血管内皮生长因子及受体在喉癌细胞Hep-2中的表达及意义

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)及受体Flt1和KDR在喉癌细胞Hep2中的表达及其与喉癌细胞的生长、浸润及转移的关系。方法:培养Hep2和Hacat细胞,提取总细胞RNA,应用RTPCR方法检测VEGFmRNA在Hep2和Hacat细胞中的表达;Flt1mRNA和KDRmRNA在Hep2细胞中的表达。结果:VEGFmRNA在Hep2细胞中高表达,在Hacat细胞中低表达,其差异有统计学意义(P<0.01)。在Hep2细胞中有flt1mRNA表达,平均积分吸收度(A值)为0.73886±0.13779;未检测到KDRmRNA表达。结论:VEGF及其受体与喉癌细胞的生长、浸润及转移有密切关系。     

腺病毒介导Bcl-2基因对原代螺旋神经节细胞存活的促进作用

目的研究外源性细胞凋亡相关基因Bcl-2对原代培养的螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGCs)存活及突起生长的影响,以期找到保护SGCs的有效方法。方法大鼠螺旋神经节细胞原代培养,免疫印迹法(western blot)检测转染AdEasy系统构建携带Bcl-2和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)的腺病毒后SGCs表达Bcl-2蛋白的水平。免疫细胞组织化学染色鉴定螺旋神经节细胞,计数SGCs的数目。结果AdEGFP/Bcl-2组SGCs的存活数目分别高于AdEGFP组及空白对照组,AdEGFP组的存活SGCs细胞数略少于空白对照组。结论Bcl-2蛋白能促进体外SGCs细胞存活,腺病毒本身有轻微的细胞毒性,但表达外源性Bcl-2基因却可以保护SGCs不受腺病毒细胞毒性损害。     

内质网应激在老年大鼠耳蜗细胞凋亡中的作用

目的探讨内质网应激在老年大鼠耳蜗细胞凋亡中的作用,从而进一步探索老年性聋的发病机制。方法Wistar大鼠24只,其中12只为对照组(3～4月龄),12只为自然衰老组(22～24月龄);比色法测定内耳组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),丙二醛(malondialchehyche,MDA)水平;ABR检测听力学改变;免疫组化及western blot检测GRP78/BiP和Caspase-12蛋白的表达。结果老年大鼠听力下降;内耳组织SOD活性降低,MDA升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);耳蜗切片中及western blot结果可见GRP78的表达与对照组相比差异无统计学意义(P<0.05);caspase-12的表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论内质网凋亡途径是老年大鼠老年性聋的发生机制之一。     

血管内皮生长因子及其双受体系统在鼻咽癌中的表达

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)及其双受体系统串珠素、Flt-1在鼻咽癌(NPC)中的表达,探讨它们与NPC的增生、浸润及转移的关系。方法应用反转录-聚合酶链反应方法检测26例NPC及相应癌旁组织和10例正常鼻咽黏膜组织中VEGF、串珠素和Flt-1 mRNA的表达。结果 VEGF、串珠素和Flt-1 mRNA在NPC组织中的表达高于在癌旁组织和正常鼻咽黏膜组织中的表达(P<0.01)。VEGF、串珠素和Flt-1 mRNA在癌旁组织和正常鼻咽黏膜组织中的表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。VEGF、Flt-1和串珠素mRNA在有淋巴结转移的NPC组织和无淋巴结转移NPC组织中的表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 VEGF及其双受体系统串珠素和Flt-1与NPC的生长、浸润有密切关系。     

慢病毒载体和腺病毒载体转染原代培养的螺旋神经节细胞的比较

目的:比较慢病毒载体和腺病毒载体转染新生大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(SGCs)的不同转染特性.方法:体外培养新生大鼠SGCs,适当滴度的慢病毒载体和腺病毒载体转染SGCs,于病毒转染后3 d(培养后6 d)和转染后7 d(培养后10 d),荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白报告基因(GFP)表达情况和SGCs的细胞形态.行SGC...     

内质网分子伴侣GRP78在拟老化大鼠耳蜗中变化的研究

目的:探讨内质网分子伴侣GRP78在拟老化大鼠耳蜗中的变化,研究老年性聋的发病机制。方法:Wistar大鼠24只,随机分为对照组与模型组,每组12只。对照组每日生理盐水1ml皮下注射,模型组10%D-半乳糖颈部皮下注射(800mg·kg-1.d-1),时间均为8周。用Morris水迷宫检测2组动物空间学习记忆能力;比色法测定内耳组织膜迷路中超氧化物岐化酶及丙二醛的水平;ABR检测听力学改变,免疫组织化学、RT-PCR及Westernblot检测内质网分子伴侣GRP78的表达。结果:模型组动物有空间记忆障碍伴随超氧化物岐化酶活性降低,丙二醛升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);模型组听力学改变与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);模型组动物的内耳组织GRP78含量在分子及蛋白表达水平均明显升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:在D-半乳糖制备亚急性衰老动物模型的过程中,内耳组织氧化-抗氧化平衡被破坏;内质网分子伴侣GRP78在拟老化大鼠耳蜗组织中有明显变化,推测其参与了内耳损伤的过程。     

血管内皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子在喉癌细胞Hep-2中的表达

目的研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblast growth factor,bFGF)在喉癌细胞Hep-2中的表达,及其与喉癌细胞生长、浸润及转移的关系。方法培养Hep-2和正常永生化表皮细胞HaCaT,提取总细胞RNA,应用逆转录聚合酶链反应检测VEGF mRNA和bFGF mRNA在Hep-2和HaCaT细胞中的表达。结果VEGF mRNA在Hep-2细胞中高表达,平均相对积分吸光度值为(0.839±0.063);VEGF mRNA在HaCaT细胞中低表达,平均相对积分吸光度值为(0.305±0.066),差异有极显著性意义(t=14.94,P<0.01)。bFGF mRNA在Hep-2细胞中高表达,平均相对积分吸光度值为(0.792±0.058);bFGF mRNA在HaCaT细胞中低表达,平均相对积分吸光度值为(0.296±0.049),差异有极显著性意义(t=17.54,P<0.01)。结论VEGF及bFGF与喉癌细胞的生长、浸润及转移有密切关系。     

腺病毒介导的Bcl-2基因对原代螺旋神经节细胞氧化应激损伤保护作用的研究

目的 研究腺病毒介导Bcl-2基因对于原代培养螺旋神经节细胞氧化应激损伤的作用.方法 大鼠螺旋神经节细胞原代培养,分AdEGFP加100 μmol/L H2O2作用组(A组)及AdEGFP/Bcl-2加100 μmol/L H2O2作用组(B组).hochest33258及PI染色,计数受损伤细胞的百分比.结果 100 μmol/L H2O2作用下细胞受损伤的方式主要以早期凋亡表现为主.B组中受损伤细胞的数目较A组明显减少,两组差异有显著性(P<0.01).结论 腺病毒介导Bcl-2蛋白表达可以抑制H2O2诱导螺旋神经节细胞凋亡的发生.     

螺旋神经节细胞无血清培养方法的研究

目的：通过对比不同培养条件下螺旋神经节细胞（SGCs）的生长特性,从而确定一种可以获得足够数量和纯度的SGCs体外培养的最佳方法。方法：采用出生3d内的SD大鼠,取螺旋神经节组织,观察有血清培养基及无血清培养基,加或不加阿糖胞苷（Ara—c）对体外培养SGCs纯度及活性的影响。免疫组织化学鉴定培养的螺旋神经节细胞。结果：使用DMEM／F12培养基及B27添加剂,联合5μmol／L Ara-c作用48h,能有效抑制非神经细胞增殖,得到比较纯的SGCs。通过hochest33258及PI双标,发现Ara-C对SGCs毒性较小。得到的细胞经免疫组织化学抗神经丝蛋白抗体证实为SGCs。结论：本实验建立的方法,所获得的SGCs纯度较高,细胞活性保持良好,为体外研究外周听觉系统疾病提供了重要方法。