人肥大细胞的IgE依赖性组胺和类胰蛋白酶分泌

目的　利用人结肠组织的肥大细胞和肥大细胞激活的体外研究系统评价人肥大细胞释放类胰蛋白酶和组胺的能力及其机制。方法　经酶悬浮的人结肠肥大细胞与抗IgE抗体共同培养后记录浓度相关曲线和时间关系曲线。类胰蛋白酶用酶联免疫吸附试验的方法测量 ,而组胺则由一种以玻璃纤维为基础的荧光比色法测量。结果　抗IgE抗体可引起浓度相关性的组胺和类胰蛋白酶释放 ,最大组胺和类胰蛋白酶分泌量分别比基础分泌量超出 2 .7和 2 .5倍以上。抗IgE抗体的作用从加样后 10s开始 ,6min后达高峰并至少持续 15min。百日咳毒素和代谢抑制剂能够分别抑制抗IgE抗体引起的组胺和类胰蛋白酶释放。百日咳毒素还能够减少自发性类胰蛋白酶释放。结论　人结肠肥大细胞在受到抗IgE抗体刺激时具有平行释放类胰蛋白酶和组胺的能力 ,这个过程与肥大细胞膜G蛋白偶联受体的激活有关 ,并消耗能量。肥大细胞自发性释放组胺和类胰蛋白酶的功能可能是通过不同的机制实现的。     

蛋白酶激活受体在炎症中的作用

蛋白酶激活受体(Proteinase-activated receptors,PARs)是G蛋白偶联受体家族的一员,介导跨膜信号转导并调节 细胞的功能。它被激活后参与许多疾病的发生和发展过程,尤其在炎症反应中所起的作用受到人们越来越多的关注。     

肝素对人肥大细胞组胺分泌的调节作用

目的　研究肝素对人肥大细胞组胺释放的影响。方法　经酶消化后的肺和扁桃体组织的细胞成份同肝素、抗人IgE抗体或钙离子导入剂共同培养 ,以特制的纤维玻璃为基础的方法测量组胺。结果　经 15和 4 5min培养 ,肝素对人肺和扁桃体组织肥大细胞组胺释放无明显影响。而将肝素与抗IgE抗体同时加入酶悬浮的肺肥大细胞中 (预培养时间为 0min) ,肝素可抑制 5 0 %的抗IgE抗体诱导的组胺释放 ,且抑制率与肝素浓度呈正相关。肝素对抗IgE抗体引起的扁桃体肥大细胞的组胺释放无抑制作用 ,对钙离子导入剂诱导的肺和扁桃体的肥大细胞组胺释放无明显影响。结论　本实验首次发现肝素可以抑制抗IgE抗体诱导的人肺肥大细胞组胺释放 ,因此在肺部的变态反应性炎症中可能起到一定的预防和治疗作用     

类胰蛋白酶抑制剂对人大肠肥大细胞组胺释放的影响

目的 :研究类胰蛋白酶抑制剂 (TPI)对人大肠肥大细胞释放组胺的影响。方法 :大肠组织经胶原酶和透明质酸酶消化后 ,将细胞成分用全HBSS重新悬浮。肥大细胞在LP4试管中于37℃条件下与各种刺激剂反应 15min而完成激发过程。激发液中的组胺水平用以玻璃纤维为基础的荧光方法测定。结果 :4种TPI中 ,高浓度的亮抑酶肽素和鱼精蛋白可刺激人大肠肥大细胞释放组胺 ;而TLCK和乳铁蛋白则无明显的刺激作用。 4种TPI均可以剂量依赖的方式抑制抗IgE抗体诱导的大肠肥大细胞释放组胺。最大浓度的亮抑酶肽素(2 0 0mmol/L)、TLCK(10 0mmol/L)、乳铁蛋白 (30mmol/L)和鱼精蛋白 (10 0mg/L) ,可分别抑制 4 8.7%、36 .7%、4 0 .2 %和 34.1%的组胺释放。在 37℃条件下 ,将 4种TPI同大肠肥大细胞预培养 2 0min ,与未进行预培养相比较 ,它们对抗IgE抗体诱导的组胺释放无明显改变。 4种TPI还可抑制CI诱导的组胺释放 ,抑制范围在 2 5 %～ 32 %之间。与抗IgE抗体诱导的组胺释放则不同 ,与大肠肥大细胞预培养 2 0min ,与未进行预培养相比较 ,亮抑酶肽素和TLCK对CI诱导的组胺释放的抑制作用明显增强 ;而鱼精蛋白则无此作用。结论 :我们首次发现TPI可抑制人大肠肥大细胞IgE抗体依赖和非IgE抗体依赖的组胺释放 ,提示TPI可望成为炎症性肠     

以PLGA为佐剂的花粉过敏原疫苗特异性免疫治疗过敏性鼻炎的研究

目的探讨用聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)包载鱼尾葵花粉过敏原profilin蛋白的纳米疫苗特异性免疫治疗小鼠过敏性鼻炎的机制及疗效。方法将30只BALB/c小鼠随机分为5组:正常组、模型组、纳米疫苗治疗组、空白纳米治疗组及蛋白治疗组,每组6只。分别在第0、7、14天致敏小鼠,除正常组外,其余4组小鼠每次经腹腔注射50μg鱼尾葵花粉提取液和2mg Al(OH)3,正常组用PBS代替。致敏结束后,纳米疫苗治疗组、空白纳米组及蛋白治疗组分别使用PLGA-CmP纳米疫苗(含50μg profilin蛋白)、空PLGA纳米和50μg重组蛋白profilin经小鼠腹部皮下注射进行免疫治疗,每隔3d注射1次,共治疗5次。末次治疗后,取花粉粗浸液200μg分别滴鼻激发小鼠,每天1次,连续3d,激发结束后处死小鼠。小鼠激发后的30min内,观察并记录各组小鼠鼻部症状(鼻分泌物量、喷嚏次数及搔鼻)评分情况;检测血清中过敏原特异性抗体(IgE和IgG2a)及细胞因子(IL-4、IL-10和INF-γ)水平;观察鼻黏膜组织形态学变化。结果与模型组比较,蛋白治疗组及纳米疫苗治疗组小鼠鼻部症状评分、血清特异性IgE及IL-4水平均明显降低,纳米疫苗治疗组降低更明显,IgG2a、IL-10和INF-γ显著增加,纳米疫苗治疗组增加更明显(P<0.05或P<0.01)。结论以PLGA为佐剂的鱼尾葵花粉过敏原纳米疫苗可有效地抑制小鼠过敏性鼻炎的炎症反应,大大提高过敏原疫苗的治疗效果。     

白眉蝮蛇蛇毒中L-氨基酸氧化酶的分离及其诱导急性肺损伤的作用

目的: 从白眉蝮蛇蛇毒分离纯化L-氨基酸氧化酶,并研究其对肺组织的影响. 方法: 通过Heparin-Sepharose FF及Q-Sepharose HP从白眉蝮蛇蛇毒中分离纯化得到一个L-氨基酸氧化酶,命名为ABU-LAO. 给Balb/c小鼠静脉注射50 ,5,0.5 μg药物或生理盐水100 μL,每组6只,6 h或24 h后取材,肺组织常规切片,HE染色. 高倍镜视野下计算平均红细胞数(RBCs)、平均肺泡内多形核白细胞数(IAPLs)、平均肺泡隔多形核白细胞数(ASPLs);用图像分析仪测平均肺泡面积(MACA). 结果: 纯化ABU-LAO并在SDS-PAGE上测定其表观Mr约为60000. 与生理盐水组相比RBCs,IAPLs,ASPLs,MACA在注射ABU-LAO后有显著改变(P＜0.0125). 结论: 通过两步层析法分离纯化得到ABU-LAO,它能诱导小鼠发生严重的急性肺损伤.     

柏树花粉主要致敏蛋白Cup a 1的分离纯化

目的 提取和分离纯化柏树花粉主要致敏蛋白Cup a 1.方法 使用40 mmol/L NH4 HCO3缓冲液作为提取液对柏树花粉致敏蛋白进行粗提取,利用离子交换层析初步纯化其主要致敏蛋白Cup a 1,收集400 mmol/L NH4 HCO3组分的洗脱液,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对收...     

脂肪因子脂联素及其受体在类风湿关节炎炎性关节中高表达

目的 研究脂肪因子脂联素(AD)及其受体1,2(AdipoR1,R2)在类风湿关节炎(RA)患者关节液和滑膜组织中的表达.方法 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测23例RA和23例骨关节炎(OA)患者关节液中AD水平,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western-blot法分析AD,AdipoR1,AdipoR2在10例RA和10例OA患者滑膜组织中的表达.结果 RA关节液中AD含量约高于OA的2倍(P<0.05),RA滑膜组织中AD、AdipoR1 mRNA表达明显高于在OA中的表达(P<0.05),但两者AdipoR2表达差异无统计学意义.RA滑膜组织中AD和AdipoR1蛋白表达明显高于在OA中的表达,且AdipoR1表达明显高于AdipoR2(P<0.05);AdipoR2蛋白表达在RA和OA中差异无统计学意义.结论 RA炎性关节液和滑膜组织中AD和AdipoR1高表达,可能参与RA病理过程.     

组胺对人结肠肥大细胞类胰蛋白酶释放的调节作用

探讨组胺对人结肠肥大细胞类胰蛋白酶释放的调节作用。经酶消化后获取人结肠组织肥大细胞,激发后行多种干预实验。用酶联免疫吸附试验法测定类胰蛋白酶。结果发现组胺可诱导人结肠肥大细胞释放类胰蛋白酶,浓度为100μg/L时组胺释放量最大,为基础值的3．5倍。浓度为10μg/L时对人肥大细胞的刺激强度与10mg/L的抗IgE抗体相似。组胺的作用从加样后10s开始,5min后完成。百日咳毒素和抗霉素A联合2．脱氧-D-葡萄糖可显著抑制组胺诱导人结肠肥大细胞释放类胰蛋白酶。100及1000μg/L的组胺与抗IgE抗体或离子载体钙同时加入细胞中,诱导类胰蛋白酶释放的能力低于组胺单独作用组。结论为组胺可激活人结肠肥大细胞,还以自身放大机制调节肥大细胞的脱颗粒过程。     

哮喘患者痰中IL-18、IL-16、IL-8、嗜酸性粒细胞趋化因子水平和类糜蛋白酶活性的测定

目的：探讨哮喘患者IL-18、IL-16、IL-8、嗜酸性粒细胞趋化因子（eotaxin）的水平和类糜蛋白酶(chymase)活性。 方法： 采用夹心ELISA法检测痰中IL-18、IL-16、IL-8、eotaxin水平。Chymase活性测定：使用琥珀酰-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-硝基酰苯胺（SAAPP）作底物，采用酶标仪以410 nm波长连续监测吸光度的变化。 结果： Chymase活性测定：12/32（37.5%）的哮喘患者痰液中水解SAAPP的酶活性高于对照组，类糜蛋白酶抑制剂SBTI、α1-AT可分别抑制这种酶活性的71.9%和72.1%；急性期哮喘患者痰中IL-18、IL-16、IL-8和eotaxin值均高于对照组；相关性分析表明IL-8与IL-16(r=0.55, P<0.05)和eotaxin(r=0.41, P<0.05)之间存在弱正相关； IL-18与IL-16之间存在显著正相关(r=0.64, P<0.01)；IL-18与IL-16均与eotaxin有显著正相关（r分别为0.66和0.64, P<0.01）；eotaxin、IL-18、IL-16、 IL-8与嗜中性粒细胞、上皮细胞、淋巴细胞和巨噬细胞均无明显相关性。 结论： 哮喘患者痰液中IL-18、IL-16、 IL-8、eotaxin水平及chymase活性增高，表明它们在哮喘发病机制中可能起到一定的作用。