氯吡格雷促进巨噬细胞胆固醇外流的研究

目的 探讨氯吡格雷抗动脉粥样硬化作用的潜在机制.方法 经ox-LDL、氯吡格雷、PKC-θ siRNA干预后,使用液体闪烁计数检测人巨噬细胞胆固醇外流率变化,使用RT-PCR及Westbotting方法检测CD36、SR-A、PKC-θ基因表达变化.结果 ox-LDL干预后,人巨噬细胞载脂蛋白A-I和HDL-介导的胆固醇外流率下调,而巨噬细胞CD36、SR-A、PKC-θ基因的mRNA和蛋白表达水平显著增加.氯吡格雷干预后,ox-LDL诱导的人巨噬细胞CD36、SR-A、PKC-θ基因表达受到抑制.用si-RNA干扰PKC-θ表达后,提示PKC-θ参与氯吡格雷抑制ox-LDL诱导的人巨噬细胞CD36、SR-A基因的表达.结论 提示氯吡格雷通过PKC-θ-依赖的途径,下调CD36、SR-A的表达,促进人巨噬细胞胆固醇外流,从而发挥抗动脉粥样硬化的作用.     

皮肤平滑肌肉瘤1例

患者,男,40岁,因"左肩部肿瘤术后10年,再次发现包块"入院。患者自述,10年前无意中发现左肩部包块,触之有压痛,于当地医院门诊行肿物切除术,病检报告:"神经纤维瘤",2010年再次发现左肩部包块,触之压痛,就诊某医院,切除肿物,报告"恶性肿瘤"。6个月前此部位再次发现包块,触之压痛,就诊我院。专科情况,查体:于左肩部可及一约5.0 cm×2.0 cm×2.0 cm大小包块,质软、表面光滑、界限欠清楚、移动度差,触之有压痛。彩超提示:左肩部低回声团块。全麻下行左肩部肿瘤切除术。术中见:左肩部可见8.     

奥美沙坦对心力衰竭大鼠肺脏肾上腺素能受体表达的影响

目的:研究奥美沙坦对心力衰竭大鼠肺脏α1A-肾上腺素受体(α1A-AR)和β1、β2肾上腺素受体(β-AR)表达水平及对血浆肾素活性(plasma rennin activity,PRA)和血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)水平的影响。方法:45只Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)、假手术组(B组)、心力衰竭模型对照组(C组)和奥美沙坦组(D组),采用灌胃法给药。超声心动图检测用药前后大鼠心脏功能,灌胃治疗8 w后,腹主动脉取血,采用放射免疫法测定各组大鼠PRA、AngⅡ水平,取大鼠肺组织,采用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)测定各组的α1A-AR、β1-AR和β2-AR的蛋白表达水平。超声心动图检测用药前后大鼠心脏功能。治疗8 w后,腹主动脉取血,采用放射免疫法测定各组大鼠PRA、AngⅡ水平,取大鼠肺组织,采用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)测定各组的α1A-AR、β1-AR和β2-AR的蛋白表达水平。结果 :用药前A组与B组比较,大鼠左心室射血分数(LVEF)组间差异无统计学意义(P>0.05);与B组比较,C组、D组大鼠LVEF明显降低(均P<0.05)。用药后,与C组比较,D组LVEF显著改善(P<0.05)。用药后,A组与B组大鼠PRA、AngⅡ水平差异无统计学意义(P>0.05);与B组比较,C组大鼠PRA、AngⅡ水平明显升高(P<0.01);与C组比较,D组大鼠血浆PRA、AngⅡ水平明显降低(P<0.05);在蛋白质表达水平,A组与B组用药后比较,各受体水平差异无统计学意义(P>0.05)。与B组比较,C组大鼠α1A-AR、β1-AR表达水平显著下调(P<0.05),β2-AR表达水平明显上调(P<0.01);与C组相比,D组α1A-AR、β1-AR及β2-AR水平均显著升高(均P<0.05)。结论:奥美沙坦能够改善心肌梗死后心力衰竭大鼠的心脏功能,提高LVEF,同时能够降低心力衰竭时血浆中升高的PRA和AngⅡ,并使心力衰竭大鼠肺脏下调的α1A-AR、β1-AR上调,表达增加的β2-AR进一步上调。奥美沙坦对慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)时交感-肾上腺素系统激活后肾上腺素受体表达的调节作用和对PRA、AngⅡ的抑制作用,有利于维持心力衰竭时肺脏的通气/血流比值,减轻肺水肿,改善心力衰竭时的肺循环淤血,对CHF的肺脏起到了有益的保护作用。     

腈水解酶2基因沉默细胞模型的制备

目的为腈水解酶2（NIT2）基因研究奠定基础。方法采用siRNA质粒转染技术制备NIT2基因沉默细胞模型,用筛网方法从大鼠肾脏中提取出肾小球用于培养原代系膜细胞,将NIT2靶序列构建pGU6/GFP/Neo质粒中（siNIT2质粒）,采用JETPRIME脂质体转染法将质粒转染入原代系膜细胞中,48h后荧光显微镜观察转染效率,利用SYBR GREEN 1定量PCR法检测NIT2基因表达,琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物。结果荧光显微镜下转染阳性率可达50%,定量PCR结果示siNIT2质粒转染后NIT2 mRNA显著降低,琼脂糖电泳结果示PCR产物无明显杂带。结论 siRNA质粒转染法可抑制原代系膜细胞NIT2基因的表达;为NIT2基因功能研究奠定了基础。     

高效液相色谱指纹图谱在熟地黄质量稳定性中的应用

目的研究分析高效液相色谱指纹图谱在熟地黄质量稳定性中的应用情况。方法采用安捷伦(13569)高效液相色谱仪,流动相:乙腈-0.1%醋酸溶液;柱温:25℃;检测波长:300 nm;流速:1 ml/min,梯度洗脱,将样品溶液进样5 ul,记录色谱图,考察各批次熟地黄质量的稳定性和一致性。结果经方法学考察,实验方法具有良好的稳定性、重复性和精密度。各批次蒸熟地黄样品与其共有图谱相似度较高,仅4号和7号样品相似度低于0.9,各批次酒熟地黄样品与其共有图谱相似度较高,仅6号样品相似度低于0.9,产品质量较好,且酒熟地黄的一致性优于蒸熟地黄。结论应用高效液相色谱指纹图谱评价熟地黄质量稳定性方法稳定,重复性好,可见该方法是建立熟地黄质量评价和控制的重要手段。     

中医药辨治骨关节炎研究进展

随着肥胖人口的增加,人类寿命的延长及人口老龄化程度的加重,骨关节炎不仅严重影响中老年人的自理能力和生活质量,同时又给家庭和社会造成沉重的负担。目前西医治疗骨关节炎大多局限于缓解症状,并不能阻断病变的发展进程,且存在多种不良反应。中医药的内、外治法在OA的辨治方面不良反应少,药简而效彰。通过查阅近年相关文献,对中医药内、外治法治疗骨关节炎常用方法进行归纳总结,内治法从不同辨证分型、外治法从不同治疗方法进行阐述,发现中医药内外治法综合使用疗效极佳,建议在内服中药、中成药的基础上辅以中医外治法,中医药的内外综合治法对于骨关节炎的治疗具有显著疗效,值得临床推广应用。     

IgA肾病患者肾脏组织中差异细胞因子的探索研究

目的筛选IgA肾病(IgAN)患者肾脏组织中的差异蛋白质-细胞因子,进一步探讨IgAN的发病机制。 方法入选年龄18～60岁,解放军总医院肾脏病科住院肾活检确诊为IgAN患者10例;泌尿外科行肾癌肾脏切除的患者10例,取癌旁6 cm以外正常肾脏组织作为对照。肾脏组织利用L-493细胞因子抗体芯片进行检测,筛选差异蛋白质,并对差异蛋白质进行基因本体论(GO)分析。以IL-33(白介素-33)利用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行验证。采用IBM SPSS Statistics 19.0软件对结果进行统计分析,利用T检验对差异蛋白质进行筛选,P<0.05,并且差异蛋白质差异倍数>1.4认为是差异蛋白质。 结果L-493细胞因子抗体芯片检测,在20例患者中(IgAN组10例,对照组10例),发现了25种差异蛋白质,GO分析结果表明：这些蛋白质主要与应激、细胞粘附、蛋白质代谢、信号转导相关。ELISA验证结果显示：IgAN患者肾组织中IL-33表达水平显著高于对照组。 结论IgAN患者肾脏组织中差异表达蛋白质直接或间接调控着炎症、细胞增殖和凋亡及纤维化过程。IL-33可能与IgAN发病机制有关。     

miR-34a调控HEK293细胞自噬作用的初步研究

目的探讨miR-34a对HEK293细胞自噬作用的影响。方法采用miR-34a模拟物(模拟物组)和miR-34a抑制剂(抑制剂组)分别转染HEK293细胞,并设空白对照(对照组)。采用定量PCR检测miR-34a、p53基因表达的变化,Western blotting检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ及p53表达的变化,并采用生物信息学方法分析miR-34a对自噬相关基因(Atg6/beclin1、sestrin2、FoxO3等)的可能作用。结果定量PCR结果显示,模拟物组miR-34a表达显著上调(P<0.05),抑制剂组miR-34a表达显著下调(P<0.05)。与对照组相比,miR-34a模拟物可显著抑制HEK293细胞LC3Ⅱ蛋白的表达(P<0.05),而miR-34a抑制剂则显著上调HEK293细胞LC3Ⅱ蛋白的表达(P<0.05)。定量PCR和Western blotting结果显示,各组p53mRNA及蛋白表达无统计学差异。生物信息学分析显示,Atg6/beclin1、sestrin2、FoxO3等自噬相关基因是miR-34a潜在的靶基因。结论miR-34a能抑制HEK293的自噬作用,可能是通过直接抑制...     

恶性肿瘤细胞系自发性老化的研究

目的:探讨恶性肿瘤细胞系是否普遍存在自发性老化.方法:应用老化相关半乳糖苷酶(senescence-associated beta-galactosidase,SA-β-Gal)染色法检测10种恶性肿瘤细胞系中SA-β-Gal的表达情况,以及血清饥饿后该酶的表达变化.结果:在无诱导处理且处于对数生长期的10种恶性肿瘤细胞系中,均发现有SA-β-Gal表达阳性的细胞,但不同细胞系中该酶表达阳性的老化细胞所占比率明显不同,最低的是宫颈癌HeLa细胞系(0.65 %),最高的是肝癌HepG2细胞系(3.69 %) (F=13.006,P=0.000);SA-β-Gal阳性表达的老化细胞不都是多倍体细胞;给予无血清培养液饥饿24 h后,老化细胞数目明显增加(P=0.001).结论:恶性肿瘤细胞系会发生自发性老化,其程度与细胞系种类有关.短期饥饿培养会明显增加老化细胞所占的比率,提示饥饿诱发细胞老化可能是抗肿瘤治疗的又一快速、简单且有效的途径.     

多元统计及“成分-靶点-疾病”在线关联分析脑心通胶囊中质量标志物

目的基于质量标志物(Q-marker)概念,通过筛选脑心通胶囊Q-markers,构建活性化合物-靶点网络,建立脑心通的整体质控方法。方法采用多元统计方法找到多批次脑心通胶囊的特异性成分,运用基于BATMAN-TCM网络药理学计算平台构建"Q-markers-靶点-通路-疾病"网络,并进行生物学信息注释。进一步建立超高效液相色谱法(UPLC)同时质控Q-markers的分析方法。结果多元统计分析将桑皮苷A、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、芒柄花素和丹参酮IIA 9种成分初步确定为脑心通胶囊整体质控的Q-markers。通过靶点网络构建和拓扑学分析结果推测,Q-markers主要作用于PTGIS、PTGS2、CHRNA10、ENPP1和ADORA2A 5个关键靶点。针对Q-markers建立的UPLC质控方法,线性关系良好(r0.999),重复性、稳定性、精密度试验RSD均3%。结论基于多元统计,网络药理学和UPLC多成分定量测定技术的Q-markers辨析方法,可以初步建立有效成分群多角度的分析方法,并用于脑心通胶囊的质量控制。