蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌MCP-1

目的探讨蛋白酶激活受体1(protease-activated receptors1,PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)分泌的影响.方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2、16 h.用ELISA方法检测上清液中的MCP-1水平.结果经过16 h的培养,PAR1激动剂SFLLR可引起浓度相关性MCP-1的释放增加,增加到300μmol/L时诱导MCP-1的释放量比基础分泌量增加了近12倍,反PAR1激动剂RLLFS不能引起MCP-1的释放增加.凝血酶也可引起浓度相关性MCP-1释放,凝血酶在浓度3 000 U/L时就可引起MCP-1释放量增加,10 000 U/L时诱导MCP-1的释放量达高峰,为基础分泌量的5倍.凝血酶抑制剂水蛭素可以抑制凝血酶对MCP-1的释放作用.时间相关曲线表明,从2 h起即可引起PAR1介导的MCP-1释放增加,16 h达高峰.结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌MCP-1,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用.     

类糜蛋白酶抑制剂对人结肠肥大细胞组胺释放的影响

目的　研究类糜蛋白酶抑制剂对人结肠肥大细胞释放组胺的影响。方法　用酶消化人结肠组织并分离细胞成份。激发过程在LP4试管中、37℃条件下完成。组胺水平用以玻璃纤维为基础的荧光方法测定。结果　类糜蛋白酶抑制剂ZIGPFM、TPCK和α1 抗胰蛋白酶无明显刺激人类结肠肥大细胞释放组胺的作用。 3种类糜蛋白酶抑制剂均可以剂量依赖性方式抑制抗IgE抗体诱导的组胺释放 ,最大浓度的ZIGPFM(1mmol·L-1)、TPCK(80mmol·L-1)和α1 抗胰蛋白酶(30mmol·L-1)可分别抑制 37%、2 6 %和 36 8%的组胺释放。在 37℃条件下同结肠细胞预培养 2 0min与无预培养相比 ,ZIGPFM和TPCK抑制抗IgE抗体诱导的组胺释放的作用略有增强。 3种类糜蛋白酶抑制剂均可以剂量依赖性方式抑制CI诱导的组胺释放 ,最大抑制范围在 2 3 6 %～ 35 %之间。在 37℃条件下同结肠细胞预培养 2 0min与无预培养相比 ,TPCK对CI诱导的组胺释放的抑制作用略有增强 ,但ZIGPFM则无此特点。结论　我们发现了类糜蛋白酶抑制剂可抑制人结肠肥大细胞IgE依赖性和非依赖性组胺释放 ,提示类糜蛋白酶抑制剂可能有抗炎症性肠病的作用 ,可研究开发     

蛋白酶激活受体2激动剂诱导肺上皮细胞分泌IL-8

目的 探讨蛋白酶激活受体（PAR）-2激动剂对人上皮细胞白细胞介素-8（IL-8）分泌的影响。方法 人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内。并分别用不同浓度的PAR-2激动剂，反PAR-2激动剂进行刺激。刺激时间为2h、8h和16h。用ELISA方法检测上清液中IL-8的分泌水平。结果 经过16h的培养。PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO均可引起浓度相关性IL-8的释放增加，tc-LIGRLO引起的最大IL-8释放量达基础分泌量的6倍。反PAR-2激动剂对IL-8释放的影响较小。时间相关曲线表明。PAR-2激动剂的作用从2h开始，16h达高峰。结论 PAR-2激动剂是高效的人肺上皮细胞IL-8的促分泌剂。其拮抗剂有可能具有抑制呼吸道炎症的作用。     

蛋白酶激活受体-2激动剂对人皮肤和扁桃体肥大细胞释放组胺和类胰蛋白酶的影响

目的:研究蛋白酶激活受体-2(PAR-2)激动剂对人皮肤和扁桃体肥大细胞释放组胺和类胰蛋白酶的影响.方法:用PAR-2激动剂激发经酶悬浮的人皮肤和扁桃体肥大细胞,并分别测量类胰蛋白酶和组胺的释放量.结果:PAR-2激动剂丝-亮-异亮-甘-赖-缬(SLIGKV)可引起皮肤肥大细胞组胺释放,但对类胰蛋白酶释放无影响.相反,SLIGKV可引起扁桃体肥大细胞的类胰蛋白酶,而不是组胺释放.另外一种PAR-2激动剂反肉桂酰-亮-异亮-甘-精-亮-鸟-[酰胺](te-LIG-RLO-NH2)比SLIGKV-NH2诱导类胰蛋白酶和组胺释放的作用弱.结论:我们首次报道了皮肤和扁桃体肥大细胞具有在体外释放类胰蛋白酶的特性.皮肤和扁桃体肥大细胞释放类胰蛋白酶和组胺的差别揭示了一种新的肥大细胞对刺激产生反应的异质性的类型,提示人类肥大细胞至少有2种脱颗粒信号的自我放大机制.     

胰蛋白酶诱导肺上皮细胞分泌白细胞介素-8的作用

目的:探讨胰蛋白酶对人上皮细胞白细胞介素-8(IL-8)分泌的影响.方法:人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的胰蛋白酶和/或胰蛋白酶抑制剂进行刺激.刺激时间为2 h、8 h和16 h.用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平.结果:经过16 h的培养,胰蛋白酶可引起浓度相关性IL-8释放,胰蛋白酶在浓度1μg/L时就可引起IL-8的释放量增加,3 μg/L时诱导IL-8的释放量达高峰,为基础分泌量的5倍,但随着胰蛋白酶浓度的增加,IL-8的释放量反而下降.胰蛋白酶抑制剂可以抑制胰蛋白酶诱导IL-8释放的作用.时间相关曲线表明,胰蛋白酶从2 h起即可引起IL-8释放,16 h达高峰.结论:胰蛋白酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8,表明它能积极参与呼吸道的炎症过程.     

小儿哮喘及肺炎血浆白介素-18、-16、-4及IFN-γ水平的相关性研究及临床意义

目的探讨哮喘及肺炎患儿血浆白介素-18、-16、-4及IFNγ-水平的相关性及临床意义。方法哮喘患儿22例,肺炎患儿24例(重症组13例,普通组11例)。采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(SELISA)测定其血浆IL-18、IL-16、IL-4、IFNγ-水平。结果(1)哮喘组急性期血浆中IL-16低于非发作期(P<0.05)及对照组(P<0.01),非发作期高于对照组(P<0.01)。非发作期IL-4低于急性期及对照组(P<0.05)。血浆IL-18、IFNγ-无明显改变。急性期IL-18、IL-16、IL-4、IFNγ-水平存在相关性(P<0.01),IL-4与IFNγ-存在相关性(P<0.05)。(2)肺炎组急性期IL-18显著升高,重症组IL-18显著高于普通组(P<0.05)。重症组IL-16显著高于对照组(P<0.05)。各组间IL-4及IFNγ-无统计学差异(P>0.05)。急性期IL-18与IL-16、IL-4、IFNγ-之间存在高度相关性(P<0.01)。IL-16与IFNγ-存在相关性(P<0.05)。结论IL-18、IL-16、IL-4、IFNγ-参与了小儿哮喘和肺炎免疫病理过程。     

烙铁头蛇毒TM-N49诱导人肥大细胞释放组胺的作用

目的探索烙铁头蛇毒TM-N49对人肥大细胞释放组胺的诱导作用及其机制.方法用SP-Sephadex C-25,肝素凝胶,Superdex75分子筛及HPLC纯化TM-N49.将手术切除的人肺、大肠和扁桃体组织在37℃条件下用Ⅰ型胶原酶和Ⅰ型透明质酸酶消化,经悬浮后的细胞均匀地加入含TM-N49、刺激剂或缓冲液的试管中,进行激发实验并用荧光显色法测量上清液的组胺水平.结果纯化后的TM-N49在SDS-PAGE上呈一条带.TM-N49能诱导人肺、大肠和扁桃体肥大细胞发生剂量依赖性组胺释放.浓度为0.3μg/ml时,TM-N49就能诱导大肠肥大细胞显著性的组胺释放,但对于人肺肥大细胞来说,诱导它释放相同量组胺所需最低TM-N49浓度为3μg/ml,而对于扁桃体肥大细胞,TM-N49浓度为30 μg/ml时才能诱导它显著性的组胺释放.TM-N49诱导大肠和肺肥大细胞组胺的释放10min和8min时达高峰,而扁桃体肥大细胞的组胺释放则在16min时达高峰.人大肠、肺和扁桃体肥大细胞经代谢抑制剂和百日咳毒素预先处理后,浓度低于30μg/ml的TM-N49诱导其释放组胺的作用明显减弱,但当其浓度达到30μg/ml时,上述处理对TM-N49诱导人肥大细胞释放组胺的作用无影响.缺乏外源性钙、镁离子时,TM-N49诱导肥大细胞释放组胺的能力也明显减弱.结论TM-N49可能通过G蛋白偶联受体途径激活人肥大细胞或通过细胞毒等途径作用于肥大细胞,从而参与毒蛇咬伤人体后所发生的病理生理过程.     

酶消化法分离人肥大细胞及组织胺水平测定

肥大细胞数目增加及其介质浓度在体液中的增高已发现与支气管哮喘、过敏性鼻炎、过敏性皮炎及关节炎等疾病有关。但是 ,迄今为止研究人类肥大细胞体外激活及抑制的手段却十分有限。本研究采用的酶消化法悬浮肥大细胞技术 ,具有加样均匀、试验重复性好、经济、省时等优点 ;并且可与多种其他类型细胞相混合 ,因而既能用于观察对肥大细胞的直接刺激 ,又能观察间接刺激。将手术切除的人肺、皮肤、扁桃体及关节滑膜组织等在最低基本培养液中剪碎后 ,同胶原酶和透明质酸酶在 37℃摇动水浴箱中培养 6 0～ 75ｍｉｎ。再用孔径为 10 0 μｍ的筛网 ,将…     

Th22及其分泌的细胞因子在变应性鼻炎患者外周血中的表达

目的：检测变应性鼻炎(AR)患者外周血Th22及其分泌的细胞因子的表达情况并分析其相关机制。方法：本研究共纳入30例AR患者和30例健康志愿者(HCs),ELISA检测AR患者及HCs外周静脉血中IL-22含量。流式细胞术检测AR患者及HCs外周血中Th22比例,将AR患者外周血中的PBMC平均分为3组,分别为空白对照组、同型对照组(加入PEMouse IgG2a,k)和实验刺激组(TNF-α处理组),并应用流式细胞术检测TNF-α对AR患者外周血中Th22的影响。结果：与HCs相比,AR患者外周血中CD4~+T细胞、IL-22表达水平显著提高(P<0.05)且AR患者外周血中IL-22表达水平与CD4~+T细胞中Th22呈正相关(r=0.966,P<0.001);HCs外周血IL-22表达水平与CD4~+T细胞中Th22比例呈正相关(r=0.981,P<0.001);AR患者外周血实验刺激组CD4~+T细胞中Th22比例明显高于空白对照组(P<0.05)。结论：AR患者外周血中IL-22表达水平升高,CD4~+T细胞中Th22比例提高,且Th22的比例与IL-...     

夏秋花粉症患者血浆sIgE、类胰蛋白酶、IL-8, IL-12和嗜酸性粒细胞趋化因子水平测定及临床意义

目的:检测夏秋季花粉症(pollinosis)患者血浆类胰蛋白酶(Tryptase), IL-8,IL-12和嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)水平,探讨其临床意义. 方法: 夏秋花粉症患者37例,正常对照23例. 采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)检测IL-8, IL-12和嗜酸性粒细胞趋化因子水平, Unicap系统检测血浆类胰蛋白酶. 结果: ①花粉症患者血浆IL-8水平明显高于对照组(t=2.56,P＜0.05);②患者血浆IL-12水平明显低于对照组(P＜0.05);③患者血浆Tryptase和Eotaxin水平与对照组无显著差异(P＞0.05);④患者血浆Tryptase,IL-12和Eotaxin三者之间无相关性(P＞0.05),Tryptase与IL-8也无相关性(P＞0.05),而IL-8与IL-12间存在显著负相关(P＜0.01),IL-8与Eotaxin间存在明显正相关(P＜0.05). 结论: 花粉症的发生与肥大细胞及多种炎症细胞、炎症介质有关,其发病亦与Th1细胞下调机制有关.