鼻咽癌中碱性成纤维细胞生长因子的实验研究

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子在鼻咽癌中的表达,探讨它与鼻咽癌的增生、浸润及转移的关系。方法在26例鼻咽癌及相应癌旁组织和10例正常鼻咽部黏膜组织中,应用 RT-PCR和免疫组织化学方法检测碱性成纤维细胞生长因子mRNA和蛋白质的表达。结果碱性成纤维细胞生长因子在鼻咽癌组织中高表达,在正常鼻咽部黏膜中低表达,差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论碱性成纤维细胞生长因子与鼻咽癌的生长、浸润及转移有密切关系。     

关于老化对C57BL／6J小鼠影响的电生理及形态学研究

老年性聋是伴随老化过程而出现的一种渐进性双侧对称的耳聋.已发现它与耳蜗形态学退行性改变相关,包括毛细胞、柱细胞、血管纹、螺旋韧带以及基底膜。但涉及年龄相关的盖膜生化组成改变的研究很少。事实上大量的研究表明盖膜的生化组成与其生理作用直接相关。因此,本文作者就老化对盖膜复合糖组成的作用进行了初步的研究。     

Hep-2细胞中bFGF及其双受体系统mRNA的表达

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其双受体系统串珠素(perlecan)和高亲和力酪氨酸激酶受体(FGFR)在人喉癌细胞Hep-2中的表达.方法:培养Hep-2和正常永生化表皮细胞系HaCaT细胞,应用RT-PCR方法检测bFGF、perlecan及FGFR1～4 mRNA的表达.结果:bFGF、peflecan、FGFR1、FGFR2及FGFR4 mRNA在Hep-2细胞中的相对表达量高于HaCaT细胞(t分别为17.540、19.684、13.371、12.692和12.586,P均<0.05).2种细胞中均未检测到FGFR3 mRNA.结论:bFGF、perlecan及FGFR与喉癌细胞的生长关系密切.     

镁离子对谷氨酸诱发的螺旋神经节细胞损伤的保护作用

谷氨酸是耳蜗传入神经递质之一,但近来研究表明,谷氨酸对中枢和外周的多种神经细胞又具有兴奋性细胞毒性作用.而研究表明镁离子对中枢神经系统的损伤具有保护作用.然而镁离子是否也同样对体外培养的螺旋神经节神经元具有保护作用呢？本实验观察谷氨酸对体外培养的耳蜗螺旋神经节细胞损伤以及镁离子对该效应的影响,同时观察了镁离子和谷氨酸对静息状态下的耳蜗螺旋神经节细胞内钙离子浓度的影响,旨在为治疗为将来感音神经性聋的治疗提供一些新的策略.     

过氧化氢体外诱导大鼠螺旋神经节细胞死亡机制的研究

目的:观察过氧化氢(H2O2)对大鼠螺旋神经节细胞(SGCs)的作用,探讨氧自由基损伤SGCs的机制.方法:新生大鼠SGCB原代培养,取培养第4天细胞加入H2O2,浓度分别为0、100、200、500μmol/L,作用2、4、6 h.光镜下观察细胞形态改变,hochest33258及PI染色,计数受损伤细胞的百分比.结果:在H2O2的作用下,原代培养的SGCs随着H2O2浓度的增加以及作用时间的延长,受损伤的细胞数目呈增加趋势.同时,低浓度(100及200 μmol/L)H2O2作用下,SGCs的损伤主要以凋亡表现为主,PI染色多为阴性;高浓度H2O2(500μmol/L)作用下的SGCs损伤以坏死为主.结论:H2O2可以引起SGCs凋亡,且作用有明显的剂量及时间依赖性.凋亡的发生可能和凋亡相关基因的启动有关,但仍需进一步实验证实.     

Expression of Vascular Endothelial Growth Factor and Cyclooxygenase-2 in Laryngeal Squamous Cell Carcinoma and Its significance

n order to study the expressions of vascular endothelial growth factor （VEGF） and cyclooxygenase-2 （COX-2） in human laryngeal squamous cell carcinoma （LSCC） and its significance, the expression of VEGF mRNA and COX-2 mRNA in 62 cases of LSCC and 54 adjacent noncancerous laryngeal tissues and 9 normal human laryngeal mucous tissues was detected by using techniques of semi-quantitative RT-PCR. It was found that the expression level of VEGF and COX-2 mRNA was significantly increased in LSCC as compared with that in the normal human laryngeal mucous tissues （both P〈0. 01）, and the expression level of VEGF and COX-2 mRNA were significantly increased in stage Ⅲ＋ Ⅳtissues of LSCC as compared with the stage Ⅰ ＋ Ⅱ tissues of LSCC （P 〈0.01）. There was a high positive correlation between VEGF and COX-2 expression in LSCC （r= 0. 756,P〈0.01）. These data raise the possibility that VEGF and COX-2 may play key roles in the growth, invasion and metastasis of LSCC.     

谷氨酸对体外培养螺旋神经节细胞的损伤作用

目的：探讨谷氨酸对体外原代培养的大鼠耳蜗螺旋神经节细胞（SGC）兴奋性毒性作用。方法：SGC在体外培养4d，加入1mmol／L谷氨酸，继续培养24h后，用荧光显微镜观察Annexin-V-FITC和PI双标的细胞形态改变，以及用激光共聚焦方法观察细胞内游离钙离子浓度的变化。结果：体外培养4d的SGC，用1mmol／L谷氨酸处理24h后，与对照组相比，出现大量的细胞受损，表现为死亡或凋亡（P〈0．05）；用Fluo-3染色，激光共聚焦显微镜观察，加入谷氨酸后，80％的SGC细胞内钙离子迅速增加，150s达到高峰。结论：谷氨酸诱导的SGC钙离子内流与细胞受损有明显的关系。     

人Bcl-2基因重组腺病毒的构建及其在螺旋神经节细胞中的表达

目的构建表达人Bcl-2基因的重组腺病毒，并研究其在原代培养螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells，SGC)的表达特性。方法采用细菌内同源重组法，从pUC-CAGGS,／Bcl-2质粒中获得人Bcl-2 cDNA，克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上，后者和腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在细菌内同源重组，在HEK293细胞中包装成为重组Ad增强型绿色荧光蛋白／Bcl-2腺病毒，电镜观察病毒颗粒，用病毒感染原代培养的大鼠螺旋神经节细胞，在荧光显微镜下观察感染效率，用逆转录聚合酶链反应方法检测Bcl-2基因在螺旋神经节细胞的转录表达，用Western Blot检测其蛋白的表达。结果经酶切鉴定证实重组腺病毒质粒构建成功，电镜显示包装细胞中有大量病毒颗粒存在，呈规则六边形。荧光显微镜下观测到感染病毒的SGC细胞发出明亮的绿色荧光。分别在mRNA水平及蛋白水平证实有外源性Bcl-2基因的表达。结论细菌内同源重组法是一种简便、高效的制备方法。构建的重组Ad增强型绿色荧光蛋白／Bcl-2腺病毒能有效的感染SGC，并可在SGC中正确地转录和翻译，为进一步研究腺病毒介导的Bcl-2基因对螺旋神经节损伤的保护作用奠定基础。     

JNK信号通路在老年大鼠耳蜗细胞凋亡中的作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(c-Juna mino-terminal kinase,JNK)信号通路在老年大鼠耳蜗细胞凋亡中的作用,为老年性聋的预防和治疗提供更多的切入点。方法Wistar大鼠24只,其中12只为对照组(3～4月龄),12只为自然衰老组(22～24月龄);听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测听力学改变;采用透射电镜观察老年大鼠耳蜗的超微病理变化;用免疫组化及Western blotting方法检测p-JNK和p-c-Jun蛋白的表达。结果老年组大鼠听力〔(72.083±13.345)dBSPL〕较对照组〔(32.083±3.878)dBSPL〕明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01);透射电镜下可见外毛细胞有凋亡样改变,螺旋神经节细胞内大量脂褐素沉着;在耳蜗石蜡切片中可观察到p-JNK和p-c-Jun免疫反应阳性细胞,定位于细胞核,老年组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);Western blotting结果显示老年组内耳组织p-JNK和p-c-Jun的蛋白表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在大鼠老年性聋的发生过程中,各种损伤因素可能通过激活JNK信号通路而促使耳蜗细胞的凋亡。