转染小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子稳定表达细胞株的筛选与鉴定

用脂质体包裹纯化的小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子 (msBlyS)重组表达质粒 ,体外转染小鼠结肠癌细胞系CT2 6 ,通过Zeosin抗性筛选获得抗性的单克隆肿瘤细胞株。提取细胞总RNA做半定量RT PCR ,鉴定出高表达msBlyS的稳定细胞克隆 ,进一步做Western blotting鉴定和生物活性测定。转染后得到 8个单克隆抗性肿瘤细胞株 ,其中有 5个经RT PCR扩增出msBlyS目的条带。Western blotting显示该克隆株细胞裂解物可与抗msBlyS的抗体结合 ,在杂交膜上形成一条与预期蛋白分子量一致的条带。生物活性测定显示细胞分泌上清可共刺激(Costimulate)体外培养的B淋巴细胞增殖 ,这表明已成功转染并筛选出msBlyS稳定表达小鼠结肠癌细胞株 ,可以进一步用于msBlyS抗肿瘤作用的观察和研究。     

小鼠B细胞趋化因子原核表达与纯化

用多聚酶链反应 (PCR)扩增小鼠 B细胞趋化因子 (BL C)基因片断并导入 Bam H1和 Pst1两个酶切位点 ,插入到原核表达载体 PQE30中 ,构建重组质粒 p BL C- PQE30 ,并诱导相对分子量为 10 Kda的重组目的蛋白r BL C的表达 ,通过 Ni柱亲和层析纯化目的蛋白。双酶切和测序分析显示小鼠 B细胞趋化因子片断正确插入原核表达载体 PQE30中 ,重组蛋白 Western blot分析显示出特异性条带。提示已通过基因工程方法获得并纯化了小鼠B细胞趋化因子重组蛋白。     

异种VEGF疫苗免疫治疗联合化疗抗实体瘤的实验研究

目的探讨重组非洲爪蟾血管内皮细胞生长因子（Xenopus laevis vascular endothelial growth faclor，xVEGF）肿瘤疫苗免疫治疗，联合小剂量阿霉素化疗抗小鼠纤维肉瘤的作用。方法实验小鼠随机分成4组：xVEGF联合阿霉素组（简称联合用药组）、单用阿霉素组、单用xVEGF组、生理盐水对照组。观察各组肿瘤生长、小鼠生存率和毒副反应，并检测抗自身VEGF抗体、肿瘤微血管密度（Microvessel density，MVD）和肿瘤细胞凋亡等。结果联合用药组肿瘤明显小于单用阿霉素组和单用xVEGF组（P〈0．05），或生理盐水对照组（P〈0．01），联合用药组有3只小鼠肿瘤完全消退；接种肿瘤后48d，联合用药组小鼠生存率为100％，明显高于单用阿霉素组和单用xVEGF组生存率（P〈0.05），或生理盐水对照组（P〈0.01）。Western Blot和ELISPOT检测发现，联合组或单用xVEGF组小鼠产生了抗自身VEGF抗体，其分泌抗自身VEGF抗体的B细胞数量，与阿霉素组或生理盐水对照组相比，有显著性差异（P〈0．01）。联合用药组肿瘤MVD减少和细胞凋亡指数升高与三个对照组比较有显著性差异（P〈0．05）。结论异种同源蛋白质疫苗xVEGF与小剂量阿霉素联合治疗有协同增强的抗小鼠实体瘤的作用。     

个体化新抗原特异性T细胞过继免疫：任重道远，砥砺前行

近年来,肿瘤新抗原掀开了个体化免疫治疗的新篇章,作为基于新抗原个体化免疫治疗的重要组成部分,新抗原特异 性T细胞的过继输注（ACT）疗法备受瞩目。本文将首先从新抗原特异性T细胞ACT治疗应用策略及临床应用现状介绍新抗原 特异性T细胞ACT治疗这一新兴的精准免疫治疗的发展现状,然后从新抗原的预测、新抗原特异性T细胞筛选及扩增等方面系 统地总结新抗原T细胞ACT治疗所面临的阻碍和挑战,最后从优化新抗原预测、增加新抗原特异性T细胞数量和多样性、防止新 抗原特异性T细胞过度分化或死亡、缩短生产周期和减少生产成本及探索联合治疗方式等五个方面对该领域的未来发展机遇和 研究方向进行重点阐述。     

恶性肿瘤电化学治疗前后细胞周期分析及病理学改变

为探讨电化学疗法对肿瘤细胞的作用及治癌机理 ,采用流式细胞术及病理学方法 ,观察了 33例晚期癌症患者电化学治疗前后肿瘤细胞周期及病理学变化。结果 :电化学治疗后肿瘤各期细胞所占比例均明显降低 ,而细胞凋亡峰却明显增加 ,治疗后 G1 、G2 / M、S期的降低及凋亡峰的增加有显著的统计学差异 (P<0 .0 5 ) ;病理学结果亦支持电化学疗法对肿瘤细胞的杀伤作用。以上提示 ,电化学疗法能非选择性地杀伤包括肝癌、淋巴瘤、乳腺癌及皮肤癌在内的各种肿瘤细胞 ,能非选择性地杀伤各期肿瘤细胞 ,并诱导肿瘤细胞的凋亡 ;流式细胞周期分析可作为电化学疗法有效的判断指标。     

异种基质金属蛋白酶-2肿瘤细胞疫苗的制备与功能研究

目的 构建异种基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)肿瘤细胞疫苗，初步探讨疫苗的功能。方法 将鸡MMP-2转染到CT26细胞内制成肿瘤细胞疫苗，用MTT[四甲基偶氮唑盐，3-(4，5-dimetylthiazol-2-y1)-2，5-diphenyltetrazolium bromide3比色法检测转染后的细胞活性，在小鼠体内做疫苗的致瘤性实验和保护性实验。结果 用RT-PCR挑选出MMP-2表达量最高的细胞株作为研究对象。通过MTT比色法发现转染虽然增加了肿瘤细胞内MMP-2的表达，但是并没有改变肿瘤细胞的生长趋势。经过致瘤性实验和保护性实验，还初步发现疫苗可以起到抑制肿瘤生长和延长动物生存时间的作用。结论 异种基质金属蛋白酶-2肿瘤细胞疫苗构建成功，并且具有抗肿瘤的作用。