甲状腺素是调节耳蜗马达蛋白Prestin的重要决定因素

外毛细胞具有在高频声作用下改变其长度的能力,这使得哺乳动物听觉器官表现出高敏感性及频率的分辨能力。Prestin是近来被识别的一种外毛细胞马达蛋白,它在外毛细胞高表达,而内毛细胞不表达,定位在外毛细胞的外膜上,已发现Prestin与外毛细胞的电运动性有密切关系。该文旨在研究Prestin基因的转录调控以及上下游级联,以期从新的视角探索先天性或者获得性听力丧失的病因。     

机械感受器换能的分子基础

将机械性刺激转换为电信号的过程即为机械性换能。从果蝇的剐毛感受器及蠕虫的触觉感受器到脊椎动物的毛细胞和皮肤感受器，机械敏感性细胞对于有机体的生命活动是至关重要的。本文将对其换能机制的分子基础进行阐述。     

鼠尾胶原在原代培养耳蜗血管纹边缘细胞中的应用

目的：建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。方法：制作鼠尾胶原,并观察利用自制的鼠尾胶原所培养出大鼠耳蜗边缘细胞的效果。结果：自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞,细胞角蛋白18表达阳性,免疫组织化学结果和扫描电镜证实所培养的细胞具有典型的分泌上皮细胞特征。结论：成功建立了利用自制鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法,并且制作简便,成本低廉。     

Plastic Changes of Synapses and Excitatory Neurotransmitter Receptors in Facial Nucleus Following Facial-facial Anastomosis

The remodeling process of synapses and neurotransmitter receptors of facial nucleus were observed. Models were set up by facial-facial anastomosis in rat. At post-surgery day （PSD） 0,7,21and 60, synaptophysin （p38）, NMDA receptor subunit 2A and AMPA receptor subunit 2 （GluR2） were observed by immunohistochemical method and semi-quantitative RT-PCR, respectively. Mean-while, the synaptic structure of the facial motorneurons was observed under a transmission electron microscope （TEM）. The intensity of p38 immunoreactivity was decreased, reaching the lowest value at PSD day 7, and then increased slightly at PSD 21. Ultrastructurally, the number of synapses in nucleus of the operational side decreased, which was consistent with the change in P38 immunoreactivity. NMDAR2A mRNA was down-regulated significantly in facial nucleus after the operation （P〈0.05）, whereas AMPAR2 mRNA levels remained unchanged （P〉0.05）. The synapses innervation and the expression of NMDAR2A and AMPAR2 mRNA in facial nucleus might be modified to suit for the new motor tasks following facial-facial anastomosis, and influenced facial nerve regeneration and recovery.     

大鼠面神经损伤修复晚期面神经核的基因表达谱

目的:筛选外周损伤修复晚期面神经核区的差异表达基因。方法:建立大鼠面神经断伤吻合模型,90 d后准确解剖定位获取健患两侧面神经核组织的总RNA,再以其逆转录的c DNA为模板转录生成生物素标记的c RNA,纯化与片段化后形成探针并与大鼠基因表达谱芯片杂交,扫描仪检测信号后用生物学分析软件筛选差异表达基因并作初步功能分析。结果:基因芯片检测表明,患侧面神经核区检出1 660个基因,健侧检出1 683个基因,与健侧相比筛选出差异基因300个,其中上调157个(差异倍数≥2),下调143个(差异倍数≤-2)。GO分析电子功能注释发现,差异基因功能涉及代谢反应、细胞黏附、细胞因子、信号传递等。KEGG信号通路分析筛选出最可能相关的信号通路32个(P0.05),包括白细胞跨膜转运、黏着斑激酶途径等。结论:基因表达谱分析表明多基因、多信号通路参与外周损伤修复晚期面神经核内的塑形活动。     

腺病毒介导bcl-2基因转染对顺铂所致大鼠螺旋神经节细胞损伤的拮抗作用

目的 通过腺病毒(adenovirus,Ad)载体介导bcl-2基因转染体外培养的新生大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGC),探讨bel-2蛋白过度表达对顺铂所致SGC损伤的拮抗作用.方法 体外培养新生大鼠SGC,携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒载体Ad-GFP转染SGC,并行神经丝蛋白(NF200)免疫细胞化学染色鉴定,激光共聚焦扫描荧光显微镜下观察.携带bel-2基因的腺病毒载体Ad-bel-2转染SGC,蛋白质印迹法(Western Blot)检测bcl-2蛋白表达.设立Ad-bcl-2转染加顺铂组(A组),Ad-GFP转染加顺铂组(B组),顺铂组(C组)和正常对照组(D组),顺铂作用浓度为2μg,/ml;顺铂作用48 h后,行各组SGC计数,并通过lmageJ软件测量各组SGC轴突长度.结果 成功分离并培养新生大鼠SGC.激光共聚焦扫描荧光显微镜下观察到腺病毒载体可安全高效转染体外培养的SGC.Ad-bcl-2转染3 d后,Western Blot检测有外源性人bcl-2基因的高效表达,而Ad-GFP转染组和顺铂组未检测到表达.顺铂作用后,A、B、C组部分SGC细胞突起变短、萎缩,胞体缩小、变圆,甚至浮起.A组SGC数目明显多于B组和C组(P值均＜0.01),但少于D组(P＜0.05);A组SGC轴突长度明显长于B组和C组,但短于D组(P值均＜0.01).结论 腺病毒能够安全高效地转染体外培养的新生大鼠SGC.bel-2蛋白过表达对顺铂所致SGC损伤有一定的拮抗作用.     

认识小儿分泌性中耳炎

正小孩子感冒后耳朵痛是非常常见的现象,由于多数是短暂的疼痛,往往被家长忽略,而其中很多其实就是感冒引发的急性中耳炎,大多数情况下其实质是分泌性中耳炎,而不是化脓性中耳炎,多数小孩子在感冒消失后,中耳炎会自行好转,但是也有一部分会隐匿地存在,而不被小孩子注意,从而成为慢性分泌性中耳炎。知道了上述过程,家长对于小孩子感冒后的一过性耳朵不适,应该记忆在心,在适当的时候到耳科门诊检查一下,以便排除分泌     

Axl基因在喉癌细胞Hep-2中的表达及意义

目的：研究Axl 基因在喉癌细胞Hep-2中的表达,探讨Axl 基因与喉癌细胞的增值、浸润及转移的关系。方法提取Hep-2和人永生化表皮细胞Hacat细胞RNA,应用RT-PCR检测Axl mRNA的表达;应用免疫细胞化学染色检测Axl蛋白质在细胞Hep-2和Hacat中的表达。结果 AxlmRNA在Hep-2细胞中高表达,平均相对积分吸光密度值为：0．8601±0．0409;Axl mRNA 在 Hacat 细胞中低表达,平均相对积分吸光密度值为：0．2637±0.0503,差异有统计学意义（t＝18．682,P＜0．01）。免疫细胞化学染色表明 Axl在 Hep-2细胞中高表达,平均吸光密度值为：0．2621±0．0238;在 Hacat细胞中低表达,平均吸光密度为：0．0729±0．0201,差异有统计学意义（t ＝25.938,P＜0.01）。结论 Axl与喉癌细胞Hep-2的增值、浸润及转移有密切关系。     

串珠素反义cDNA质粒转染对喉癌细胞Hep-2增殖能力的影响

目的：研究串珠素反义cDNA质粒转染对喉癌细胞Hep-2增殖能力的影响。方法：利用阳离子脂质体作为载体，把重组真核表达载体串珠素反义cDNA质粒pAP转染喉癌细胞Hep-2。通过RT—PCR、Westernblot及MTT法检测转染后Hep-2细胞串珠素mRNA、蛋白质表达及细胞增殖水平，并观察转染后Hep-2细胞对碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的反应性。将Hep2细胞分3组：①未转染的Hep-2细胞组（WT组）；②空载体ph8Apr—neol转染组（neo组）；③串珠素反义cDNA质粒pAP转染组（pAP组）。结果：将质粒pAP成功地转入Hep2细胞，获得了稳定表达串珠素反义cDNA基因的细胞系。串珠素mRNA和蛋白质水平在pAP组低表达，在WT组和neo组高表达，均差异有统计学意义（均P〈O．01）。在0．1％FCS的RPMI1640培养基培养下，WT组、neo组和pAP组细胞的增殖率均降低，但pAP组细胞的增殖与WT组和neo组细胞相比明显减低；在0．1％FCS加1μg／L bFGF的RPMI1640培养液培养下．WT组和neo组细胞增殖接近正常，但pAP组细胞的增殖能力较弱。结论：串珠素反义cDNA质粒转染可以有效抑制喉癌细胞Hep2的增殖能力。     

串珠素在喉癌细胞Hep-2中的表达

目的:研究串珠素(perlecan)在喉癌细胞Hep-2中的表达,探讨其与喉癌细胞的生长、浸润及转移的关系。方法:培养Hep-2和正常永生化表皮细胞系(Hacat),提取总细胞RNA,应用RT-PCR方法检测串珠素mRNA在Hep-2和Hacat细胞中的表达;应用免疫组织化学染色检测串珠素在Hep-2细胞和Hacat细胞中的表达。结果:串珠素mRNA在Hep-2细胞中高表达,平均相对积分吸收度(A)值为:0.831 0±0.050 4;串珠素mRNA在Hacat细胞中低表达,平均相对积分A值为:0.274 3±0.062 9。差异有统计学意义(t=19.684,P<0.01)。免疫组织化学染色表明串珠素在Hep-2细胞中高表达(A=0.255 7±0.028 7),在Hacat细胞中低表达(A=0.073 0±0.011 1),差异有统计学意义(t=26.982,P<0.01)。结论:串珠素与喉癌细胞的生长、浸润及转移有密切关系。