难治性特发性血小板减少性紫癜的免疫治疗

特发性血小板减少性紫癜(ITP)是一种自身免疫性疾病,一般用糖皮质激素治疗和(或)脾切除治疗,无效的病例为难治性ITP。研究者用大剂量静注丙种球蛋白、干扰素-α、单克隆抗体、环孢素A、骁悉、免疫吸附、血浆置换等免疫治疗及清除幽门螺杆菌治疗难治性ITP,取得了较好的疗效。     

骨髓增生性疾病止血功能的研究

本研究通过测定骨髓增生性疾病(mye loproliferative disease,MPD)患者血小板聚集功能、血浆血管性血友病因子相关抗原(vWF:Ag)及血管性血友病瑞斯托霉素辅因子(vWF:Rco)活性,观察MPD患者初期止血功能的变化,并与临床资料结合探讨实验室检测结果异常的意义。共观察MPD患者35例,正常对照20例。以瑞斯托霉素(ris)、二磷酸腺苷(ADP)、胶原(col)及肾上腺素(adr)作为血小板诱聚剂测定血小板聚集功能;采用酶联免疫吸附双抗体夹心法测定血浆vWF:Ag水平;测定瑞斯托霉素诱聚(RIPA)明显降低的6例患者血浆vWF:Rco活性。结果显示:35例患者血小板聚集功能与正常比较明显降低,4种诱聚剂诱导血小板最大聚集率与正常对照组比较均明显降低(P<0.001或P=0.002)。血小板聚集功能异常的患者高达71.4%(25/35);MPD患者血浆vWF:Ag水平较正常对照无明显差别(105.11±47.54%与111.88±55.24%,P>0.50);RIPA明显降低的6例MPD患者血浆vWF:Rco活性测定示1例原发性血小板增多症(essential thrombocytosis,ET)患者明显低于正常水平,其余患者均在正常范围内;患者血小板计数与血浆vWF:Ag之间无相关性(r=-0.180)。患者血小板计数与4种诱聚剂诱导下血小板最大聚集率之间均无明显相关性。结论:MPD患者血小板聚集功能不良发生率高;1例ET患者有RI-PA降低和vWF:Rco降低,但其血浆中是否存在vWF多聚物的缺乏,仍需进一步研究证实;研究观察期间未发现止血功能的异常与临床症状的相关性,但MPD患者中血小板功能缺陷的高发生率提示临床使用血小板抑制剂应持谨慎态度。     

吲哚美辛对CML细胞增殖抑制效应与STAT信号转导途径抑制相关

本研究的目的是观察吲哚美辛作用下慢性粒细胞白血病(CML)细胞增殖抑制过程中JAK2、STAT1和STAT5蛋白质表达水平的变化及细胞内分布，揭示吲哚美辛抑制CML细胞增殖的分子机制。采用MTT及台盼蓝拒染法检测吲哚美辛对CML细胞的增殖抑制作用，用Western blot分析CML细胞JAK2、STAT1和STAT5蛋白质表达，用间接免疫荧光技术观察STAT1和STAT5在吲哚美辛干预的CML细胞中的定位及变化，结果表明：400μmol／L浓度的吲哚美辛能明显抑制CML细胞增殖及STAT1、STAT5蛋白质表达，但对JAK2蛋白无影响；STAT1和STAT5主要分布于细胞胞浆中。结论：吲哚美辛可抑制CML细胞增殖，其机制可能与药物下调STAT1、STAT5蛋白质表达或与阻断细胞生长信号传导有关。     

脐带血血清培养体系扩增人骨髓间充质干细胞及其生物学特征

背景:骨髓内的间充质干细胞含量极少,因此课题立项设计之一即如何得到足够数量的骨髓间充质干细胞,并避免细胞培养过程中因动物血清造成的病原体污染和异种血清所致的过敏反应.目的:拟建立脐带血血清培养系统,以实现体外扩增人骨髓间充质干细胞的目标.设计、时间及地点:开放性实验,于2006-09/2007-10在中南大学湘雅二医院细胞生物实验室完成.材料:12份骨髓标本由中南大学湘雅二医院和湖南省湘潭市中心医院提供,6例采自正常供者,6例采自拟行造血干细胞移植的肿瘤患者.方法:无菌条件下抽取未抗凝的脐带血,静置待血凝块完全析出后吸取血清,离心弃沉淀,取各项病原微生物检测均呈阴性的脐带血血清用于细胞培养,临用前56℃水浴灭活30min.抽取正常供者和肿瘤患者的骨髓液100mL/份,采用Ficoll Paque分离液分离骨髓单个核细胞,加入含体积分数为0.1脐带血血清的DMEM/F12进行传代培养.传至第3代低温、液氮冻存,4～8周后予以解冻复苏,胰蛋白酶消化传代.取第4代骨髓间充质干细胞,锥虫蓝染色后,加入成骨诱导体系培养14d,碱性磷酸酶染色;加入脂肪诱导体系培养14d,油红O染色.主要观察指标:绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期及表面抗原的表达,骨髓间充质干细胞定向分化情况.结果:骨髓间充质干细胞扩增培养至第4代,接种后两三天为生长潜伏期,3～5d为对数增殖期,5～7d细胞生长缓慢进入平台期.采自正常供者和肿瘤患者的骨髓间充质干细胞,冻存前后扩增数量均基本相似(P0.05),细胞存活率均96%,CD29、CD73、CDl05阳性率均90%,CD31、CD34、CD45阳性率均5%,诱导2周后成骨细胞和脂肪细胞的阳性率均85%.结论:应用灭活脐带血清培养体系可成功扩增人骨髓间充质干细胞,且冻存前后骨髓间充质干细胞生物学特性没有明显改变.     

吲哚美辛抑制髓系白血病细胞增殖机制的研究

目的　探讨吲哚美辛 (IN)抗慢性髓系白血病 (CML)细胞增殖的作用机制。方法　用MTT法分析IN对慢性髓系白血病细胞系K5 6 2及CML患者骨髓细胞活力的影响 ;Westernblot分析CML细胞信号转导和转录活化蛋白 (STAT) 1、STAT5表达 ;免疫共沉淀 /Westernblot分析IN干预后CML细胞磷酸化的STAT1(p STAT1)和STAT5 (p STAT5 )表达 ,间接免疫荧光技术观察p STAT1和p STAT5在CML细胞中的分布及变化 ;Westernblot检测IN干预前后Bcl XL 及环氧化酶 2 (COX 2 )蛋白的表达。结果　IN可显著抑制CML细胞活力 ;4 0 0 μmol/LIN作用 72h ,CML细胞抑制率为 86 % ;0～ 4 0 0 μmol/LIN呈剂量反应性抑制p STAT1、p STAT5表达 ;p STAT主要呈散点状分布于胞核中 ;Bcl XL 蛋白呈IN浓度依赖性表达下调 ;K5 6 2细胞存在COX 2蛋白表达 ,IN可抑制COX 2蛋白表达。结论　IN可明显抑制CML细胞增殖 ;其机制可能与药物抑制STAT/Bcl XL 信号转导途径有关 ;K5 6 2细胞存在COX 2蛋白表达 ,IN的抗白血病细胞增殖效应可能是通过COX 2依赖性途径实现的。     

长沙地区RHD阴性献血者RHD基因多态性的研究

ＲＨ血型是继ＡＢＯ血型发现后临床意义最大的一个血型。主要的ＲＨ抗原有ＲＨＤ和ＲＨＣＥ抗原 ,与溶血性输血反应、新生儿溶血病和自身免疫性溶血性贫血有关。其中ＲＨＤ抗原因具有高度免疫原性而最具临床意义[1] 。ＲＨ血型系统抗原由ＲＨＤ基因和ＲＨＣＥ基因编码 ,起初基于白种人的研究认为 ,ＲＨＤ阳性者携带ＲＨＤ和ＲＨＣＥ基因 ,而ＲＨＤ阴性者只有ＲＨＣＥ基因而无ＲＨＤ基因。但后来的研究发现在非洲黑人、澳大利亚人、日本人中一些ＲＨＤ阴性者存在部分或完整的ＲＨＤ基因 ,即ＲＨＤ基因呈现多态性[2 ,3 ] 。本文对长沙地区 73…     

构建兔抗人凝血因子XIIIA亚单位多克隆抗体及特异性鉴定

背景:关于凝血因子XIII(FXIII)抑制物作用于FXIII的具体结合表位,目前尚无报道。目的:用免疫动物方法制备针对FXIIIA亚单位多克隆抗体,并对其特异性和活性进行鉴定。方法:用人工合成的FXIIIA亚单位多肽免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;应用Dotblot鉴定抗体特异性,并用抗体中和/尿素溶解实验检测多克隆抗体活性;Westernblot方法检测2例获得性FXIII缺乏症患者的血浆FXIII水平,再应用Dotblot分析这2例患者血浆FXIII抑制物作用的抗原表位。结果与结论:Dotblot证实兔血清中已产生抗FXIII抗体,此抗体不仅可特异性与人FXIII及转氨酶活性位点多肽结合,且在体外可抑制人FXIII的活性;用此抗体可检测出获得性FXIII缺乏症患者的血浆FXIII缺乏,分析出转氨酶活性位点是病例2血浆FXIII抑制物的作用位点。证实动物免疫法可成功制备兔抗人FXIIIA亚单位转氨酶活性位点的多克隆抗体,此抗体可用于人FXIII的检测和抗原表位分析。     

构建兔抗人凝血因子XIII A亚单位多克隆抗体及特异性鉴定

背景：关于凝血因子XIII(FXIII)抑制物作用于FXIII的具体结合表位,目前尚无报道。 目的：用免疫动物方法制备针对FXIII A亚单位多克隆抗体,并对其特异性和活性进行鉴定。 方法：用人工合成的FXIII A亚单位多肽免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;应用Dot blot鉴定抗体特异性,并用抗体中和/尿素溶解实验检测多克隆抗体活性;Western blot方法检测2例获得性FXIII缺乏症患者的血浆FXIII水平,再应用Dot blot分析这2例患者血浆FXIII抑制物作用的抗原表位。 结果与结论：Dot blot证实兔血清中已产生抗FXIII抗体,此抗体不仅可特异性与人FXIII及转氨酶活性位点多肽结合,且在体外可抑制人FXIII的活性;用此抗体可检测出获得性FXIII缺乏症患者的血浆FXIII缺乏,分析出转氨酶活性位点是病例2血浆FXIII抑制物的作用位点。证实动物免疫法可成功制备兔抗人FXIII A亚单位转氨酶活性位点的多克隆抗体,此抗体可用于人FXIII的检测和抗原表位分析。     

论家庭对患者自主决策的干涉

尊重个体在医疗决策中的自主权是现代医学诊疗的基本原则,但是在临床实践中,兼顾家庭和个人自主的结合更为适合我国长期以来所形成的家庭参与式的就医方式。准确把握家庭对病人自主的干涉范围是决策的关键。     

视网膜母细胞瘤相关蛋白46(RbAp46)的研究进展

视网膜母细胞瘤相关蛋白 4 6 (RbAp4 6 )是一种具有肿瘤抑制作用的核蛋白 ,体内分布广泛。RbAp4 6是WD重复家族成员 ,其分子结构中有 4个WD重复序列。RbAp4 6可作为生长抑制因子协同WT1基因作用 ,并可作为核染色质重构和脱乙酰酶 (NuRD)及组蛋白脱乙酰酶复合物mSin3的成分 ,调节它们的功能 ,引起转录抑制 ,使细胞增殖周期停滞在G2 /S期 ;在低血浆浓度情况下 ,RbAp4 6可明显诱导肿瘤细胞凋亡。