定量研究乳腺癌ras癌基因产物p21的表达

应用流式细胞术和细胞免疫荧光染色技术，对４３例乳腺癌的癌基因ｒａｓｐ２１的表达进行了定量研究。并探讨了与ＤＮＡ倍体和细胞增殖活性之间的关系。结果表明，乳腺癌ＤＮＡ倍体出现率和ＤＩ值均随肿瘤的恶性程度增高而增高。ｒａｓｐ２１的表达结果显示，肿瘤的分化程度与ｒａｓｐ２１的表达密切相关。ｐ２１表达阳性率随组织学分级而增高，Ⅰ级ｐ２１￣＋为４４．４％（４／９例），Ⅱ级ｐ２１￣＋为８７．５％（１４／１６例），Ⅲ级ｐ２１￣＋９４．４％（１７／１８例）．并发现乳腺癌倍体和细胞增殖活性与ｒａｓｐ２１的表达密切相关，异倍体肿瘤ｐ２１￣＋表达明显高于二倍体肿瘤，而ｒａｓｐ２１表达阳性的乳腺癌，其增殖指数值明显高于ｐ２１表达阴性的乳腺癌。     

环氧化酶-2、细胞间隙连接蛋白-43、P-糖蛋白在复发性原发上皮性卵巢癌中的表达

 目的 探讨环氧化酶-2（COX-2）、P-糖蛋白（P-gp）和细胞间隙连接蛋白-43（CX-43）与上皮性卵巢癌化疗疗效及临床病理的关系。方法 60份原发上皮性卵巢癌（PEOC）组织和6份正常卵巢组织作为研究对象。根据临床诊断分为三组：化疗耐药组30例；化疗敏感组30例；正常卵巢组6例。病例术前均未接受过放疗，入院后均行广泛性全子宫切除+盆腔淋巴结清扫+阑尾切除+大网膜切除术， 66例患者均有随访结果。用流式细胞术定量分析66份标本中COX-2、P-gp和CX-43蛋白的表达量。结果 CX-43蛋白的表达：化疗耐药组＜化疗敏感组＜正常卵巢组织，单向方差分析两两比较差异有统计学意义（P＜0.001）。P-gp和 COX-2蛋白的表达：化疗耐药组＞化疗敏感组＞正常卵巢组织，单向方差分析差异均有统计学意义（P＜0.005）。结论 P-gp、COX-2蛋白的表达上升和 CX-43蛋白的表达下降与上皮性卵巢癌的复发、进展及化疗耐药有关。     

细胞间隙连接蛋白43在耐药性卵巢癌中的表达

目的探讨细胞间隙连接蛋白43(CX43)与上皮性卵巢癌化疗疗效(耐药或敏感)及临床病理的关系.方法从1999年1月至2003年6月间临床资料及随访资料完整的卵巢癌病例中,筛选出60例原发上皮性卵巢癌和6例正常卵巢作为研究对象.根据临床诊断将其分为3组:①化疗耐药组30例,②化疗敏感组30例,③正常卵巢组6例.全部病例术前均未接受过放疗,入院后均行全子宫和双附件切除 盆腔淋巴结清扫 阑尾切除 大网膜切除术,66例患者均有随访结果.用流式细胞仪定量分析66例标本组织中CX43蛋白的表达量.结果CX43蛋白的表达为化疗耐药组＜化疗敏感组＜正常卵巢组织,单向方差分析两两比较结果差异有显著意义.结论CX43蛋白表达量的下降与上皮性卵巢癌的化疗耐药显著相关.     

肝素裂合酶在胃癌中的表达及其生物学研究

目的本研究通过检测肝素裂合酶在胃癌组织中的表达含量,探讨肝素裂合酶表达与胃癌发展、浸润和转移的关系,为胃癌治疗提供理论依据。方法应用免疫组织化学法（IHC）检测了86例胃癌组织、23例癌旁组织和14例正常组织中肝素裂合酶蛋白的表达。应用流式细胞术（flow cytometry,FCM）的方法定量检测50例胃癌组织、25例癌旁组织和10例切缘正常组织中肝素裂合酶的含量。运用统计软件SPSS 11.0对数据进行统计分析。结果应用IHC法检测86例胃癌组织、23例癌旁组织和14例切缘正常组织中肝素裂合酶阳性表达率分别为79.1%,65.2%和42.9%,三者之间差别有统计学意义（P〈0.05）。应用FCM法对50例胃癌组织,25例癌旁组织和10例切缘正常组织标本中的肝素裂合酶的含量进行检测,其荧光指数（fluorescence index,FI）分别为1.86±0.44,1.22±0.45,1.00±0.21。从胃癌→癌旁→正常组织,FI值明显下降,并且三者之间差别有统计学意义（P〈0.01）。结论肝素裂合酶在胃癌组织的表达明显高于癌旁组织和正常胃组织,提示肝素裂合酶可能与胃癌的发展有关;肝素裂合酶表达与浸润程度、TNM分期、淋巴结转移相关,提示肝素裂合酶高表达与胃癌的分期、浸润和转移有关。     

人胃癌组织中PPARγ的表达及其配体对胃癌细胞生长的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖激活物受体γ(PPARγ)在人类胃癌中表达的意义及其配体15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对人类胃癌MGC803细胞生长的影响及机制。方法RT-PCR检测PPARγ及survivin mRNA表达;Western blot检测MGC803细胞PPARγ、survivin、S期激酶相关蛋白2(Skp2)及p27蛋白表达;免疫组化检测组织PPARγ蛋白表达。MTT法检测增殖;流式细胞术检测凋亡及细胞周期;Hoechst33342染色观察细胞凋亡的形态学变化。结果PPARγ蛋白阳性表达率,胃癌75.0%(40例)明显高于癌旁胃黏膜25.0%(40例)及正常胃黏膜20.0%(40例)(P<0.001),后两者无明显差别。PPARγmRNA及蛋白阳性表达率,肠型胃癌95.0%(20例)明显高于弥漫型胃癌55.0%(20例)(P<0.05)。15d-PGJ2作用MGC803细胞24 h后,5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L和40μmol/L组增殖抑制率(%)和凋亡率(%)均高于0μmol/L组(P<0.001),且随浓度的增加而升高;30μmol/L组的增殖抑制率(%)和凋亡率(%),也随时间的延长而升高;G1/G0期细胞比例,30μmol/L组[(61.33(1.53)%]明显高于0μmol/L组[(31.33(2.31)%](P<0.01)。随15d-PGJ2作用MGC803细胞浓度的升高,survivin mRNA和蛋白及Skp2蛋白表达均降低,p27蛋白表达升高,而PPARγmRNA及蛋白表达却没有变化。结论PPARγ表达与胃癌组织学类型有关。15d-PGJ2可能通过诱导凋亡及将细胞阻滞在G1/G0期,抑制人类胃癌MGC803细胞的生长,survivin和Skp2表达下调及p27表达上调可能在这个过程中起重要作用,这些可能不依赖PPARγ。提示15d-PGJ2可能是治疗胃癌的有效试剂。     

卵巢肿瘤p16、Rb、CyclinD1基因蛋白的流式细胞分析及其与细胞增殖的关系

目的：探讨卵巢肿瘤中p16、Rb、CyclinD1基因蛋白的表达及其与细胞增殖的关系。方法：利用流式细胞术检测60份卵巢肿瘤组织中p16、Rb、CyclinD1基因蛋白的表达,同时检测DNA的含量,以5份正常卵巢组织作对照。结果：从良性到恶性,p16、Rb的荧光指数（FI）依次降低,CyclinD1表达依次升高,增殖指数（PI）亦升高。阳性组P16的PI低于阴性组,多元线性回归显示p16与PI呈负相关（P＝0．0081）;Rb、CyclinD1不同表达时,PI值有差异,但无统计学意义。p16、Rb阳性表达时,DNA指数（DI）下降,而CyclinD1阳性表达时,DI值较高。结论：p16、Rb缺失,CyclinD1增加可促进肿瘤的恶性转化及异常增殖。     

TGF—β1、SMAD3、CDC25A、CDC25B在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的 研究转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、SMAD3、细胞分裂周期25(cell division cycle 25,CDC25)A、B在食管癌中的表达情况及其异常表达与食管癌发生、发展之间的关系.方法 利用逆转录聚合酶链反应方法 检测44例同个体食管癌、癌旁组织、食管正常黏膜组织中TGF-β1、SMAD3、CDC25A、CDC25B mRNA的表达,采用流式细胞术检测同组38例食管癌和20例食管正常黏膜组织中SMAD3、CDC25A、CDC25B蛋白的表达.结果 CDC25A、CDC25B在食管正常黏膜组织、癌旁组织、食管癌中表达呈逐渐增高趋势,TGF-β1、SMAD3呈逐渐下降趋势.结论 TGF-β1、SMAD3、CDC25A、CDC25B的异常表达可能是引起食管癌发生和发展的因素,食管癌变早期即已出现,可以作为早期诊断的指标.CDC25A、CDC25B、SMAD3、TGF-β1 mRNA的表达异常与食管上皮癌变密切相关.有望为靶点指导抗肿瘤的基因治疗.     

香加皮羽扇豆烷乙酸酯(CPLA)对树突状细胞分化成熟的影响

目的：探讨香加皮羽扇豆烷乙酸酯（CPLA）对人外周血单个核细胞（PBMC）来源的树突状细胞（DC）在体外分化成熟及免疫活性的影响。方法：从人外周血分离单个核细胞，与细胞因子GM—CSF、IL-4共培养，于第5天加入DC的促成熟刺激剂TNF-α（阳性对照组）或CPLA。倒置显微镜和透射电镜下观察DC的形态；应用流式细胞术检测成熟DC的表面标志CD1a、CD83、CD80和CD86的表达情况；用ELISA检测DC培养上清中IL-12和IFN-γ的含量；用MTT法测定DC刺激T细胞增殖的能力。结果：培养10d后，经CPLA刺激的PBMC呈现出典型DC的形态学特征；成熟DC的特征性表面分子CD1a、CD83、CD80和CD86表达水平均明显上调（P〈0．05）；细胞培养上清中IL-12和IFN-γ含量明显增高（P〈0．05）；刺激T细胞增殖的能力明显增强（P〈0．05）。结论：CPLA可诱导PBMC来源的DC分化成熟，并可促进其细胞因子的分泌，增强DC的免疫调节活性。     

胃腺癌CDC25A表达及青蒿琥酯干预的实验研究

目的 初步探讨细胞分裂周期素25A(CDC25A)与胃腺癌发生、发展的关系,以及青蒿琥酯对其的干预作用.方法 利用流式细胞术检测胃腺癌组织中CDC25A蛋白表达水平.细胞水平实验分为4组:对照组及30、60、120μmol/L青蒿琥酯组,即以不同浓度(30、60、120μmol/L)青蒿琥酯(Art)干预胃腺癌SGC-7901细胞24h,并以生理盐水代替药物作为对照组,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期及CDC25A蛋白表达水平.结果 胃腺癌组织中CDC25A蛋白表达水平(419.69±21.91)明显高于正常胃组织中的表达水平(316.11±24.23,P<0.01).30、60、120μmol/L青蒿琥酯组细胞凋亡率(分别为5.48%±0.67%、12.55%±1.17%、23.43%±2.18%)明显高于对照组(0.87%±0.14%,P<0.05),且具有Art剂量依赖性.30、60、120μmol/L青蒿琥酯组细胞增殖指数(分别为39.18%±0.53%、35.71%±0.99%、31.73%±1.02%)明显低于对照组(44.12%±2.51%,P<0.01);30、60、120μmol/L青蒿琥酯组细胞中CDC25A蛋白表达水平(分别为414.80±4.06、397.86±3.61、345.68±7.11)明显低于对照组(433.99±1.56,P<0.01).结论 CDC25A在胃腺癌组织中的高表达可能参与了胃腺癌的发生、发展,Art具有抑制胃腺癌SGC-7901的细胞生长作用,且可以下调细胞CDC25A的蛋白表达水平.     

CDC25A、CDC25B在食管鳞癌中的表达及其与凋亡和增殖的关系

目的：探讨CDC25A、CDC25B在食管鳞癌组织中表达的生物学意义及其与细胞增殖和凋亡的关系。方法：采用免疫组织化学SP法检测CDC25A、CDC25B蛋白在52例食管鳞状细胞癌、25例非典型性增生组织和24例正常黏膜中的表达。用FCM法检测其中30例食管鳞癌、5例正常黏膜的细胞凋亡率、增殖指数及CDC25A、CDC25B蛋白含量。结果：CDC25A、CDC25B在癌组织中的阳性表达率分别为50%和48%,均高于不典型增生组织（16%）和正常黏膜（0%）（P〈0.01）;CDC25A、CDC25B的表达均与细胞的分化程度、浸润深度相关,且CDC25A与淋巴结转移相关。核膜CDC25A蛋白阳性组的增殖指数高于核膜CDC25A蛋白阴性组（P〈0.05）。结论：CDC25A可能参与了食管鳞癌的发生发展,有望成为提示食管癌发生和预后的新的生物学标志;CDC25B可能只是在癌变早期发挥了作用。食管鳞癌细胞核内CDC25A蛋白可能有促细胞增殖作用。