构建兔抗人凝血因子XIIIA亚单位多克隆抗体及特异性鉴定

背景：关于凝血因子XIII（FXIII）抑制物作用于FXIII的具体结合表位,目前尚无报道。目的：用免疫动物方法制备针对FXIIIA亚单位多克隆抗体,并对其特异性和活性进行鉴定。方法：用人工合成的FXIIIA亚单位多肽免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;应用Dotblot鉴定抗体特异性,并用抗体中和/尿素溶解实验检测多克隆抗体活性;Westernblot方法检测2例获得性FXIII缺乏症患者的血浆FXIII水平,再应用Dotblot分析这2例患者血浆FXIII抑制物作用的抗原表位。结果与结论：Dotblot证实兔血清中已产生抗FXIII抗体,此抗体不仅可特异性与人FXIII及转氨酶活性位点多肽结合,且在体外可抑制人FXIII的活性;用此抗体可检测出获得性FXIII缺乏症患者的血浆FXIII缺乏,分析出转氨酶活性位点是病例2血浆FXIII抑制物的作用位点。证实动物免疫法可成功制备兔抗人FXIIIA亚单位转氨酶活性位点的多克隆抗体,此抗体可用于人FXIII的检测和抗原表位分析。     

B细胞活化因子/增殖诱导配体在多发性骨髓瘤中的表达特点和临床意义

目的:研究B细胞活化因子(BAFF)和增殖诱导配体(APRIL)在多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞(BMMCs)中mRNA表达特点及血浆中蛋白表达水平,并分析血浆中BAFF和APRIL水平与MM临床肿瘤负荷指标的相关性,初步探讨BAFF和APRIL对MM的发生、发展及预后的意义.方法:收集25例MM患者及10例正常对照的骨髓标本,获取BMMCs,并同步收取血浆.采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)的方法检测BMMCs中BAFF和APRIL mRNA的表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测患者血浆中BAFF和A-PRIL的含量;使用相同方法,检测MM细胞株KM3中BAFF及APRIL的基因及蛋白表达特点.结果:①BAFF和APRIL基因和蛋白在MM组中表达升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);②BAFF和APRIL基因和蛋白在MM初治组及未缓解组中表达升高,与缓解组比较差异有统计学意义(P<0.05),初治组与未缓解组比较差异无统计学意义;③BAFF和APRIL蛋白水平与患者外周血中ALB呈负相关(P<0.05),与外周血中β2微球蛋白(β3-MG)、免疫球蛋白(Ig)浓度及骨髓中浆细胞百分比均呈正相关(均P<0.05),MM血浆中BAFF和APRIL浓度之间呈正相关(P<0.01).结论:MM中BAFF和APRIL的基因及蛋白表达升高,MM组内初治组、未缓解组均高于缓解组,血浆中BAFF和APRIL含量与MM肿瘤负荷呈正相关.BAFF及APRIL的表达特点可能与MM的发生、发展有关,可作为评判MM预后的新指标.     

磷酸化蛋白质(多肽)组学分析与筛查急性白血病特异性分子标志

目的 筛查与分析急性白血病特异性的磷酸化蛋白质或多肽.方法 对16例初治急性淋巴细胞白血病(ALL)和20例急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞行蛋白多肽抽提及纯化,采用免疫沉淀及结合高效液相质谱-串联质谱分析,筛查特异性分子标志物.结果 ①非受体型酪氨酸蛋白激酶家族的Fyn、Yes和Src等在急性白血病中广泛表达;②非受体型酪氨酸蛋白激酶家族的Abl/iso1、Abl,非受体型丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的Bcr、JNK2、JNK2 iso2,结合器/支架类的Cas-L、Cbl、CrkL CENTD1( Centaurin deha1) ZO2,转录调节因子GFR-1及磷酸酯酶SHIP-2,这些磷酸化的蛋白见于Ph染色体阳性ALL,基本不表达于其他ALL;③Hck、Lyn和Fgr选择性地与AML相关(M3除外).结论 ALL和AML存在相对特异的磷酸化多肽,为急性白血病的诊断及治疗提供了潜在的分子靶位.     

血友病甲携带者检出及产前诊断研究进展

血友病甲是遗传性出血性疾病最常见的一种。进行血友病甲携带者检出及产前诊断,有两种检测方法:即用免疫生物学方法检测携带者及胎儿的Ⅷ因子基因的表现型(Ⅷ因子组分检测)及用分子生物学方法检测Ⅷ因子的基因型(DNA分析)。本文就这方面研究进展作一综述。一、Ⅷ因子组分检测在判定携带者及产前诊断中的应用1.Ⅷ:C或ⅧcAg/ⅧR:Ag测定判定血友病甲携带者:Ⅷ因子由两部分组成:一部分为Ⅷ因子凝血活性(Ⅷ:C)及其抗原     

多发性骨髓瘤骨病机制及调节

骨质破坏是多发性骨髓瘤(MM)一大特征,据统计70％~80％患者有骨的累及。骨质破坏受多种因素的调节,如破骨细胞活化因子(OAFs)、黏附分子、瘤细胞与基质细胞间的相互作用等,通过上调破骨细胞活性,使成骨与破骨之间平衡失调而出现溶骨。在这些因素中哪种因素起主要作用,目前尚不明确。本文对MM骨病机制及其调节因素进行综述。     

构建兔抗人凝血因子XIII A亚单位多克隆抗体及特异性鉴定

背景：关于凝血因子XIII(FXIII)抑制物作用于FXIII的具体结合表位,目前尚无报道。 目的：用免疫动物方法制备针对FXIII A亚单位多克隆抗体,并对其特异性和活性进行鉴定。 方法：用人工合成的FXIII A亚单位多肽免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;应用Dot blot鉴定抗体特异性,并用抗体中和/尿素溶解实验检测多克隆抗体活性;Western blot方法检测2例获得性FXIII缺乏症患者的血浆FXIII水平,再应用Dot blot分析这2例患者血浆FXIII抑制物作用的抗原表位。 结果与结论：Dot blot证实兔血清中已产生抗FXIII抗体,此抗体不仅可特异性与人FXIII及转氨酶活性位点多肽结合,且在体外可抑制人FXIII的活性;用此抗体可检测出获得性FXIII缺乏症患者的血浆FXIII缺乏,分析出转氨酶活性位点是病例2血浆FXIII抑制物的作用位点。证实动物免疫法可成功制备兔抗人FXIII A亚单位转氨酶活性位点的多克隆抗体,此抗体可用于人FXIII的检测和抗原表位分析。     

K562细胞及其耐药细胞株K562/A02细胞白血病耐药相关microRNA筛选

目的 通过检测慢性粒细胞白血病急变细胞系K562及其阿霉素耐药株K562/A02的微小RNA(microRNA、miR)表达差异,探讨microRNA与白血病化疗耐药的关系.方法 MTT法检测K562/A02及其亲本细胞系K562的耐药性能;流式细胞术检测K562与K562/A02细胞的P-gp表达;运用microRNA芯片技术筛查K562与K562/A02细胞之间差异表达的microRNA,随后用实时荧光定量RT-PCR方法进一步证实.结果 阿霉素耐药株K562/A02相对于其亲本细胞系K562对阿霉素的耐药倍数为180倍;K562细胞P-gp的表达率为0.2%,K562/A02细胞P-gp的表达率为86%;microRNA芯片结果显示K562/A02与K562细胞之间有22种microRNA表达存在显著的差异(P<0.01),表达差异在2倍以上的有9种,其中miR-221、miR-155、miR-451在K562/A02细胞表达上调,而miR-98、miR-181a、let-7f、miR-424、let-7g和miR-563则表达下调.实时荧光定量RT-PCR进一步证实了上述结果,并显示miR-451、miR-155、miR-221、let-7f、miR-424在两种细胞中表达差异显著.结论 K562/A02与K562细胞存在microRNA表达差异,其中miR-451、miR-155和miR-221在K562/A02中表达显著上调,而let-7f、miR-424则显著下调,提示microRNA可能参与白血病耐药形成,差异表达的microRNA可能为逆转白血病耐药提供新的作用靶点.     

血清血管内皮生长因子和白细胞介素-6在多发性骨髓瘤中的临床意义

目的：探讨多发性骨髓瘤（MM）和实体瘤骨转移患者血清血管内皮生长因子（VEGF）和白细胞介素（IL）-6水平变化的临床意义。方法：MM组37例,其中临床Ⅰ期7例,Ⅱ期8例,Ⅲ期22例;实体瘤骨转移阳性对照组8例和正常对照组17例;用ELISA方法检测血清VEGF和IL-6的水平。结果：MM组和实体瘤骨转移组血清VEGF和IL-6水平明显高于正常对照组（P<0.01）,且MM组的VEGF水平明显高于实体瘤骨转移组（P<0.05）。随着临床分期增加,VEGF和IL-6水平呈递增趋势,VEGF水平在Ⅲ期高于Ⅰ期组和Ⅱ期组（P<0.05）,IL-6在Ⅱ期组高于Ⅰ期组（P<0.05）。各骨损评分组间IL-6水平差异存在显著性（P<0.05）。VEGF与血肌苷,尿轻链λ存在密切的关系（P<0.01）;IL-6与血钙,C反应蛋白存在密切的关系（P<0.01）。IL-6水平在临床参数C反应蛋白、血钙、β2微球蛋白异常组高于其正常组（P<0.05）;而VEGF水平在血肌苷、血轻链λ、尿轻链λ的异常组高于其正常组（P<0.05）。结论：检测血清VEGF和IL-6水平对于MM患者的诊断及鉴别诊断、临床分期、骨损程度和病情的判断具有重要意义。     

Ⅱ型遗传性出血性毛细血管扩张症血管生长发育相关蛋白质分析及意义

目的分析和检测1个Ⅱ型遗传性出血性毛细血管扩张症(HHT-2)家系成员血浆及外周血白细胞转化生长因子(TGF)-β1、TGF-β2、血管内皮生长因子(VFGF)、血小板源性生长因子受体α(PDGFRα)等蛋白质浓度,探讨这些血管生长发育相关蛋白在 HHT 发病机制中的变化及意义。方法根据鼻出血、毛细血管扩张及家族史进行 HHT 的临床诊断,并经基因筛查,以证实 HHT 的诊断。对该家系中5例新成员进行 HHT 的诊断和排除诊断。用 ELSA 方法检测该家系成员血浆 TGF-β1、TGF-β2及 VEGF 浓度;用流式细胞术结合直接按或间接免疫荧比技术分析该家系成员外周血白细胞TGF-β1、VEGF、及 PDGFRα蛋白表达。结果基因筛查的5例新家系成员 ALK1基因8号外显子不存在 C1231T 突变。该家系成员中3例 HHT 患者血浆 TGF-β1和 TGF-β2浓度分别为(16 954±3 709)ng/L和(11 548±2 611)ng/L;与正常对照相比差异无统计学意义(P>0.05);3例 HHT 患者、6名未受累家系成员、6名正常对照血浆 VEGF 浓度值分别为(179.2±22.0)μg/L,(149.8±22.7)μg/L,(132.9±21.0)μg/L;HHT 患告血浆 VEGF 浓度明显高于正常对照组(P<0.05)。HHT 家系成员外周血白细胞 PDGFRα和 VEGF 蛋白表达均上调(P 值均<0.05);TGF-β1蛋白表达与正常对照比较差异无统计学意义。结论 HHT-2患者血浆 TGF-β1浓度、单核细胞及粒细胞 TGF-β1蛋白表达与正常对照比较差异无统计学意义;而血浆 VEGF 浓度及外周血白细胞 VEGF 表达均明显高于正常对照;HHT-2患者外周血白细胞存在 PDGFRα高表达,提示存在血管生长发育相关蛋白的代偿机制。