革兰阳性菌肽聚糖对人嗜碱性粒细胞中TLR3、TLR9mRNA的上调作用

目的:探讨Toll样受体(TLR)的配体肽聚糖(PGN)、聚肌苷酸_聚胞苷酸(PolyI_C)、脂多糖(LPS)和含有去甲基化的寡核苷酸序列(CpGDNA)对嗜碱性粒细胞中TLR2～4和TLR9mRNA表达的调节作用。方法:用实时定量_逆转录聚合酶链反应检测PGN、PolyI_C、LPS和CpGDNA刺激人嗜碱性粒细胞系(KU812)后,TLR2～4和TLR9mRNA表达的变化。结果:PGN刺激KU812细胞后,TLR3和TLR9mRNA的表达与未刺激组比有统计学意义(P<0.05);而PolyI_C、LPS和CpGDNA刺激KU812细胞后,细胞中TLR2～4和TLR9的mRNA与未刺激组比无统计学意义(P>0.05)。结论:革兰阳性菌的感染可能增加人嗜碱性粒细胞对病毒或其它细菌感染的敏感性。     

应用双重免疫标记技术鉴定肥大细胞亚型

特异性类糜蛋白酶 (ｃｈｙｍｅｓｅ)的发现提供了准确鉴定肥大细胞 (ＭＣ)亚型的机会。根据其分泌颗粒的特异性及蛋白酶存在的差异 ,人肥大细胞可分为两型 :Ｔ型 ,只含有类胰蛋白酶 ,无类糜蛋白酶 ;ＴＣ型 ,既含类胰蛋白酶 ,又含类糜蛋白酶[1] 。肥大细胞类胰蛋白酶及类糜蛋白酶的发现、提纯及特异性抗体的产生也为与肥大细胞有关疾病的研究开辟了广阔的前景。在继续肯定肥大细胞是过敏症 (ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ)的初级反应细胞 (ｐｒｉｍａｒｙｅｆｆｅｃｔｃｅｌｌｓ)的同时 ,发现肥大细胞可能与其他许多疾病有关。因此 ,在成功地产生了…     

GM-CSF对肥大细胞P815蛋白酶激活受体表达的影响

目的 蛋白酶激活受体(PARs),为G蛋白偶联受体(GPCR)家族中的新成员,参与过敏反应的发生,粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)具有调节免疫应答的功能,然而GM-CSF对肥大细胞PARs表达的影响还不甚清楚.因此本研究探讨GM-CSF对肥大细胞P815 PARs表达的影响情况.方法 肥大细胞P815激发后,收集各时间点的细 .胞.细胞处理后采用实时定量PCR和流式细胞术的方法在信使核糖核酸(mRNA)和蛋白水平检测PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4表达情况.结果 GM-CSF上调PAR-2蛋白和mRNA在肥大细胞P815上的表达;GM-CSF上调PAR-1和PAR-3 mRNA在肥大细胞P815的表达;GM-CSF抗体的应用可以阻断GM-CSF对PARs蛋白表达的调节作用.结果 GM-CSF能够调节肥大细胞PARs表达,二者可能在过敏反应和炎症中存在更加复杂的相互作用.     

蛋白酶激活受体-2介导的呼吸道上皮细胞活化在哮喘中的作用

蛋白酶激活受体(PAR)是近年来新发现的一个受体家族，其中PAR-2对呼吸道上皮细胞功能的影响及其在哮喘中的作用正受到越来越多的关注。作者就PAR-2的结构、激活剂及生物学功能，尤其是PAR-2介导的呼吸道上皮细胞活化及其在哮喘中的可能作用作一综述。     

肿瘤坏死因子调节的肥大细胞蛋白酶激活受体表达分析

目的 检测肿瘤坏死因子(TNF)引起的肥大细胞蛋白酶激活受体(PAR)-1，2，3，4表达。方法 肥大细胞P815培养后以不同浓度的TNF激发肥大细胞，在不同时间点收集细胞，给予聚乙二醇辛基苯基醚( Triton X-100)非Triton X-100处理后用流式细胞术和激光共聚焦方法检测肥大细胞蛋白酶激活受体的表达。结果 TNF激发肥大细胞2h、6h和16 h后，Triton X-100与非Triton X-100处理后，肥大细胞PAR-1，3表达均无明显变化；但TNF以浓度依赖方式上调P515肥大细胞PAR-2，4表达(P＜0.05)；上述各时间点检测PAR-1，2，3表达情况，Triton X-100处理组与非Triton X-100处理组检测结果无明显差异，但PAR-4表达结果显示Triton X-100处理组表达强于非Triton X-100处理组。结论 TNF可以上调P815肥大细胞PAR-2，4表达，但对PAR-1，3表达的调节作用不明显，Triton X-100处理和非Triton X-100处理不影响TNF调节的肥大细胞PARs表达的检测结果。     

花粉症患者血浆IL-18 IL-4 IFN-γ IgE和嗜酸粒细胞阳离子蛋白水平的相关性研究

目的探讨花粉症患者血浆白细胞介素(IL)-18、IL-4、干扰素(IFN)-γ、IgE及嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)水平的相关性及临床意义.方法选择花粉症患者89例,分为缓解期组和发作期组,并取健康对照者30例.应用酶联免疫吸附试验和UniCAP系统检测各组血浆IL-18、IL-4 、IFN-γ水平和sIgE、tIgE、 ECP水平.结果①发作期组血浆tIgE 和ECP水平明显高于缓解期组和对照组(均P<0.01);发作期组和缓解期组之间血浆sIgE水平差异无统计学意义(P>0.05),但均明显高于对照组(均P<0.01).②发作期组血浆IL-18、IL-4水平明显高于缓解期组和对照组(均P<0.01),缓解期组IL-18水平也明显高于对照组(P< 0.01).③发作期组血浆IL-18与IL-4、tIgE、ECP分别呈显著正相关,而IL-4、tIgE分别与IFN-γ呈显著负相关.IL-18与IFN-γ、sIgE水平之间不存在相关性.结论花粉症患者血浆IL-18与 tIgE、IL-4、ECP水平增高且存在显著相关性,提示IL-18可能参与气道的过敏性炎症反应.     

一种高效表达和快速纯化重组人IL-10的原核载体系统

目的 探讨一种在大肠杆菌中高效表达和简单纯化重组人白细胞介素10(IL-10)的方法。方法 构建重组人IL-10表达载体pBAD／Thio-TOPO-IL10，它编码1个Mr34700融合蛋白即硫氧还蛋白-IL10。含表达质粒pBAD/Thio-TOPO-IL10的工程菌经阿拉伯糖诱导、37℃培养，上述融合蛋白得到表达，表达产物经固化Ni^2 树脂亲和层析纯化，用肠激酶从融合蛋白中切下靶蛋白IL-10。结果 硫氧还蛋白-IL10融合蛋白在大肠杆菌中的表达效率达50%，并且可从细菌粗提物中一步纯化融合蛋白。结论 它为大批量用细菌表达真核蛋白及纯化提供了一种快速简便而又切实可行的方法。     

葎草及豚草过敏原嵌合基因的创建及其抗原性评价

目的 构建一种嵌合过敏原，同时保有葎草和豚草过敏原的特征，而其抗原性得到改变。方法 以业经克隆到葎草和豚草过敏原基因片段的混合物为模板，利用桥式PCR和重叠引物法，扩增得到嵌合基因，利用测序、蛋白表达及抗原性分析软件对所得嵌合基因编码蛋白与MHCⅡ类分子的结合表位进行评价。结果 通过以上方法获得嵌合基因3例，序列分析表明，3例嵌合基因AL03-1、AL03-2及AD03-4分别与原始克隆LCM9、LCS13（LCM20）及D03具有较高的同源性，而其抗原性分别比相似的原始克隆略强、略强及明显增强，融合表达带型与原始克隆的也基本一致。结论 采用桥式PCR及重叠引物法，嵌合基因及其表达载体得到成功构建，所得的嵌合基因将满足不同体质或不同免疫力的人群、不同免疫治疗阶段的脱敏治疗的临床需要。     

白细胞介素10超家族的研究进展

白细胞介素 10 (IL 10 )是一种具有抗炎和免疫调节作用的细胞因子。最近发现的IL 19、 2 0、 2 2、 2 4、 2 6、 2 8和 2 9等与IL 10具有相似的结构 ,它们同属于一个IL 10相关的细胞因子超家族。但其功能各异 ,IL 2 0诱导角质细胞增殖 ,与牛皮癣的发生有关 ;IL 2 2诱导急性期反应蛋白的表达 ;IL 2 4对肿瘤生长有抑制作用 ;IL 2 8和IL 2 9具有抗病毒活性 ;而IL 19和IL 2 6的功能还有待进一步研究。这些细胞因子可能在炎症、变态反应性疾病及肿瘤等的治疗方面有着潜在的应用前景     

哮喘支气管黏膜中类胰蛋白酶的表达增强

目的 观察含类胰蛋白酶的肥大细胞在豚鼠支气管黏膜的表达和分布特征。方法 Dunkin Hartley豚鼠随机分为哮喘组(A组)和生理盐水组(B组)。用100m/mL卵蛋白进行致敏，并于致敏后第5周行抗原特异性支气管激发试验。激发后2h取各组豚鼠支气管组织标本，免疫组化染色以抗人类胰蛋白酶(Tryptase)单克隆抗体(AAl)为一抗，过氧化物酶标记的绵羊抗鼠IgG为二抗，并用联苯二胺(Diaminobenzidine，DAB)显色。仅选择阳性染色细胞进行计数。结果 鼠抗人Trvptase单克隆抗体即可识别人支气管Tryptase又可识别豚鼠支气管Tryptase。哮喘支气管组织中Tryptase阳性细胞数明显多于正常支气管组织。相似地，支气管激发试验后的豚鼠支气管组织中的肥大细胞数要比生理盐水吸入组多出2．0倍以上。结论 抗人Tryptase单克隆抗体可以用于识别豚鼠支气管的肥大细胞。哮喘者和激发试验阳性的豚鼠支气管肺组织中的Tryptase阳性肥大细胞数明显多于正常支气管组织，表明肥大细胞在支气管哮喘发病机制中可能起重要作用。