SEA和喉癌MAGE-A3基因重组真核共表达载体的构建和鉴定

目的构建超抗原SEA和喉癌来源的MAGE-A3基因共表达的真核表达载体,检测、鉴定其在293T细胞中的表达。方法分别用RT-PCR方法及人工化学合成法获得MAGE-A3和SEA基因片段,然后依次将MAGE-A3和SEA基因克隆至含内部核糖体进入位点的真核表达载体IRES序列的上、下游,构建成重组质粒pMAGEA3-IRES-SEA。经脂质体转染至293T细胞以后,用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹分别鉴定SEA、MAGE-A3基因的表达。结果限制性内切酶酶切分析证实MAGE-A3基因和SEA基因均正确地克隆在pMAGEA3-IRES-SEA中,基因测序结果与GenBank公布的MAGE-A3、SEA序列完全一致,实现了双基因的正确重组。重组质粒转染293T细胞后能检测到MAGE-A3、SEA基因的高水平表达。结论成功地构建了pMAGEA3-IRES-SEA真核表达质粒,并能在293T细胞中有效表达MAGE-A3和SEA蛋白,由此奠定了其作为抗喉癌DNA疫苗应用的基础。     

喉癌来源黑色素瘤抗原A3在小鼠黑色素瘤细胞模型的表达

目的:建立pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核质粒在小鼠黑色素瘤B16细胞稳定表达的肿瘤细胞模型。方法:将喉癌来源的黑色素瘤抗原A3(Melanoma-associated antigen A3,MAGE-A3)构建成真核质粒pIRES2-EGFP/MAGE-A3,脂质体法将pIRES2-EGFP/MAGE-A3转染小鼠黑色素瘤B16细胞,G418筛选阳性克隆,荧光显微镜检测阳性克隆中增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表达,荧光定量PCR(qRT-PCR)检查MAGE-A3在B16细胞中的转录。结果:pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核质粒转染B16细胞后筛选得到阳性克隆,可见融合蛋白表达产生明亮的绿色荧光,qRT-PCR可检测到MAGE-A3 mRNA的转录。结论:pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核质粒通过脂质体法能有效转染,并在B16稳定表达,成功建立了MAGE-A3肿瘤细胞模型。     

双侧声带麻痹的手术治疗与术式选择

目的探讨双侧声带麻痹治疗方式的选择与疗效。方法回顾分析本院自2000年1月—2007年12月收治的双侧声带麻痹患者16例手术治疗资料与术后随访情况。结果 16例双侧声带麻痹的患者总共接受了29次手术治疗。4例鼻咽癌放疗后患者接受1次气管切开术,其他12例患者总共接受了25次手术治疗,平均每人2.1次。术式包括:气管切开术、神经肌蒂移植术、喉声带外移术、支撑喉镜CO2激光声带手术及喉裂开单侧声带切除。结论目前针对双侧声带麻痹的手术治疗有多种术式可供选择,临床医生应结合患者具体情况为患者提供个性化的治疗方案。     

豚鼠变应性鼻炎模型的建立和观察

目的 了解变应性鼻炎的免疫、病理生理和形态学的改变.方法 用橄榄油将甲苯-2,4-二异氰酸酯配成10%溶液作为致敏剂,滴鼻,建立豚鼠变应性鼻炎模型8例.另8例正常豚鼠作对照.致敏结束、模型成功后取血,测定红细胞C3b受体花环率和红细胞IC花环率.取鼻中隔中黏膜,采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连结法行免疫组化染色,观察P物质在鼻黏膜中的分布.用双抗夹心ELASA方法 测定血清组胺的含量.鼻黏膜做光镜和透射电镜观察.结果 (1)鼻部症状评分比较,模型组高于对照组(P＜0.01).(2)模型组的红细胞C3b受体花环率和红细胞IC花环率均低于对照组(P＜0.05).(3)模型组比对照组鼻黏膜P物质阳性细胞染色加深,阳性颗粒增多,密度增大,阳性细胞计数增多(P＜0.05).(4)组胺含量高于对照组(P＜0.01).(5)光镜下见对照组鼻黏膜上皮层为正常的假复层纤毛柱状上皮.模型组黏膜上皮增生、转化、坏死,固有层和黏膜下层改变,并见特征性的嗜酸性粒细胞、肥大细胞浸润.(6)透射电镜见对照组鼻黏膜上皮细胞结构完整,纤毛微管整齐、清晰,胞质内细胞器丰富,嗜酸性粒细胞正常.模型组黏膜上皮、细胞、纤毛、微管、微绒毛改变,细胞体积、核、细胞器改变,肥大细胞、嗜酸性粒细胞改变,血管扩张.浆液腺体旺盛增生.结论 豚鼠变应性鼻炎模型在免疫、病理生理和形态学出现的改变与临床类似.     

变应性鼻炎患者舌下含服粉尘螨滴剂免疫治疗早期鼻分泌物嗜酸细胞计数变化及临床意义

目的探讨变应性鼻炎舌下含服粉尘螨滴剂免疫治疗早期鼻分泌物嗜酸细胞计数及与临床症状的关系。方法对43例行舌下含服粉尘螨滴剂免疫治疗的变应性鼻炎患者,在免疫治疗前及治疗后2、4、8周采集鼻腔分泌物,经涂片染色后计数鼻分泌物嗜酸细胞,并分析其与临床症状的可能相关性。结果舌下含服粉尘螨滴剂免疫治疗后4、8周鼻分泌物嗜酸细胞计数较免疫治疗前下降,差异有统计学意义(P0.05);免疫治疗后4周及8周主观症状有明显改善的患者鼻分泌物嗜酸细胞计数较免疫治疗前下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论舌下含服粉尘螨滴剂治疗变应性鼻炎时,鼻黏膜局部免疫状态的改变在免疫治疗后4周或更早的时间已经发生。     

紫草萘醌衍生物联合放射线照射抑制 人鼻咽癌细胞增殖和诱导凋亡

目的探讨紫草萘醌衍生物（SYUNZ 4）［3,11 bis(2 hydroxyethansulfanyl) 6 isohexeny lnaphthazarin］联合放射治疗对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）细胞生长的协同抑制作用及放疗增敏机制。方法人NPC高分化鳞状细胞癌细胞株CNE1和低分化鳞状细胞癌细胞株CNE2随机分为空白对照组、单纯SYUNZ 4组、单纯放射治疗组及SYUNZ 4联合放射线照射组共4组。单纯放射治疗组仅给予剂量4 Gy放射线照射,单纯SYUNZ 4组仅给予最大非细胞毒性剂量的SYUNZ 4液培养,SYUNZ 4联合放射线照射组在给予4 Gy的放射线照射后,立即给予最大非细胞毒性剂量的SYUNZ 4液培养;然后应用流式细胞术检测SYUNZ 4诱导CNE1和CNE2细胞凋亡的作用及其对细胞周期的影响。结果SYUNZ 4对CNE1和CNE2细胞均具有增殖抑制作用,且其作用呈浓度依赖性。与空白对照组相比,单纯放射线照射组及联合治疗组细胞增殖均受到抑制（P<0.05）,且前者G2/M期细胞比例明显增加（P<0.05）,后者S期及G2/M期细胞比例均显著增加（P<0.05）。与单纯放疗组相比,联合干预使CNE1和CNE2细胞增殖受到更明显地抑制（P<0.01）。与对照组相比,放射线照射导致细胞凋亡率明显增加（P<0.05）;而联合治疗组与单纯放疗组和空白对照组相比,联合干预使CNE1和CNE2细胞凋亡率明显增加,组间差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论紫草萘醌衍生物SYUNZ 4联合放射线照射能显著抑制人NPC细胞的增殖,并导致NPC细胞周期阻滞和诱导凋亡。     

灯盏花治疗突发性耳聋80例疗效观察

目的 观察灯盏花治疗突聋的疗效.方法 2002年1月至2007年10月我科采用灯盏花治疗突聋80例(86耳),将灯盏花50 mg加入5%GS 500 ml,2次/d,静脉滴注,以1周为1个疗程,治疗1-2个疗程后观察治疗突聋的结果 .结果 灯盏花治疗突聋疗效为91.25%,耳鸣疗效80%,眩晕97%.结论 灯盏花适用于突发性耳聋患者、突聋伴耳鸣、眩晕者.     

神经刺激器定位肌间沟臂丛神经干阻滞临床效果观察

目的探讨改良环状软骨上喉部分切除术对声门型喉癌T1b和部分T2的治疗。方法采用改良环状软骨上喉部分切除术对25例声门型喉癌患者进行治疗。结果术后4个月拔管率为100％、6个月进食无误咽。重建的声门裂宽度在0．5—0．8cm，呼吸正常，发音有嘶哑但表达清楚。结论改良环状软骨上喉部分切除术对于声门型T1b和部分T2的喉癌是一个有效的治疗手段，术后保留功能的结果可靠，基本上可以克服误吸和拔管困难两大并发症。     

声门型喉癌改良环状软骨上喉部分切除术

目的 探讨改良环状软骨上喉部分切除术对声门型喉癌T1b和部分T2的治疗.方法 采用改良环状软骨上喉部分切除术对25例声门型喉癌患者进行治疗.结果 术后4个月拔管率为100%、6个月进食无误咽.重建的声门裂宽度在0.5～0.8 cm,呼吸正常,发音有嘶哑但表达清楚.结论 改良环状软骨上喉部分切除术对于声门型T1b和部分T2的喉癌是-个有效的治疗手段,术后保留功能的结果可靠,基本上可以克服误吸和拔管困难两大并发症.