阿霉素诱导食管癌耐药细胞中ABCG2的表达及其意义

 目的研究阿霉素(ADM)药物诱导食管癌细胞(Eca109)产生耐药细胞株(Eca109/ADM)中ATP结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的表达及其意义。方法通过逐步增加培养液中阿霉素的浓度,长期筛选培养,建立食管癌耐药细胞株Eca109/ADM。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测耐药细胞中ABCG2mRNA的表达量,流式细胞术(FCM)和蛋白印迹(Westernblot)方法检测耐药细胞中ABCG2蛋白的表达量及细胞定位。FCM方法检测Eca109/ADM细胞药物外排作用,MTT方法检测Eca109/ADM细胞对阿霉素的耐药系数。结果Eca109/ADM细胞与Eca109细胞相比,ABCG2表达显著性增高(P<0.05)。Eca109/ADM细胞药物外排作用较Eca109细胞增加,Eca109/ADM细胞对阿霉素的耐药系数为3.29。结论成功建立耐药细胞株Eca109/ADM。Eca109/ADM细胞是一个理想的耐药细胞模型。Eca109/ADM细胞中ABCG2的表达量增高,提示ABCG2参与食管癌细胞耐药的形成。     

鼻息肉中ICAM-1、VCAM-1和整合素α4的表达

目的检测细胞间粘附分子-1（ICAM-1）、血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）和整合素科在鼻息肉中的表达,探讨此三种黏附分子在鼻息肉发生中的作用。方法采用流式细胞术（FCM）检测ICAM-1、VCAM-1和整合素α4在60例鼻息肉患者的鼻息肉标本及20例正常中鼻甲黏膜中的表达。结果①ICAM-1、VCAM-1和整合素α4在鼻息肉组织中的表达明显高于正常中鼻甲黏膜。②ICAM-1、VCAM-1和整合素α4在慢性鼻窦炎鼻息肉各分期中的表达无显著差异。结论ICAM-1、VCAM-1及整合素α4在鼻息肉中的表达明显高于正常中鼻甲黏膜,三者可能与鼻息肉的发生有关;ICAM-1、VCAM-1及整合素α4在鼻息肉各临床分型分期中无显著差异,表明在初发鼻息肉与复发鼻息肉形成过程中所起的作用是一样的。     

尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞凋亡及Survivin和Caspase-3表达的影响

目的:观察环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞增殖及凋亡的影响,研究其对凋亡抑制蛋白Survivin和Caspase-3表达的影响,探讨尼美舒利诱导Eca-109细胞凋亡的作用机制.方法:尼美舒利作用Eca-109细胞后,MTT法测定尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞增殖的抑制率;电子显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡:RT-PCR法检测Eca-109细胞Survivin mRNA表达变化,Western blot检测Survivin和Caspase-3蛋白表达变化.结果:尼美舒利(50～400μmol/L)对Eca-109细胞生长有抑制作用,随浓度升高、时间延长抑制作用增强,并诱导Eca-109细胞凋亡,呈剂量-时间效应关系;尼美舒利可降低Survivin mRNA和蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达.结论:尼美舒利可诱导人食管癌细胞株Eca-109凋亡,其机制可能与下调Survivin表达及激活Caspase-3表达有关.     

COX-2、CX43在复发性原发上皮性卵巢癌中的表达

目的:探讨环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和细胞间隙连接蛋白43(connexin 43,CX43)与上皮性卵巢癌化疗疗效(耐药或敏感)及临床病理的关系。方法:在1999年1月至2003年6月间,从临床资料及随访资料完整的卵巢癌病例中,筛选出60例原发上皮性卵巢癌(primary epithelia ovarian carcinoma,PEOC)和6例正常卵巢(均为宫颈癌切除标本,且术后病理证实双卵巢为正常组织)的存档蜡块,作为研究对象。根据临床诊断分为3组:化疗耐药组30例,化疗敏感组30例,正常卵巢组6例。术前均未接受过放疗,入院后均行广泛性全子宫切除 盆腔淋巴结清扫 阑尾切除 大网膜切除术,全部66例病人均有随访结果。用流式细胞术定量分析66例标本组织中COX-2和CX43蛋白的表达量。结果:CX43蛋白的表达:化疗耐药组<化疗敏感组<正常卵巢组织,单向方差分析两两比较结果均为P=0.000,差异有极显著意义。COX-2蛋白的表达:化疗耐药组>化疗敏感组>正常卵巢组织,单向方差分析两两比较差异均有极显著意义,P<0.005。随临床分期、病理分级、化疗疗程数的增加及有淋巴结转移,CX43蛋白的表达量随之降低,但是差异无显著意义,P>0.05。结论:COX-2蛋白的表达上升和CX43蛋白的表达下降与上皮性卵巢癌的复发、发展及疗程有关,与化疗耐药呈正相关。     

杠柳苷对 H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制研究

目的 研究香加皮中杠柳苷体内抗肿瘤作用,探讨其可能作用机制。方法 将小鼠肝癌H22细胞经体外培养并于 BALB/c小鼠腹腔内传代后,无菌接种于小鼠皮下,建立荷瘤小鼠模型。采取不同剂量杠柳苷 (0.25、0.50、1.00 mg/kg) ip 给药,每天1次,连续 15 d,观察荷瘤小鼠肿瘤生长情况,测定抑瘤率,应用流式细胞术检测杠柳苷对肿瘤细胞周期与凋亡的影响;采用透射电镜观察荷瘤小鼠肿瘤细胞超微结构的变化。结果 杠柳苷对小鼠 H22皮下移植瘤具有显著的抑制作用,小鼠成瘤时间明显晚于模型组,肿瘤生长缓慢,低、中、高3个剂量组抑瘤率分别为 60.28%、68.09%、74.74%。流式细胞术分析结果显示,不同剂量杠柳苷处理小鼠移植瘤细胞后,处于 G0/G1 期细胞明显增多,S 期和 G2/M 期细胞显著减少,与模型组相比差异显著(P＜0.05),其中1.00 mg/kg 杠柳苷组 G0/G1 期细胞由对照组的(46.90±5.80)% 升高至 (83.80±2.52)%,S 期和 G2/M 期细胞分别由对照组的 (38.30±5.11)%、(14.80±0.70)% 下降至 (5.33±2.73)%、(10.87±0.25)%;而且杠柳苷各组小鼠肿瘤细胞的凋亡率均明显增加,其中 1.00 mg/kg 组凋亡率高达 (32.35±1.75)%,并可见典型的凋亡峰。透射电镜观察可见,杠柳苷各组小鼠肿瘤组织中出现大量典型的凋亡细胞,而对照组瘤组织内多为富含线粒体与内质网的代谢旺盛的肿瘤细胞。结论 杠柳苷具有很强的体内抗肿瘤作用,其作用机制可能与阻滞细胞周期和诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

Caspase-3、P73、CDK4在口腔黏膜鳞状细胞癌化疗前后的表达及其意义

目的：观察caspase-3、P73、CDK4在口腔黏膜鳞状细胞癌平阳霉素治疗前后的表达及其临床意义。方法：临床标本取自河北医科大学第四医院口腔科1988年至2005年的23例病理学确诊的口腔鳞状细胞癌患者。流式细胞术检测caspase-3、P73、CDK4在口腔黏膜鳞状细胞癌中的表达。结果：Caspase-3在口腔鳞癌中的表达水平显著性低于正常组织(P<0.05),平阳霉素化疗后表达显著性增高(P<0.05)。P73表达量在口腔鳞状细胞癌中明显升高,平阳霉素化疗后显著性下降(P<0.05)。口腔鳞状细胞癌中CDK4表达明显增高,平阳霉素化疗后显著性下降(P<0.05)。结论：Caspase-3、P73、CDK4在口腔黏膜中的异常表达与口腔鳞癌的发生有关,平阳霉素可能通过调节caspase-3、P73、CDK4的表达起到抗癌作用。     

青蒿琥酯逆转食管癌Eca109/ADM细胞对多柔比星的耐药

目的:研究青蒿琥酯(artesunate,Art)逆转食管癌细胞Eca109/ADM对多柔比星(doxorubicin,ADM)的耐药作用及其机制。方法:实验分为生理盐水(normal saline,NS)对照组(NS组)、Art组(0.1μmol/L)、ADM组(0.2μg/ml)和Art+ADM联合组。Art、ADM、Art+ADM作用Eca109/ADM细胞48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率、细胞内ADM的含量及细胞中三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette transporter G2,ABCG2)蛋白的表达量,Western blotting检测细胞中ABCG2蛋白表达水平。结果:Art+ADM作用Eca109/ADM细胞48 h后,细胞的凋亡率[(12.89±0.87)%]显著高于Art组[(1.58±0.12)%]、ADM组[(6.55±0.90)%]及NS组[(1.44±0.10)%](P<0.05),Art可提高Eca109/ADM细胞对ADM的敏感性。流式细胞术检测结果显示,Art+ADM组Eca109/ADM细胞中ABCG2蛋白表达量(644.60±3.21)显著低于ADM组(659.15±4.59)及NS组(658.14±6.88)(P<0.05),但与Art组(644.31±3.96)相比无显著差异(P>0.05)。Western blotting检测结果与流式细胞术结果一致,Art组Eca109/ADM细胞中ABCG2蛋白的表达水平为(0.70±0.02),与对照组的(0.80±0.03)相比显著降低(P<0.05),Art+ADM组的ABCG2蛋白(0.71±0.04)与单独应用ADM组的ABCG2蛋白(0.81±0.05)相比,ABCG2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。Art+ADM组Eca109/ADM细胞内ADM的含量(848.02±5.04)显著高于单独应用Art组(763.29±4.02)、ADM组(800.25±3.84)及NS组(763.88±2.03)(P<0.01)。结论:Art可以降低食管癌Eca109/ADM细胞内ABCG2蛋白表达,增加ADM的含量,逆转肿瘤细胞对ADM的耐药。     

胃癌组织中EphA2基因的表达及其与细胞凋亡、增殖的关系

目的 探讨EphA2基因在胃癌组织中表达的生物学意义及与细胞凋亡、增殖的关系.方法 利用免疫组织化学法(immunohisochemistory,IHC)检测82例胃癌手术切除标本的癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜中EphA2的表达,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹技术对其中随机选取的30例标本进行EphA2 mRNA及其蛋白的定量检测,分析其表达与临床病理参数的关系.采用流式细胞术(FCM)检测82例癌组织中细胞凋亡率及增殖指数(PI),分析EphA2表达与细胞凋亡、增殖的关系.结果 IHC结果显示EphA2在癌组织中的表达显著高于癌旁组织及正常胃黏膜(P<0.01),且随胃癌分化程度降低、浸润深度增加及淋巴结转移而升高(P<0.05),但与肿瘤大小、患者年龄无关(P>0.05);RT-PCR结果显示EphA2 mRNA在各组中的表达水平无显著性差异(P>0.05);Western印迹与IHC结果一致,显示EphA2蛋白在癌组织中异常高表达(P<0.01).FCM结果显示EphA2高表达组细胞凋亡率显著低于低表达组(P=0.018),而其PI显著高于低表达组(P=0.002).结论 EphA2在胃癌组织中表达明显上调,可抑制细胞凋亡,促进细胞增殖,在胃癌的发生发展中发挥重要作用,其机制与EphA2 mRNA的转录异常无关,而可能是其翻译水平上调或蛋白质稳定性增高所致.     

CDC25A、Smad3在食管鳞癌中的表达及其相互关系

目的探讨CDC25A、Smad3在食管鳞癌组织中表达的意义及CDC25A蛋白与Smad3蛋白、细胞增殖指数、细胞凋亡率的关系。方法采用免疫组织化学S-P法检测CDC25A蛋白在52例食管鳞状细胞癌、24例正常黏膜中的表达。用流式细胞术检测其中30例食管鳞癌、5例正常黏膜的细胞凋亡率、增殖指数及CDC25A蛋白、Smad3蛋白的表达。结果CDC25A在癌组织中的阳性表达率为50％，明显高于正常黏膜（P〈0．05），CDC25A在高分化和中低分化组、浸润至纤维膜和未浸润至纤维膜组、有淋巴结转移和无淋巴结转移组中的差异显著（P〈0．05）。Smad3蛋白在癌组织中的表达低于正常黏膜（P〈0．05）。Smad3蛋白与CDC25A蛋白的表达呈负相关（r=-0．482，P=0．007）。核膜CDC25A蛋白阳性者的增殖指数高于核膜CDC25A蛋白阴性者（P〈0．05）；细胞质CDC25A蛋白表达阳性者的凋亡率低于细胞质CDC25A蛋白表达阴性者，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Smad3蛋白的下调可能与食管癌中CDC25A蛋白含量升高有关；细胞核中的CDC25A蛋白可能具有促增殖作用；CDC25A蛋白可能参与了食管癌的发生、发展。