MAPK8基因在小鼠源性3T3-Ll脂肪细胞诱导分化中表达水平的变化

[目的]观察小鼠源性3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中MAPK8基因表达水平的变化,探讨MAPK8基因与肥胖发生之间的关系.[方法]体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,在诱导3T3-L1脂肪细胞分化成熟的不同时段,采用RT-PCR技术检测脂肪细胞中MAPK8基因的mRNA表达水平.[结果]MAPK8基因高表达于3T3-L1脂肪前体细胞中,随细胞分化成熟该基因表达水平逐渐下调.MAPK8基因表达水平除在诱导分化前至第4 d、第2～5 d、第6～10 d时段内差异无显著性外,其余各时段间差异均有显著性(P＜0.05).[结论]MAPK8基因与肥胖发生有关,在3T3-L1细胞分化过程中表达逐渐下调可能有利于脂肪细胞的分化成熟和脂质积聚.     

人miR-17-92 cluster慢病毒载体构建及其在人脂肪细胞的表达验证

目的构建人miR-17-92cluster慢病毒表达载体,包被病毒并检测其在人脂肪细胞中过表达效果。方法以人脂肪细胞基因组DNA为模板,PCR扩增包含miR-17-92cluster所在区域上下游100bp左右的基因组DNA,克隆入慢病毒表达载体,与Pcgvp、Rev、Vsvg包装质粒共转染HEK-293T细胞包装病毒,收取病毒上清液感染人脂肪细胞。36h开始观察荧光标记,72h收取细胞,抽提RNA,RT-PCR检测miR-17-92cluster各miRNA及miR-103、let-7e的表达。结果成功构建人miR-17-92cluster慢病毒表达载体。包装获得的病毒感染人脂肪细胞的效率可达到75%以上,miR-17-92cluster各miRNA的过表达效率均达到2倍以上,且没有干扰miRNA内源性成熟机制。结论成功构建了人miR-17-92cluster慢病毒表达载体。包被的慢病毒可以在人脂肪细胞中实现了该cluster的过表达效果,为研究人miR-17-92cluster在人脂肪细胞中的功能提供参考。     

GEM基因在3T_3-L_1脂肪细胞诱导分化过程中的表达变化

目的观察3T3L1前体脂肪细胞诱导分化过程中GEM基因表达水平的变化,探讨GEM基因与肥胖发生的关系。方法体外培养3T3L1前体脂肪细胞,采用RTPCR技术检测分化不同时段的3T3L1脂肪细胞中GEM基因的mRNA表达水平。结果在3T3L1脂肪细胞的诱导分化过程中,GEM基因mRNA表达水平无显著变化(P>0.05)。结论GEM基因在脂肪细胞分化、脂质合成和积聚过程中的作用有待进一步研究。     

CAMKⅡD基因在3T_(3~-)L_1脂肪细胞诱导分化过程中的表达变化

目的　观察 3T3 L1前体脂肪细胞诱导分化过程中Ⅱ型钙调蛋白激酶δ亚基 (CAMKⅡD)基因表达水平的变化 ,探讨CAMKⅡD基因与肥胖发生的关系。方法　体外培养 3T3 L1前体脂肪细胞 ,在诱导 3T3 L1脂肪细胞分化成熟的不同时段 ,采用RT PCR技术检测脂肪细胞中CAMKⅡD基因的mRNA表达水平。结果　诱导剂刺激后 (第 0天 ) ,3T3 L1脂肪细胞中CAMKⅡD基因的mRNA表达于第 1天显著下调 ,与第 0天比较具有显著差异 (P <0 .0 1) ;第 2天 ,该基因表达水平显著上调 ,并明显高于第 0天表达水平 (P <0 .0 1) ;第 2天至 3T3 L1细胞分化为成熟脂肪细胞 (第 10天 ) ,该基因表达一直维持在较高水平 (P >0 .0 5 )。结论　CAMKⅡD基因参与了脂肪细胞分化的调控 ,与肥胖发生相关 ,其在3T3 L1细胞分化过程中的表达变化可能有利于脂肪细胞的分化成熟和脂质积聚     

hsa-miR-17-92 cluster及其同源体靶基因的生物信息学分析

目的 对hsa-miR-17-92 cluster及其同源体进行系统的生物信息学分析,预测其可能参与的生物学过程,为深入研究其在脂肪细胞分化、肥胖发生等过程中的功能与机制奠定基础.方法 1.应用PubMed、Google等信息搜索工具查找hsa-miR-17-92 cluster及其同源体的所有研究,综述已有研究进展;2.应用miRBase获取hsa-miR-17-92 cluster及其同源体的各成员序列,并分析其序列特征及保守性;3.应用美国国家生物技术信息中心(NCBI) blast、NCBI mapviewer、基因组生物信息学(UCSC) Browser工具分析hsa-miR-17-92 cluster及其同源体所在基因组的序列特征;4.应用TargetScan5.1,PicTar及miRanda预测hsa-miR-17-92 cluster及其同源体靶基因,取三者预测结果的交集,进一步进行功能注释和Pathway富集分析.结果 1.现有研究提示hsa-miR-17-92 cluster及其同源体在脂肪细胞分化、肿瘤疾病、心脏及肺发育、免疫系统与血管形成等生物学过程中有重要作用;2.hsa-miR-17-92 cluster及其同源体进化上高度保守,根据种子序列同源性可分为4类,且在多物种间非常保守;3.hsa-miR-17-92 cluster及其同源体预测靶基因的功能与细胞周期、细胞黏附、Wnt、TGF-β信号、p53、丝裂原活化蛋白激酶等信号通路有较大的相关性,可能参与了前列腺癌、胰腺癌、结肠癌等多种疾病通路.结论 通过对hsa-miR-17-92 cluster及其同源体系统的生物信息学分析,初步阐明了hsa-miR-17-92 cluster及其同源体的基本生物学特征,并为hsa-miR-17-92 cluster后续研究提供了功能与机制的线索.     

饮食诱导肥胖大鼠下丘脑CIS和SOCS-3的mRNA表达

观察饮食诱导肥胖(diet-induced obese,DIO)大鼠下丘脑细胞因子诱导的含SH2区域的蛋白(cytokine in-ducible SH2 containing protein,CIS)与细胞因子信号转导抑制因子-3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS-3)mRNA表达的变化.将雄性6周龄SD大鼠,随机分为基础饮食组和高脂饮食组,饲养9周后处死.采用RT-PCR技术检测下丘脑CIS mRNA与SOCS-3 mRNA表达,结果表明高脂组大鼠下丘脑CIS mRNA、SOCS-3 mR-NA表达水平显著高于基础饮食组(P＜0.05).提示CIS、SOC-3可能参与DIO大鼠肥胖的发病机制.     

脂肪细胞分化的表型特征、分子标志和调控

近年来脂肪细胞内分泌学说和干细胞学说引人注目,与其密切相关的脂肪细胞分化过程及 其调控机制再次成为研究热点。脂肪细胞分化不同阶段有各不相同的表型特征、分子标志和调控机制。 该文对上述三方面的研究进展进行简单综述。     

GADD45β基因在脂肪细胞分化过程中的表达及肿瘤坏死因子-α对其的调节作用

目的观察3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中生长抑制和DNA损伤诱导家族45β(GADD45β)基因mRNA表达水平的变化,探讨TNF-α对成熟脂肪细胞中GADD45β基因表达水平的调节作用。方法体外培养3T3-L1脂肪细胞,在诱导3T3-L1脂肪细胞分化成熟的基础上,应用重组TNF-α干预分化成熟的脂肪细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测诱导分化不同时段及TNF-α干预后不同时间脂肪细胞中GADD45β基因表达水平。结果随脂肪细胞逐渐分化成熟,GADD45β基因mRNA表达水平渐降低。GADD45β基因表达水平除在细胞分化d1~7、d8~10各时段内差异无显著意义(P>0.05)外,余各时段之间表达水平差异均具有显著意义(P<0.05)。不同质量浓度重组TNF-α(0.1~10.0μg/L)均能显著促进成熟脂肪细胞中GADD45β基因mRNA的表达。TNF-α质量浓度为0.1μg/L时,GADD45β基因表达水平6 h内上升51.39%,24 h内上升100.15%;TNF-α质量浓度为1.0μg/L时,GADD45β基因表达水平6 h内上升44.15%,24 h内上升100.63%;TNF-α质量浓度达10.0μg/L,GADD45β基因表达水平6 h内即上升104.26%,24 h内上升122.17%。结论GADD45β基因可能参与脂肪细胞分化及脂质形成过程;TNF-α对成熟脂肪细胞中GADD45β基因表达具有促进作用,其促进效应总体趋势呈现时间依赖性特征。     

解偶联蛋白4基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化中的表达水平

目的　观察 3T3 L1脂肪前体细胞诱导分化过程中解偶联蛋白 4 (UCP4 )基因表达水平变化 ,探讨UCP4基因与肥胖发生之间的关系。方法　体外培养 3T3 L1细胞 ,诱导细胞分化 ,采用RT PCR技术在细胞分化成熟的不同时段检测脂肪细胞中UCP4基因mRNA表达水平。结果　UCP4基因高表达于 3T3 L1脂肪前体细胞中 ,随细胞分化成熟该基因表达水平渐下调。UCP4基因表达水平在诱导分化前 (d - 1)至d0、d0～ 3、d4～6、d7～ 8、d9～ 10内无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,余各时段表达水平均有显著差异 (P均 <0 .0 1)。结论　UCP4基因与肥胖发生相关 ,其在 3T3 L1细胞分化过程中表达逐渐下调可能有利于脂肪细胞的脂质积聚     

双侧海马注射神经肽Y Y2受体反义基因对大鼠学习记忆影响的初步探讨

目的：探讨神经肽YY2(NPY Y2)受体在大鼠学习记忆中的作用。方法：双侧海马插管，注射Y2受体的反义、错义寡核昔酸或生理盐水，采用跳台法记录训练期的错误次数(学习成绩)、记忆测试期的潜伏期和错误次数(记忆成绩)。结果：注射Y2受体反义寡核苷酸组大鼠训练期的错误次数较对照组无显著性差别，而记忆测试期的潜伏期较对照组显著缩短，错误次数显著增加，提示该组大鼠记忆能力受到显著损害。结论：NPY Y2受体参与了大鼠的记忆形成过程。