儿童急性淋巴细胞白血病Bcl-2基因表达及其临床意义

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)Bcl-2基因表达与临床的相关性。 方法青岛大学医学院附属医院儿科2000年10月至2001年10月利用细胞原位杂交技术，检测了30例ALL患儿不同时期Bcl-2mRNA阳性表达， 探讨其与ALL发生、治疗反应、疗效等的关系。 结果93.3%(28/30)ALL患儿有Bcl-2mRNA阳性表达，正常对照组均无表达；经1周泼尼松治疗后，细胞凋亡指数均升高，低表达组升高明显，外周血WBC下降明显；第19d骨髓检查，低表达组完全缓解率高，为90.5%(19/21)，而高表达组仅为33.3%(3/9)；动态观察10例ALL患儿，发现5例高危型患儿表达始终在较高水平，有3例在1年内出现中枢神经系统白血病，2例骨髓复发。 结论ALL患儿普遍存在Bcl-2mRNA表达，Bcl-2基因参与ALL发生；Bcl-2mRNA表达水平与泼尼松治疗反应关系密切，泼尼松治疗1周可作为化疗敏感试验；Bcl-2mRNA表达水平与第19d骨髓完全缓解率有明显相关性，高表达者完全缓解率低；动态检测Bcl-2mRNA表达水平可作为化疗敏感性的指标，指导临床采用个体化的化疗方案，同时可为临床判断预后提供可靠依据。     

糖尿病肾病分期辨治的研究进展

中西医结合对糖尿病肾病分期辨治是一种独特的病证结合诊疗理念,西医治疗同时对糖尿病肾病进行分期中医辨证论治取得新进展。现从证候病机、专家经验、临床研究3个方面汇总梳理有关研究,以期为中西医结合治疗糖尿病肾病提供系统化的分期诊疗思路。     

针对手术室内感染径路的对策

感染性疾病的途径主要包括院内感染及院外感染两大部分。在院内感染的途径中，手术室又占有相当大的比例。做为一名手术室护士，依据多年的工作经验，总结了一些避免手术室内感染的对策。     

儿童ALL治疗中骨髓细胞形态学动态监测及其意义

目的了解骨髓细胞形态学动态监测在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)治疗预后中的价值。方法采用回顾性研究方法,对我院2006年8月—2010年3月收治并获得系统治疗的70例ALL病儿进行Kaplan-Meier分析,监测完全缓解治疗第19、33天以及初次缓解后维持治疗过程中,骨髓原始+幼稚淋巴细胞比例,并采用COX比例风险回归模型对各影响因素进行分析。结果诱导完全缓解治疗第19天原始+幼稚淋巴细胞比例<5%组生存率高于5%～25%组,差异有统计学意义(χ2=25.320,P<0.001);第33天完全缓解组生存率显著高于部分缓解组(χ2=21.676,P<0.001)。维持治疗中原始+幼稚淋巴细胞比例5%组生存率高于5%～20%组(χ2=14.347,P<0.001);原始+幼稚淋巴细胞比例5%～20%病人按出现的时间距初次获得完全缓解时间分为3组,其中0.5～1.0年组与0.5年内组生存率差异无统计学意义(χ2=2.951,P>0.05),1.0年后组生存率显著高于1.0年内组(χ2=16.416,P<0.001);1年内出现频率≤3次组生存率高于>3次组(χ2=15.075,P<0.001)。原始+幼稚淋巴细胞比例5%～20%的标危、中危及高危病儿生存率依次降低(χ2=23.099,P<0.001),B细胞系ALL生存率高于T细胞系ALL(χ2=8.476,P<0.05)。多因素分析结果显示,1年内骨髓原始+幼稚淋巴细胞比例5%～20%出现频率>3次(RR8.180,95%CI 2.371～28.217,P=0.001)、高危型(RR3.013,95%CI 1.146～7.918,P=0.025)、T细胞系(RR7.064,95%CI 1.968～25.359,P=0.003)为预后影响因素。结论动态监测骨髓细胞形态学原始+幼稚淋巴细胞比例在ALL个体化施治中有极大临床指导意义。     

藏红花素对骨髓造血干-祖细胞集落形成的影响

目的探讨藏红花素对骨髓造血干-祖细胞集落形成的影响。方法采用甲基纤维素半固体培养基对骨髓单个核细胞进行集落培养,分为空白对照组及浓度为0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00g/L藏红花素组,培养14d进行集落计数。结果藏红花素浓度≤1.00g/L时随藏红花素浓度增加集落计数增加,1.00g/L时增加最显著;藏红花素浓度增加至2.00g/L时集落计数减少,增加至4.00g/L时不形成集落。结论适宜浓度的藏红花素(0.50～1.00g/L)可提高骨髓造血干-祖细胞集落形成。     

婴儿特发性血小板减少性紫癜临床特点分析

目的 分析婴儿特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)的特点.方法 从性别、临床表现、实验室检查、治疗效果等方面对77例ITP患儿进行观察和分析评价.结果婴儿组男性占75%,年长儿组男性占60%; 诱因为疫苗接种:婴儿组占28%,年长儿组占4%;诱因为感染...     

草分支杆菌对人脐血树突状细胞体外扩增的影响

背景:树突状细胞因其强大的抗原提呈能力而在机体抗肿瘤作用的中心地位逐渐受到重视,但如何能有效获得足够数量有功能的树突状细胞成为目前研究的重点,尤其是有关低毒免疫调节剂的报道较少.目的:观察草分支杆菌F.U.36(乌体林斯,Utilins)对人脐血来源树突状细胞体外扩增的影响.方法:应用Ficoll-Hypaque法分离人脐血单个核细胞,分别用乌体林斯,细胞因子(重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子+重组人肿瘤坏死因子α+重组人白细胞介素4),细胞因子联合乌体林斯进行干预,并以RPMI-1640培养液诱导培养人脐血单个核细胞作为对照组,诱导培养树突状细胞,并于倒置显微镜下观察其生长情况及形态.培养第9天,采用流式细胞仪检测各组人树突状细胞特异性表型CD1a及MHC-Ⅱ分子HLA-DR的变化,并将细胞涂片行瑞氏-姬姆萨染液染色,油镜下观察摄片.结果与结论:除对照组外,实验各组均得到高表达CD1a及HLA-DR的典型树突状细胞.乌体林斯组CD1a及HLA-DR阳性细胞比例亦明显高于对照组而低于细胞因子组 (P < 0.05),联合组HLA-DR阳性细胞比例高于细胞因子组(P < 0.05).结果提示,草分支杆菌F.U.36(乌体林斯)不仅能促进脐血树突状细胞体外扩增,还能协同细胞因子促进树突状细胞成熟.

Abstract：

BACKGROUND: The central position of dendritic cells (DCs) has aroused increasing attention due to strong antigen presentation capability in anti-tumor. However, how to obtain enough functional DCs and reports regarding immunomodulator with low toxicity are few. OBJECTIVE: To investigate the effect of mycobacterium phlei F.U.36 (Utilins) on the proliferation and maturity of DCs derived from human umbilical cord blood in vitro.METHODS: The mononuclear cells were isolated from human umbilical cord blood using Ficoll-Hypaque method and cultured with Utilins, cytokine (human recombinant granulocyte/macrophage colonystimulating factor + recombinant human tumor necrosisfactor-α + recombinant human interleukin-4), or combination cytokine + Utilins, respectively. In addition, cells cultured with RPMI-1640 served as controls. Morphological features and growth of DCs were observed by an inverted microscope. Thephenotype changes of DCs, such CD1a and HLA-DR, were detected by flow cytometry at 9 days after culture. Moreover, DCs were stained by Wright-Giemsa and observed under oil lens. RESULTS AND CONCLUSION: Typical DCs with high expressions of CD1a and HLA-DR were obviously detected in all experimental groups except the control group. The positive rates of CD1a and HLA-DR in the Utilins group were higher than those in the control group, but lower than the cytokine group (P < 0.05). The HLA-DR positive rate of the combination group was higher than that of the cytokine group (P < 0.05). The results revealed that, Utilins can not only promote the proliferation of DCs derived from human umbilical cord blood in vitro but also cooperate with cytokines to induce the maturity of DCs.     

卡介苗HSP70基因转染HL-60细胞瘤苗制备及抗瘤机制的研究

目的构建卡介苗(BCG)热休克蛋白70(HSP70)的真核表达载体,通过基因转染表达HL-60细胞表面,研究其抗瘤作用和机制。方法利用多聚酶链反应(PCR)方法扩增HSP70基因,与真核表达载体pDisplay连接,构建重组载体pDisplay-HSP70,并利用脂质体2000将其转染HL-60细胞。HL-60细胞分为未转染的HL60-wt组、转染空载体pDisplay的HL60-pDisplay组、转染重组载体pDisplay-HSP70的HL60-HSP70组,分别与外周血T淋巴细胞培养72 h,羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记和流式细胞术测定淋巴细胞增殖指数,ELISA法检测IFN-γ水平;各组HL-60细胞与T淋巴细胞混合培养6 d后获细胞毒性T淋巴细胞(CTL)效应细胞,加入HL-60靶细胞以不同效靶比共培育12 h,LDH释放改良法检测CTL细胞杀伤活性。结果扩增获得的HSP70基因大小与理论值一致,重组载体pDisplay-HSP70构建正确。HSP70表达在转染后的HL-60细胞表面。转染后的HL-60细胞,即HL60-HSP70组能明显促进异体T细胞扩增,该组CFSE阳性率、IFN-γ含量、CTL杀伤率均高于HL60-wt和HL60-pDisplay组,差异均有统计学意义(P0.05);后两组间差异则无统计学意义(P0.05);随效靶比增大,HL60-HSP70组CTL细胞杀伤活性逐渐增强,差异有统计学意义(P0.05)。结论成功构建真核表达载体pDisplay-HSP70,并制备膜表面表达BCG HSP70的HL-60细胞瘤苗,HSP70基因转染后能明显增强HL-60细胞的免疫原性。     

藏红花素对HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制

本研究探讨藏红花素(crocin)对人急性白血病细胞HL-60增殖抑制的影响及其促凋亡机制。测定HL-60细胞在不同浓度crocin作用后的生长曲线,用荧光显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测bcl-2、bax基因的表达。结果表明,不同浓度crocin作用后HL-60细胞生长明显受抑制,并呈现出剂量时间依赖关系。在0-5mg/ml范围内HL-60细胞凋亡率逐渐升高。当crocin浓度高于5mg/ml时,HL-60细胞凋亡率并没有升高,反而下降,表现为细胞坏死。流式细胞术检测结果显示,细胞周期被阻滞于G0/G1,且在5mg/ml时阻滞作用最明显。RT-PCR结果显示,bcl-2基因表达明显下调,bax基因表达上调。结论:crocin可诱导HL-60细胞凋亡,并对细胞周期起阻滞作用,其作用机制可能与bcl-2基因表达抑制及bax基因表达激活有关。