78例小儿肾病综合征患儿的钙、维生素D、甲状旁腺功能及骨代谢研究

本文追踪观察了78例不同病情、病期及病程肾病综合征(NS)患儿血清离子钙、25-羟胆骨化醇、肾源性环磷酸腺苷、尿Ⅰ型胶原交联氨基末端肽及骨钙素变化。结果提示:(1)NS患儿存在钙、维生素D、甲状旁腺功能及骨代谢紊乱,尤以激素耐药持续不缓解及肾功能不全者显著;(2)大剂量强的松应用是促成NS患儿骨代谢紊乱的重要因素。     

X连锁型Alport综合征女性COL4A5基因型及表型分析

目的 认识Alport综合征（AS）女性临床表型以及基因型特征。方法 AS女性共9例,年龄2－62岁;临床表现以血尿为主,伴蛋白尿（＋）－（＋＋）,除1例血BUN和肌酐升高,其余患者在进入本研究时肾功能均正常。未发现典型的眼部病变及感音神经性耳聋。AS男性共11例,年龄2－28岁;临床表现为血尿、蛋白尿（＋）－（＋＋＋＋）,2例进入本研究时（分别为17岁和28岁）已出现尿毒症或因尿毒症已行肾移植;7例伴有感音神经性耳聋,2例伴有眼部病变。以正常皮肤组织对照4例、正常肾组织对照2例及健康成人6例基因组DNA为对照。应用间接免疫荧光学方法,检测8／9例AS女性和9／11例AS男性皮肤基底膜、3／9例AS女性和6／11例AS男性肾脏基底膜Ⅳ型胶原α5链。应用PCR－SSCP 方法分析全部研究对象的COL4A5基因全部51个外显子,出现多态性的外显子直接测序分析。结果 AS女性与AS男性相比,临床症状相对轻,少有出现肾功能减退,多不伴有肾外症状。（1）AS女性皮肤和肾脏基底膜α5（Ⅳ）链均为间断阳性,而正常对照为连续阳性、男性AS表现为完全阴性。（2）PCR－SSCP分析显示5／9例女性AS患者分别在第4、9、20、39和第46外显子扩增产物的DNA条带出现特殊的迁移类型：DNA单链既有与正常对照的DNA迁移率相同的条带,同时还有不同于正常对照的DNA单链条带。（3）其中1例AS女性第4外显子DNA序列分析显示两种序列,一种与正常序列相同,另一种DNA序列出现C→A碱基替代突变。结论 X连锁型女性AS基因异常的特点为“杂合”,这种“杂合”状态可能成为女性AS临床表型相对较轻的分子基础。     

寡而大肾发育不良患儿HNF-1β基因及PAX2基因的突变分析

目的 检测、分析寡而大肾发育不良患儿的HNF-1β基因及PAX2基因,从单基因突变的角度探索寡而大肾发育不良的发病机制.方法 对1例临床以及肾脏病理确诊的寡而大肾发育不良患儿及其父母进行研究.提取患儿及其父母的外周血白细胞基因组DNA,PCR扩增HNF-1β基因9个外显子及PAX2基因12个外显子,测序并分析序列.结果 患儿及其父母的HNF-1β基因及PAX2基因均未发现致病性突变.结论 HNF-1β基因及PAX2基因不是该寡而大肾发育不良患儿的致病基因,该病发病机制还有待于进一步研究.     

基底膜α(Ⅳ)链染色正常的Alport综合征基因突变特点

目的　检测、分析编码基底膜Ⅳ型胶原α5链基因COL4A5突变及其特点 ,正确理解α5 (Ⅳ )链免疫荧光学检查结果及意义。方法　报告 1例 7岁男性患儿 ,血尿半年 ,肾功能、听力及眼部检查均正常 ;肾脏病理电镜示基底膜大部分均匀变薄 ;有血尿、肾功能不全家族史。应用间接免疫荧光学方法检测该患儿肾脏基底膜α3(Ⅳ )、α4 (Ⅳ )和α5 (Ⅳ )链以及皮肤基底膜α5 (Ⅳ )链。应用逆转录 聚合酶链反应和直接测序的方法分析α5 (Ⅳ )链mR NA ,应用PCR和直接测序方法分析COL4A5基因。结果　患儿肾小球基底膜α3(Ⅳ )、α4 (Ⅳ )和α5 (Ⅳ )链以及皮肤基底膜α5 (Ⅳ )链染色均正常。mRNA和基因组DNA分析均证实碱基替代突变 (917G >A) ,导致α5链第 2 39位甘氨酸被精氨酸取代 ,为新发现的突变。结论　首次报道了皮肤和肾小球基底膜α5 (Ⅳ )链染色正常 (阳性 )的我国X连锁型Alport综合征男性患者COL4A5基因突变及特点。提示应正确应用和理解基底膜α5 (Ⅳ )链免疫荧光学检查结果 ,X连锁型Alport综合征男性患者皮肤和肾小球基底膜α5 (Ⅳ )链染色即便正常 (阳性 ) ,当家族史及其它临床资料仍怀疑Alport综合征时 ,应进行COL4A5基因的检测和分析。     

检测基底膜Ⅳ型胶原α链对Alport综合征诊断的意义

Alport综合征(AS)是一种进行性的遗传性肾脏病,患者因肾功能进行性减退,而需接受透析治疗和肾移植以维持生命。来自美国部分地区的资料曾显示AS发生率约为10～20/10万,我国尚无有关AS发病率的报道。因而AS预后差、危害大,并不罕见。     

LPS及IL-1ra对系膜细胞产生一氧化氮及增殖的影响

目的 :观察脂多糖 (LPS)对体外培养的系膜细胞 (GMC)产生NO的影响及这一过程对GMC增殖的影响。方法 :用培养的第一、二代SD大鼠肾小球系膜细胞进行实验 ,分别加入LPS或LPS加白细胞介素 - 1受体拮抗剂 (IL - 1ra) ,2 4h后用经典的Griess方法测定培养上清中亚硝酸盐含量 ,用 [3 H]-TdR掺入率测定GMC的增殖 ,狭缝和Northern杂交测定iNOSmRNA表达。结果 :LPS刺激后 ,GMC出现iNOSmRNA的表达及亚硝酸盐增多 [(0 6 4± 0 2 5 )nmmol/ 10 4 细胞vs (0 12± 0 0 6 )nmmol/ 10 4 细胞 ],GMC增殖 (3735± 1177 9vs 1785± 2 80 6 ) ;LPS加IL - 1ra组 ,iNOSmRNA表达比LPS组减少 40 % ,上清亚硝酸盐含量更高 [(3 2 8± 0 33)nmmol/ 10 4 细胞 ],GMC增殖被抑制 (818± 77 2 7)。结论 :LPS诱导GMCiNOSmRNA表达及亚硝酸盐增多 ,并有GMC增殖。IL - 1ra部分拮抗iNOSmRNA的表达 ,但亚硝酸盐产量更高 ,GMC增殖被抑制     

Immunofluorescence study of type Ⅳ collagen α chains in epidermal base-ment membrane : application in diagnosis of X-linked Alport syndrome

ＩｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｔｕｄｙｏｆｔｙｐｅⅣｃｏｌａｇｅｎαｃｈａｉｎｓｉｎｅｐｉｄｅｒｍａｌｂａｓｅ┐ｍｅｎｔｍｅｍｂｒａｎｅ：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆＸ┐ｌｉｎｋｅｄＡｌｐｏｒｔｓｙｎｄｒｏｍｅＤｉｎｇＪｉ...     

中国Alport综合征表型和基因型特征

目的：分析并探讨我国Alport综合征（AS）患者临床表型和基因型特征。方法：以50例确诊为AS的患者（男32例,女18例;年龄1-30岁,平均10岁）及部分家系成员的主要临床表现、肾功能检查结果、家系调查情况、肾活检、以及肾和皮肤活检组织的基膜α（Ⅳ）链的表达作为临床表型分析素材。应用PCR-SSCP和PCR、直接DNA测序的方法筛查、分析基因突变。结果：本组病例显示AS患者几乎均表现有血尿（96%）,多数（84%）血尿为肾小球性;伴有蛋白尿或肾病水平蛋白尿的患者分别为82%和22%。检测到感音神经性耳聋和眼部病变的患者较国外报道相对低（31%和16%vs50%和15%-30%）。多数AS（82%）属于青少年型。94%的皮肤活检α5（Ⅳ）链染色支持X连锁型AS诊断。COL4A5基因分析显示以基因小突变为主;1例AS患儿基因为太缺失,而且缺失涉及COL4A5和OL4A6两个基因,但不伴弥漫性平滑肌瘤。结论：认识我国AS临床表型和基因型特征有助于今后提高并纠正我们对AS认识、诊断乃至治疗水平。     

LPS及IL-1ra对系膜细胞产生一氧化氮及增殖的影响

目的:观察脂多糖(LPS)对体外培养的系膜细胞(GMC)产生NO的影响及这一过程对GMC增殖的影响。方法:用培养的第一、二代SD大鼠肾小球系膜细胞进行实验,分别加入LPS或LPS加白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra),24h后用经典的Griess方法测定培养上清中亚硝酸盐含量,用[³H]-TdR掺入率测定GMC的增殖,狭缝和Northern杂交测定iNOSmRNA表达。结果:LPS刺激后,GMC出现iNOSmRNA的表达及亚硝酸盐增多[(0.64±0.25)nmmol/10⁴细胞vs(0.12±0.06)nmmol/10⁴细胞],GMC增殖(3735±1177.9vs1785±280.6);LPS加IL-1ra组,iNOSmRNA表达比LPS组减少40%,上清亚硝酸盐含量更高[(3.28±0.33)nmmol/10⁴细胞],GMC增殖被抑制(818±77.27)。结论:LPS诱导GMCiNOSmRNA表达及亚硝酸盐增多,并有GMC增殖。IL-1ra部分拮抗iNOSmRNA的表达,但亚硝酸盐产量更高,GMC增殖被抑制。     

肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色法诊断Alport综合征

目的 探讨肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色方法 在Alport综合征(AS)患者诊断中的应用,从而为AS的诊断提供新的技术手段.方法 将对照组及已确诊的X连锁型、常染色体隐性遗传型AS及血尿息儿各2例肾组织分别进行石蜡切片Ⅳ型胶原α3和α5链免疫组织化学染色和冰冻切片的间接免疫荧光染色,比较分析染色结果 .具体方法 根据PV-9000试剂盒提供的实验方法 ,进行染色.采用高压锅加热、胃蛋白酶消化和蛋白酶消化3种抗原修复方法 分别对正常肾组织切片进行抗原修复,并比较其修复效果.免疫荧光染色采用间接免疫荧光染色法.结果 肾小球基底膜Ⅳ型胶原α3、α5链免疫组织化学染色在对照和血尿组为连续的线状阳性;在x连锁显性遗传型女性患儿为间断线状阳性,在男性患儿为阴性;在常染色体隐性遗传患者均为阴性,在肾小囊及部分肾小管基底膜上Ⅳ型胶原α5链为阳性.结果 均与免疫荧光染色法结果 一致.结论 肾脏组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色法可用于诊断As,为诊断As提供了新的手段.