量以及淋巴细胞的表型特征。方法 收集34份脐血,利用6%的羟乙基淀粉沉淀红细胞,用甲基纤维素半固体培养法观察造血干/祖细胞的增殖能力,流式细胞仪检测CD34~ 细胞的数量和淋巴细胞的表型。结果 34份脐血的有核细胞回收率为79.2%±13.7%,平均有核细胞数为(12.2±4.3)×10~8;BFU-E、CFU-GM分别为(2.05±1.22)×10~6、(3.14±1.43)×10~6;CD34~ 细胞数平均为(1.98±1.30)×10~7;CD4~ T淋巴细胞表达CD45RA达90.97%±6.96%,CD8~ T淋巴细胞表达CD45RA达98.93%±0.36%,均显著高于正常成人外周血淋巴细胞(P<0.01)。结论 单份脐血的干/祖细胞可以满足成人移植的需要,且脐血中的淋巴细胞功能不成熟,同种异体的免疫反应弱,用于移植时移植物抗宿主病(GVHD)的发生率可能较低。 相似文献
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脐血淋巴细胞的免疫学特性研究 总被引:6,自引:0,他引:6
目的探讨脐血中T淋巴细胞的免疫功能,为脐血移植后移植物抗宿主病(GVHD)、移植物抗白血病反应(GVL)及免疫功能重建提供理论依据.方法用免疫荧光抗体直接标记淋巴细胞分化抗原,应用流式细胞仪进行检测;用微量全血法进行单细胞内的细胞因子检测从而判断脐血T淋巴细胞分泌细胞因子(IFN-γ、IL-4)的能力;用植物血凝素(PHA)作为刺激剂,观察T淋巴细胞CD25表达的动态变化.结果脐血T淋巴细胞CD4+/CD8+为1.93±0.91,较成人高(P<0.01),CD8+细胞百分比低于成人外周血(P<0.01),而且90%以上T淋巴细胞表达初始型CD45RA,显著高于成人外周血淋巴细胞(P<0.01);CD25、CD28、HLA-DR二者间差异无显著性.脐血CD4+、CD8+细胞分泌IFN-γ、IL-4的水平显著低于成人T淋巴细胞(P<0.01).脐血T淋巴细胞经PHA刺激可以活化,但活化的时相与成人略有不同.结论脐血淋巴细胞各细胞亚群的构成比例及发育成熟度与成人均不相同,脐血CD4+CD8+淋巴细胞中,以代表初始型、未接触抗原刺激的CD45RA+细胞为主,而且分泌细胞因子的能力低下,可能是脐血移植后急、慢GVHD发生率低、强度弱的原因之一.脐血淋巴细胞经适当刺激可以活化,有望用于过继性免疫治疗. 相似文献
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肠易激综合征T淋巴细胞亚群变化及其意义 总被引:9,自引:0,他引:9
目的 :通过检测肠易激综合征 (IBS)患者外周血T淋巴细胞亚群水平的变化 ,探讨IBS细胞免疫调节的变化及其可能的发病机制。方法 :采取双色直接免疫荧光标记和流式细胞仪检测方法 ,对 30例临床诊断为IBS的患者外周血T细胞亚群进行测定。结果 :30例IBS患者外周血CD3 、CD4 及CD8细胞数分别是 5 7 15± 9 17、36 0 1± 9 12及16 34± 5 2 1,其中CD3 及CD8均较正常对照组显著下降 (P <0 0 0 1) ,并且IBS患者CD4 /CD8比值是 2 6 7± 0 6 9,较正常对照组显著升高 (P <0 0 0 1)。结论 :IBS患者存在T淋巴细胞功能减弱和调节紊乱 ,细胞免疫异常可能参与IBS的发病机制。 相似文献
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目的分析医院门诊就诊病人人类乳头瘤病毒( HPV)高危、中危及低危基因型分布状况,并探究高危型人类乳头瘤病毒(HR?HPV)检测在宫颈病变筛查中的作用。方法选取 2017年 3月至 2018年 4月在中国科学院合肥肿瘤医院就诊的妇科门诊病人 1 814例,分别采用反向点杂交法技术检测及 HPV分型检测,分析高危、中危及低危共 28种基因型分布状况。另外选择同期进行 HR?HPV检测、宫颈薄层液基细胞学检查( TCT)和阴道镜及病理组织学检查病人 210例,以病理组织学结果为参考标准,研究 HR?HPV、TCT以及两者联合检测用于宫颈病变筛查效能。结果 1 814例门诊病人共 176例 HPV检测阳性,阳性率为 9.70%,其中高危型或高危型混合中、低危型阳性率为 6.94%(126/1814);中、低危型及混合感染阳性率 2.76%(50/1814)。基因型排名前十位分别是 HPV?16、58、52、53、66、56、18、31、33、42,其中 HPV?53、66和 42是中低危型。 HR?HPV联合 TCT诊断宫颈病变的灵敏度为 97.01%(65/67),阴性预测值为 96.78%(60/62),漏诊率为 2.99%。HR?HPV联合 TCT检测分别与 HR?HPV、TCT比较,均差异有统计学意义( χ2=5.220,5.372,P<0.05)。结论合肥地区 HPV基因亚型分布不同其他地区,有待于进一步确认。 HR?HPV联合 TCT检测优于单项检查,对早期发现宫颈病变的具有重要筛选意义,可值得在妇科门诊广泛应用推广。 相似文献
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目的 获得人FLcDNA膜外序列,以构建表达人FMS样酪氨激酶3受体配基(FL)蛋白的重组本,更深入地探讨FL的生物学功能。方法 通过设计和合成引物,提取胎肝细胞总RNA进行逆转录反应,经PCR扩增目的cDNA片段,并将其重组至PUC-18T载体中,测定其DNA序列。结果 从胎肝细胞总RNA中扩增得到546bp片段,序列测定证实该片段为包括25个氨基酸残基组成的信号肽的胞外序列。结论 FL胞外区cDNA已被成功地克隆。 相似文献